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牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定
被引量：
2
1
作者
武春霞
周雅坪
+6 位作者
郭婷
崔琦
王宇琛
田广原
思汗
孙衍立
郝永清
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第9期3438-3446,共9页
本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体...
本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后,对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收,构建重组质粒pET-32a-G,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白,并测定其浓度;通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示,本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因,获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白,优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大;通过Western blotting检测发现,重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有反应原性。综上,本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白,为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。
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关键词
牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)
G蛋白
原核表达
可溶性表达
反应原性
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职称材料
题名
牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定
被引量：
2
1
作者
武春霞
周雅坪
郭婷
崔琦
王宇琛
田广原
思汗
孙衍立
郝永清
机构
内蒙
古农业大学
呼伦贝
尔市
动物疫病预防控制中心
内蒙古巴彦淖尔市临河区农牧业局
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021年第9期3438-3446,共9页
基金
内蒙古自治区科技计划项目“牛羊重要疫病免疫与分子快速检测新技术研发”(2019GG240)。
文摘
本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列,分析其抗原区域,利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段,将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后,对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收,构建重组质粒pET-32a-G,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白,并测定其浓度;通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示,本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因,获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白,优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定,在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大;通过Western blotting检测发现,重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应,说明该蛋白具有反应原性。综上,本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白,为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。
关键词
牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)
G蛋白
原核表达
可溶性表达
反应原性
Keywords
Bovine respiratory syncytial virus(BRSV)
G protein
prokaryotic expression
soluble expression
reactogenicity
分类号
S852.653 [农业科学—基础兽医学]
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作者
出处
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被引量
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1
牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定
武春霞
周雅坪
郭婷
崔琦
王宇琛
田广原
思汗
孙衍立
郝永清
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2021
2
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