生物技术实验室废弃物的安全管理探究 被引量：4

1

作者 张立全 《现代农业科技》 2014年第1期238-240,共3页

实验室是高校或科研机构教学、科研工作的重要场所,实验室废弃物的安全处理是实验室管理工作的重点之一。废弃物的直接排放,对人身安全和环境污染造成潜在的威胁。生物技术实验室废弃物复杂多样,为了加强生物技术实验室废弃物的管理,通... 实验室是高校或科研机构教学、科研工作的重要场所,实验室废弃物的安全处理是实验室管理工作的重点之一。废弃物的直接排放,对人身安全和环境污染造成潜在的威胁。生物技术实验室废弃物复杂多样,为了加强生物技术实验室废弃物的管理,通过借鉴学习国外3所大学实验室废弃物的处理手册,提出了生物技术实验室废弃物的类型及处理原则和常规方法,旨在为生物技术实验室废弃物安全管理提供参考。 展开更多

关键词 生物技术实验室 废弃物 处理原则 处理方法

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用农杆菌介导的生长点转化方法建立甜瓜遗传转化技术 被引量：6

2

作者 郝金凤 荆培培 +1 位作者 张丽 哈斯阿古拉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期116-120,共5页

为探讨甜瓜的遗传转化技术,以甜瓜品种河套蜜瓜腋芽生长点做外植体,利用庆大霉素基因作为筛选基因,对影响农杆菌转化的菌液浓度、转化时间、共培养时间进行了正交试验。通过优化转化条件,建立了农杆菌介导的甜瓜腋芽生长点遗传转化体系... 为探讨甜瓜的遗传转化技术,以甜瓜品种河套蜜瓜腋芽生长点做外植体,利用庆大霉素基因作为筛选基因,对影响农杆菌转化的菌液浓度、转化时间、共培养时间进行了正交试验。通过优化转化条件,建立了农杆菌介导的甜瓜腋芽生长点遗传转化体系。结果表明,采用培养20 d的无菌苗,以腋芽作为外植体,预培养1 d;用OD600=0.7的菌液转化10 min后,黑暗中共培养2 d,然后用40 mg/L庆大霉素进行筛选;移栽后在叶片上喷洒20 mg/L庆大霉素筛选转基因植株,效果最好。通过对庆大霉素抗性苗进行PCR检测,初步验证外源基因已经整合进甜瓜基因组,转化率达到76%,幼苗移栽成活率为76.3%。 展开更多

关键词 甜瓜 植物生长点 遗传转化 农杆菌

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜瓜HDM基因家族鉴定及特性分析 被引量：2

3

作者 张治 张婧 +2 位作者 张瑾 哈斯阿古拉 郝金凤 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期168-180,共13页

组蛋白去甲基化酶(histone demethylase,HDM)是生物生长过程中的重要调节因子之一,在植物的生长发育和环境适应过程中发挥着重要的调控作用。本研究通过生物信息学方法对甜瓜(Cucumis melo L.) HDM基因家族进行了鉴定,并通过转录组数据... 组蛋白去甲基化酶(histone demethylase,HDM)是生物生长过程中的重要调节因子之一,在植物的生长发育和环境适应过程中发挥着重要的调控作用。本研究通过生物信息学方法对甜瓜(Cucumis melo L.) HDM基因家族进行了鉴定,并通过转录组数据检测了其成员在甜瓜组织的表达特性。结果显示,在甜瓜基因组中鉴定得到了20个CmHDM基因,在各条染色体上非均匀分布;其成员可以分成LSD1和JmjC两大类,而JmjC类群又可划分为5个亚群,各类群成员数量不等;种内和种间的共线性关系显示,甜瓜HDM基因仅存在一对片段重复,与番茄(Solanum lycopersicum) HDM基因共线性区域较多,亲缘关系较近;各成员所含保守结构域数量不等,且外显子和内含子在数量上有所差异;在启动子区域存在多种与激素和环境信号响应的顺式作用元件,表达特性分析显示各基因成员在甜瓜雄花、雌花、根、茎、叶、子房和成熟果实中均存在不同程度的表达。这些结果将有助于更好地理解HDM基因的潜在功能以及它们在参与调节甜瓜生长发育和环境自适中可能发挥的作用。 展开更多

