内蒙古绒山羊原始生殖细胞(PGCs)的培养与鉴定 被引量：1

1

作者 刘羿羿 赵丽霞 +2 位作者 李燕 白俊 周欢敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期92-96,共5页

本试验从内蒙古白绒山羊胎儿的生殖嵴中分离出原始生殖细胞体外培养并进行了鉴定。为建立内蒙古绒山羊原始生殖细胞(pri mordial germcells,PGCs)的培养体系,试验对比了A、B、C3组不同的培养条件对内蒙古绒山羊原始生殖细胞传代数的影响... 本试验从内蒙古白绒山羊胎儿的生殖嵴中分离出原始生殖细胞体外培养并进行了鉴定。为建立内蒙古绒山羊原始生殖细胞(pri mordial germcells,PGCs)的培养体系,试验对比了A、B、C3组不同的培养条件对内蒙古绒山羊原始生殖细胞传代数的影响。RT-PCR鉴定结果表明,β-actin、hTERT、GAPDH、Nanog、Oct3/4为阳性、AKP染色为阳性;免疫荧光检测胚胎干细胞特异标志物Oct3/4、SSEA-3、SSEA-4呈阳性。未添加任何因子的A培养体系仅能传1代,添加LIF及Insulin的B培养体系可以传至4代,添加LIF、Insulin及优质胎牛血清的C组培养体系可以传至9代。 展开更多

关键词 原始生殖细胞 Oct3/4 免疫荧光 NANOG

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药用蛋白质乳腺生物反应器的制作技术及新方法进展 被引量：2

2

作者 吴应积 张学明 +2 位作者 杨东山 罗奋华 旭日干 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S1期94-100,共7页

用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的... 用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白已经构成了现代生物技术的一个重要领域。与其他的生物工程方法比起来,用乳腺生物反应器生产人类珍稀的药用蛋白具有更多的优点。这一生物技术的实际应用依赖于基因的时空表达调控操作和可靠的转基因动物制作方法。综述了这一技术的优点,概括描述了了乳腺生物反应器表达载体的构建方法,及转基因动物的制作方法。讨论了这些方法的优缺点及技术改进的发展方向,特别是介绍了最近出现的、有研究和应用价值的用精原干细胞制作转基因动物的方法。 展开更多

关键词 乳腺 生物反应器 载体构建 转基因技术

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内蒙古绒山羊皮肤毛囊差异表达序列标签的筛选及分析

3

作者 苏立宁 李华 +1 位作者 刘东军 旭日干 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1499-1503,共5页

旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登... 旨在筛选和分析内蒙古绒山羊与毛和绒生长相关的差异基因,本研究采用mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)研究内蒙古绒山羊胎儿期不同日龄皮肤中控制初级毛囊和次级毛囊不同分化的差异表达序列标签。结果,共筛选了15条差异表达序列标签(dbEST登录号JK711022-JK711036),其中3条ESTs与毛囊发育有关,5条ES-Ts与次级毛囊和皮脂腺的发育有关。生物信息分析显示,JK711036与甲状腺激素受体相互作用蛋白12(TRIP12)基因有关,其他ESTs功能未知。结果表明,胎儿期初级毛囊和次级毛囊在多种代谢途径上都存在差异表达的基因,这将为进一步研究山羊毛和绒的形成分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 绒山羊 毛囊 DDRT-PCR 表达序列标签

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同期发情及内窥镜输精技术在肉羊生产中的推广应用 被引量：1

4

作者 焦泽华 王建国 +2 位作者 王小卫 莫德日乐吐 于险峰 《中国草食动物科学》 CAS 2012年第S1期278-280,共3页

为促进同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业中的推广应用,达到一年两产或两年三产的目的,进而改变肉羊产业的生产方式及经济结构,在繁殖及非繁殖季节对内蒙古地区本地杂交羊进行同期发情及腹腔内