关键词 甜瓜 HDM家族 基因鉴定 表达分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

紫花苜蓿耐盐性研究进展 被引量：49

4

作者 张立全 张凤英 哈斯阿古拉 《草业学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期296-305,共10页

紫花苜蓿(Medicago sativa)是世界上最重要的豆科牧草之一,但盐渍化土地严重制约着其种植范围。培育耐盐新品种是降低盐渍化土地对紫花苜蓿生长和产量影响的有效途径。笔者综述了紫花苜蓿耐盐生理、盐诱导相关基因以及耐盐性育种方面的... 紫花苜蓿(Medicago sativa)是世界上最重要的豆科牧草之一,但盐渍化土地严重制约着其种植范围。培育耐盐新品种是降低盐渍化土地对紫花苜蓿生长和产量影响的有效途径。笔者综述了紫花苜蓿耐盐生理、盐诱导相关基因以及耐盐性育种方面的主要进展,并对紫花苜蓿耐盐性研究的前景进行了讨论。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 耐盐基因 耐盐生理 传统育种 基因工程育种

在线阅读 下载PDF 职称材料

唐古特白刺质膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆与表达分析 被引量：13

5

作者 郑琳琳 张慧荣 +1 位作者 贺龙梅 王迎春 《草业学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期179-186,共8页

土壤中过多的Na+会导致植物产生盐害,严重影响植物的生长和发育。质膜型Na+/H+逆向转运蛋白SOS1介导植物细胞内过量的Na+外排,在植物抵御盐胁迫过程中起着重要的作用。唐古特白刺隶属于蒺藜科白刺属,是中国特有的盐生植物,主要生长于西... 土壤中过多的Na+会导致植物产生盐害,严重影响植物的生长和发育。质膜型Na+/H+逆向转运蛋白SOS1介导植物细胞内过量的Na+外排,在植物抵御盐胁迫过程中起着重要的作用。唐古特白刺隶属于蒺藜科白刺属,是中国特有的盐生植物,主要生长于西北地区的荒漠或盐渍化荒漠,具有极强的抗逆能力。应用简并RT-PCR及RACE技术克隆获得唐古特白刺Na+/H+逆向转运蛋白NtSOS1基因(GenBank登录号KC292267)。序列分析显示,该cDNA全长4 008bp,包含3 492bp的开放阅读框,编码分子量为127.59kDa的蛋白质。疏水性分析预测NtSOS1基因编码蛋白N端具有11个跨膜结构域,C端具有一个面向胞质的长亲水尾部,包含保守环核苷酸结合区域、自我抑制基序及磷酸化位点等多个活性调控结构域。NtSOS1氨基酸序列与葡萄、霸王、拟南芥等植物的SOS1序列同源性较高,分别可达71.77%,68.94%,62.65%。系统发育分析表明NtSOS1基因为质膜型Na+/H+逆向转运蛋白,与液泡型Na+/H+逆向转运蛋白属于不同分支。半定量RT-PCR结果显示冷、热、盐和干旱胁迫都可以诱导NtSOS1基因的表达,同时,NtSOS1基因随着盐处理浓度增加呈现出先上升(0～300 mmol/L)后下降(400mmol/L)的趋势。结合植物的生境特点和NtSOS1表达模式分析,该基因表达水平的升高可能在唐古特白刺适应恶劣生境的过程中发挥积极作用。本研究的开展为利用NtSOS1基因进行作物与牧草改良并深入研究唐古特白刺抗逆分子机制奠定了基础。 展开更多

关键词 盐生植物 唐古特白刺 质膜Na+ H+逆向转运蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

通过花粉管通道法导入红树总DNA获得耐盐紫花苜蓿T_0代植株及其RAPD验证 被引量：10

6

作者 张立全 牛一丁 +1 位作者 郝金凤 哈斯阿古拉 《草业学报》 CSCD 北大核心 2011年第3期292-297,共6页

利用花粉管通道法将盐生植物红树总DNA导入紫花苜蓿,共导入1 391朵花,获得894粒T0代转化种子。T0代种子种植在含有225 mmol/L NaCl的MS培养基上,获得12株耐盐性强的植株。以供体和受体为对照,对12株耐盐植株进行RAPD分析,在55条随机引... 利用花粉管通道法将盐生植物红树总DNA导入紫花苜蓿,共导入1 391朵花,获得894粒T0代转化种子。T0代种子种植在含有225 mmol/L NaCl的MS培养基上,获得12株耐盐性强的植株。以供体和受体为对照,对12株耐盐植株进行RAPD分析,在55条随机引物中有8条扩增出稳定、清晰的条带,条带的差异性表现为新增条带、供体特异条带和受体条带丢失。以上结果初步证实外源DNA已经整合到受体的基因组中,而且T0代植株耐盐能力提高可能与外源基因的导入有关。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 红树 花粉管通道法 耐盐 RAPD

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜瓜乙烯应答因子基因在果实发育成熟过程中的表达特性 被引量：7

7

作者 高峰 怡荣 +2 位作者 郝金凤 哈斯阿古拉 牛一丁 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期886-889,共4页

根据已报道的甜瓜CMe-ERF1和CMe-ERF2基因cDNA序列设计合成特异性引物,应用RT-PCR技术从甜瓜品种‘河套蜜瓜’成熟果实中克隆得到CMe-ERF1和CMe-ERF2基因cDNA全长编码区序列,分别为498bp和822bp.序列比对分析表明,得到的cDNA序列与已报... 根据已报道的甜瓜CMe-ERF1和CMe-ERF2基因cDNA序列设计合成特异性引物,应用RT-PCR技术从甜瓜品种‘河套蜜瓜’成熟果实中克隆得到CMe-ERF1和CMe-ERF2基因cDNA全长编码区序列,分别为498bp和822bp.序列比对分析表明,得到的cDNA序列与已报道的Andes甜瓜相应基因的cDNA序列完全一致.果实不同发育时期实时定量PCR检测结果表明,CMe-ERF1、CMe-ERF2基因表达与甜瓜果实成熟及乙烯生成量显著相关,表明该基因可能对果实成熟起重要作用. 展开更多

关键词 甜瓜 乙烯应答因子 乙烯 CMe-ERF

在线阅读 下载PDF 职称材料

转红树总DNA紫花苜蓿T_1代耐盐株系的生理生化特性分析 被引量：5

8

作者 张立全 敖登花 +3 位作者 师文贵 牛一丁 韩岚 哈斯阿古拉 《草业学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期149-155,共7页

以花粉管通道法转红树总DNA紫花苜蓿阿尔冈金T1代耐盐植株幼苗为材料,经300mmol/L NaCl处理后,测定叶绿素、脯氨酸、丙二醛含量和抗氧化酶活性等耐盐相关生理生化指标。结果显示,转基因株系叶绿素含量下降0.09～0.29倍,而对照植株下降0... 以花粉管通道法转红树总DNA紫花苜蓿阿尔冈金T1代耐盐植株幼苗为材料,经300mmol/L NaCl处理后,测定叶绿素、脯氨酸、丙二醛含量和抗氧化酶活性等耐盐相关生理生化指标。结果显示,转基因株系叶绿素含量下降0.09～0.29倍,而对照植株下降0.32倍;转基因株系脯氨酸含量升高1.2～4.2倍,对照植株的脯氨酸升高0.9倍;转基因株系丙二醛含量升高0.15～0.29倍,对照植株的丙二醛含量升高0.36倍;转基因株系超氧化物歧化酶活性升高0.20～0.25倍,对照植株的超氧化物歧化酶活性升高0.19倍;转基因株系过氧化物酶和过氧化氢酶活性分别是对照的1.6～5.6倍和1.2～1.3倍。转基因株系表现出耐盐植物的生理生化特性。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 花粉管通道法 红树总DNA T1代株系 耐盐

在线阅读 下载PDF 职称材料

苜蓿属植物转录因子研究进展 被引量：13

9

作者 张立全 李慧 +1 位作者 张凤英 哈斯阿古拉 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期108-116,共9页

苜蓿是世界上最重要的豆科作物之一,综述了苜蓿属植物转录因子研究的主要进展,并对其研究和应用前景进行了展望。

关键词 苜蓿 转录因子 研究进展

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR2的克隆及其在果实发育成熟过程中表达特性的分析 被引量：4

10

作者 郝金凤 王雪飞 +2 位作者 怡荣 哈斯阿古拉 牛一丁 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第2期40-43,共4页

为研究Cm-ETR2基因在甜瓜果实发育成熟过程中的作用机理,根据已报道的甜瓜(Cucumis melo)品种Cantalupensis的Cm-ETR2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR技术从甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumis melo L.cvHetao)成熟果实中克隆得到了乙烯受体... 为研究Cm-ETR2基因在甜瓜果实发育成熟过程中的作用机理,根据已报道的甜瓜(Cucumis melo)品种Cantalupensis的Cm-ETR2基因序列,设计特异性引物,通过RT-PCR技术从甜瓜品种河套蜜瓜(Cucumis melo L.cvHetao)成熟果实中克隆得到了乙烯受体基因Cm-ETR2 cDNA,序列分析显示,序列长度为2 304 bp,编码767个氨基酸。利用实时荧光定量RT-PCR方法,对其在河套蜜瓜果实发育成熟过程中的表达特性进行了分析,Cm-ETR2基因在15DAP至30DAP表达基本没有变化,35DAP表达量开始上升,上升趋势一直持续至45DAP,且45DAP表达量为15DAP的9倍。 展开更多

关键词 甜瓜 乙烯受体 ETR2 果实成熟 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2超表达载体构建及紫花苜蓿转化研究 被引量：5

11

作者 郑琳琳 王佳 +2 位作者 贺龙梅 王学峰 王迎春 《草业学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期223-229,共7页

环境因素如高盐、干旱或冷冻等严重制约着豆科重要牧草紫花苜蓿的生长发育和产量。根据已发表的盐生植物唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2的序列信息(序列号KC823044),利用PCR方法扩增其编码区cDNA,连接pMD-19Tsimple载体并测序,测序结果... 环境因素如高盐、干旱或冷冻等严重制约着豆科重要牧草紫花苜蓿的生长发育和产量。根据已发表的盐生植物唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2的序列信息(序列号KC823044),利用PCR方法扩增其编码区cDNA,连接pMD-19Tsimple载体并测序,测序结果表明所克隆的DNA片段长度为1362bp,与GenBank上公布的序列完全一致。在此基础上构建植物超表达载体pPZP221-NtCIPK2,采用CaCl2冻融法将该表达载体转入农杆菌GV3101中,然后通过农杆菌介导的方法转化紫花苜蓿的下胚轴,形成愈伤组织后经庆大霉素筛选培养,最终获得7株抗性幼苗。对抗性幼苗进行庆大霉素基因的PCR检测,结果表明,NtCIPK2基因成功整合到紫花苜蓿基因组中,进一步对其进行外源基因的RT-PCR检测,发现只有3株幼苗中的外源基因实现了过量表达,这可能是由于基因插入位点的差异引发的基因沉默所致。本研究的开展为进一步分析转化植株在各种逆境胁迫条件的表现及其遗传稳定性,培育具有多重抗逆能力的苜蓿品种,促进苜蓿产业发展奠定基础。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 NtCIPK2基因 超表达载体 遗传转化

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1 cDNA的克隆及表达特性分析 被引量：3

12

作者 陈宇杰 陈明 +3 位作者 乌兰巴特尔 郝金凤 高峰 哈斯阿古拉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期54-59,共6页

乙烯感知和信号转导的初始成分是乙烯受体,为探明甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1在甜瓜果实成熟过程中的作用,以甜瓜品种河套蜜瓜为材料,根据GenBank中登录的甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1的cDNA序列(登录号为AF054806),设计合成特异性引物,采用RT-... 乙烯感知和信号转导的初始成分是乙烯受体,为探明甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1在甜瓜果实成熟过程中的作用,以甜瓜品种河套蜜瓜为材料,根据GenBank中登录的甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1的cDNA序列(登录号为AF054806),设计合成特异性引物,采用RT-PCR技术克隆得到Cm-ETR1基因全长cDNA序列,提交到GenBank中(登录号为EF495185)。序列分析表明,序列长度为2 256 bp,编码区为2 223 bp,编码740个氨基酸,与已报道的cantalupenis甜瓜ETR1基因的cDNA序列完全一致。Cm-ETR1蛋白的系统进化树分析结果表明,该乙烯受体蛋白在各物种间高度保守,与黄瓜乙烯受体蛋白相似性最高,一致性为99%,与龙眼乙烯受体蛋白相似性最低,一致性为86%。定量PCR分析结果显示,随着甜瓜果实内源乙烯合成量和成熟程度的增加,Cm-ETR1基因的表达量同步增加,在果实乙烯跃变期,Cm-ETR1的表达量也达到最高值,内源乙烯合成量与Cm-ETR1基因表达量间呈显著正相关,表明Cm-ETR1基因在甜瓜果实成熟过程中可能具有重要的作用。 展开更多

关键词 甜瓜 乙烯受体 Cm-ETR1 果实成熟 基因表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

泌盐植物长叶红砂质膜Na＋/H＋逆向转运蛋白基因(RtSOS1)全长cDNA的克隆及序列分析 被引量：4

13

作者 党振华 郑琳琳 +1 位作者 冯智 王迎春 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期1-6,共6页

长叶红砂为内蒙古东阿拉善-西鄂尔多斯地区特有珍稀泌盐,强旱生小灌木,对盐渍荒漠环境具有极强适应性。利用RT-PCR和RACE技术从该植物中分离出质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(RtSOS1),该cDNA全长为3 829bp,开放阅读框为3 438 bp,编码一个含... 长叶红砂为内蒙古东阿拉善-西鄂尔多斯地区特有珍稀泌盐,强旱生小灌木,对盐渍荒漠环境具有极强适应性。利用RT-PCR和RACE技术从该植物中分离出质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(RtSOS1),该cDNA全长为3 829bp,开放阅读框为3 438 bp,编码一个含1 145个氨基酸的蛋白质,推测分子量为126.76 kDa。氨基酸序列的生物信息学分析推测,该蛋白N端含有11个跨膜结构域,C端为一个长约700个氨基酸的亲水性尾,具有磷酸化和自我抑制结构域。同源性比对和系统发育分析证实,RtSOS1与其他植物的质膜Na+/H+逆向转运蛋白亲缘关系较近。 展开更多

关键词 长叶红砂 质膜Na+ H+逆向转运蛋白基因 全长CDNA克隆

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜瓜持绿蛋白基因家族的全基因组鉴定及进化分析 被引量：3

14

作者 巴德仁贵 赵乾 +2 位作者 任凤蕊 马勇 哈斯阿古拉 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第13期136-139,F0003,共5页

持绿蛋白在调节植物叶绿素降解和衰老过程中起到非常重要的作用,利用公布的甜瓜基因组数据,使用生物信息学方法对甜瓜全基因组SGR基因的结构、系统进化关系、保守基序及表达谱进行分析.结果表明：甜瓜中共有4个SGR类型基因,命名为CmSGR0... 持绿蛋白在调节植物叶绿素降解和衰老过程中起到非常重要的作用,利用公布的甜瓜基因组数据,使用生物信息学方法对甜瓜全基因组SGR基因的结构、系统进化关系、保守基序及表达谱进行分析.结果表明：甜瓜中共有4个SGR类型基因,命名为CmSGR01～CmSGR04,其蛋白质在167～257 aa之间,通过系统进化树分析,发现甜瓜与黄瓜属同一科,它们的SGR聚在一起,说明相对其他物种,二者的SGR蛋白在其他物种分化后进化较小;MEME软件分析发现了SGR基因含有5个保守的基序.通过甜瓜SGRs基因家族的系统分析,为进一步阐明甜瓜中SGR蛋白结构及功能提供理论基础和有价值的资料. 展开更多

关键词 甜瓜 持绿蛋白 基因家族 生物信息学分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

甜瓜14-3-3基因家族全基因组鉴定与进化分析 被引量：4

15

作者 马勇 刘嘉荣 +1 位作者 巴德仁贵 哈斯阿古拉 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第24期104-111,共8页

以拟南芥的14-3-3蛋白保守结构域为探针序列,对甜瓜全基因组的蛋白质数据库进行搜索,获得9个14-3-3蛋白序列,其中ε类5个、非ε类4个。对甜瓜14-3-3基因家族进行了系统发生分析、内含子数量分析、序列相似性比对,通过对所有甜瓜的14-3-... 以拟南芥的14-3-3蛋白保守结构域为探针序列,对甜瓜全基因组的蛋白质数据库进行搜索,获得9个14-3-3蛋白序列,其中ε类5个、非ε类4个。对甜瓜14-3-3基因家族进行了系统发生分析、内含子数量分析、序列相似性比对,通过对所有甜瓜的14-3-3蛋白相匹配的Unigene分析后发现,部分基因在多种组织中均有表达,部分基因在甜瓜果实以及花中高丰度特异表达,而且不同成员之间的表达模式存在较大差异。甜瓜14-3-3基因家族成员的分子进化及表达模式的研究结果表明基因重复后发生功能分化。 展开更多

关键词 甜瓜 14—3—3蛋白 基因家族 进化分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

卡那霉素对阿尔冈金种子萌发及幼苗生长的影响 被引量：1

16

作者 张立全 安娜 +1 位作者 黄杨梅 哈斯阿古拉 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期27-30,共4页

通过室内发芽试验,研究不同浓度卡那霉素溶液对紫花苜蓿品种阿尔冈金种子发芽和幼苗生长的影响,结果表明：0-100mg/L浓度卡那霉素对种子发芽势和幼苗主根粗没有显著影响,但明显影响种子发芽率和幼苗的株高、真叶数、主根长、侧根数和鲜... 通过室内发芽试验,研究不同浓度卡那霉素溶液对紫花苜蓿品种阿尔冈金种子发芽和幼苗生长的影响,结果表明：0-100mg/L浓度卡那霉素对种子发芽势和幼苗主根粗没有显著影响,但明显影响种子发芽率和幼苗的株高、真叶数、主根长、侧根数和鲜重。低浓度（10mg/L）的卡那霉素即可显著抑制幼苗株高、真叶数、主根长、侧根数和鲜重,浓度为50mg/L时有白化苗的出现,由此可确定50mg/L为阿尔冈金的卡那霉素耐性临界浓度。 展开更多

关键词 紫花苜蓿 卡那霉素 种子萌发 幼苗生长

在线阅读 下载PDF 职称材料

人工合成的纳豆激酶基因转化烟草的研究 被引量：5

17

作者 刘靓蕾 张妍 +3 位作者 孙晓蕾 韩岚 满达呼斯琴 哈斯阿古拉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期94-100,共7页

根据植物偏爱密码子人工合成的纳豆激酶基因sNK和其中插入番茄果实特异表达基因E8第一内含子的纳豆激酶基因sNK-E8i,通过农杆菌侵染的方法转化到烟草NC89中。经PCR检测,得到12株转sNK基因烟草植株和10株转sNK-E8i基因烟草植株,初步证明... 根据植物偏爱密码子人工合成的纳豆激酶基因sNK和其中插入番茄果实特异表达基因E8第一内含子的纳豆激酶基因sNK-E8i,通过农杆菌侵染的方法转化到烟草NC89中。经PCR检测,得到12株转sNK基因烟草植株和10株转sNK-E8i基因烟草植株,初步证明目的基因已整合到烟草基因组中;RT-PCR检测有9株转sNK基因烟草植株和10株转sNK-E8i基因烟草植株为阳性;通过RT-qPCR将两种基因在烟草中的表达量进行比较,结果表明转sNK-E8i基因的植株中纳豆激酶的表达量比转sNK基因的植株中高;通过纤维蛋白平板法检测其活性,共有5株转sNK基因烟草植株和3株转sNK-E8i基因烟草植株检测到溶圈,说明目的基因在部分转基因烟草中可正常转录和翻译并表现出溶栓活性。经加代培养已得到T1代转基因植株。 展开更多

关键词 纳豆激酶 人工合成 植物偏爱密码子 烟草 纤维蛋白平板法

在线阅读 下载PDF 职称材料

长叶红砂液泡膜Na^+/H^+逆向转运蛋白基因的克隆及表达特性 被引量：4

18

作者 董禄禄 秦晓春 党振华 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2164-2170,共7页

为研究长叶红砂(Reaumuria trigyna)离子转运分子机制,利用RT-PCR和RACE技术,克隆到其液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(NHX1)的全长cDNA片段,命名为RtNHX1(NCBI序列号为KR919802)。结果表明:RtNHX1的cDNA片段全长2 622bp,开放阅读框1 662b... 为研究长叶红砂(Reaumuria trigyna)离子转运分子机制,利用RT-PCR和RACE技术,克隆到其液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因(NHX1)的全长cDNA片段,命名为RtNHX1(NCBI序列号为KR919802)。结果表明:RtNHX1的cDNA片段全长2 622bp,开放阅读框1 662bp,5′非编码区509bp,3′非编码区451bp,编码553个氨基酸,推测分子量为60.91kD。该蛋白含有12个跨膜结构域,为疏水蛋白,与其他植物液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白NHX1的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR对其在NaCl胁迫下的表达检测显示,不同时间和不同浓度NaCl胁迫下,RtNHX1表达量变化均呈先升高后降低趋势,在100mmol/L NaCl胁迫6h和200mmol/L NaCl胁迫后达到最高,表达量分别超过或约是对照的3倍,一定程度反应出RtNHX1参与长叶红砂的盐胁迫应答,是该植物离子转运体系的重要元件。 展开更多

关键词 长叶红砂 液泡膜Na+/H+逆向转运蛋白基因 CDNA 实时荧光定量PCR NACL胁迫 表达特性

在线阅读 下载PDF 职称材料

珍稀泌盐植物长叶红砂RtSOD基因的克隆及功能分析 被引量：4

19

作者 索雅飞 杜超 +2 位作者 李宁宁 王燕 王迎春 《草业学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期98-110,共13页

长叶红砂是一种强旱生泌盐盐生植物,对盐渍荒漠环境具有极强的适应性。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。本研究利用已有长叶红砂转录组数据库中SOD基因的已知序列设计引物,采用PCR方... 长叶红砂是一种强旱生泌盐盐生植物,对盐渍荒漠环境具有极强的适应性。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。本研究利用已有长叶红砂转录组数据库中SOD基因的已知序列设计引物,采用PCR方法克隆得到大小为663bp、编码220个氨基酸的SOD基因的开放阅读框,并将其定名为RtSOD。预测该基因编码蛋白分子量为55.90kDa,理论等电点5.11。多重序列比对分析结果显示该蛋白属于Cu/Zn SOD家族,与其他植物中SOD蛋白同源性较高。系统进化分析结果显示RtSOD基因与刚毛柽柳的SOD基因亲缘关系较近。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示NaCl、4℃、PEG、H_2O_2及ABA处理均能诱导该基因表达。构建RtSOD真核表达载体,将其转化到拟南芥中,结果发现:盐、干旱胁迫条件下,转RtSOD基因拟南芥的生长状况明显优于野生型,转基因株系抗氧化酶活性(SOD、POD、CAT)和脯氨酸含量较野生型显著升高,H_2O_2及MDA含量较野生型显著降低。qRT-PCR检测发现转基因拟南芥中响应逆境胁迫相关基因的表达量均显著高于野生型。上述结果说明RtSOD基因的过表达可提高转基因植物的抗逆性,进一步说明RtSOD参与长叶红砂对非生物胁迫的响应,是该植物抗氧化系统中的重要元件。 展开更多

关键词 长叶红砂 超氧化物歧化酶 非生物胁迫 转基因拟南芥

在线阅读 下载PDF 职称材料

月见草Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因转化油菜的研究 被引量：1

20

作者 杨佳 怡荣 +3 位作者 张立全 牛一丁 王秀珍 哈斯阿古拉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期50-54,共5页

以油菜子叶节为外植体优化了农杆菌介导的甘蓝型油菜的遗传转化体系,为在油料作物中用基因工程手段生产γ-亚麻酸打下基础。采用CaCl2法制备农杆菌AGL1感受态细胞,将已经构建好的植物表达载体pPZP221(35S-D6D-NOS)通过液氮冻融法转化农... 以油菜子叶节为外植体优化了农杆菌介导的甘蓝型油菜的遗传转化体系,为在油料作物中用基因工程手段生产γ-亚麻酸打下基础。采用CaCl2法制备农杆菌AGL1感受态细胞,将已经构建好的植物表达载体pPZP221(35S-D6D-NOS)通过液氮冻融法转化农杆菌,PCR筛选阳性转化子。结果表明:优化的甘蓝型油菜子叶节外植体预培养条件是:MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培养基预培养2 d;用于侵染的农杆菌菌液的最适浓度为OD600=0.4,时间为5 min,并得到转基因植株。经侵染的外植体在含有庆大霉素的分化选择培养基上培养,抗性芽移至生根培养基,PCR检测阳性小植株移栽花盆,共得到12株转基因植株,首次将来自月见草的D6D基因通过农杆菌介导法整合到油菜基因组中。 展开更多

关键词 油菜 月见草 Δ6-脂肪酸脱氢酶基因 Γ-亚麻酸 农杆菌介导

在线阅读 下载PDF 职称材料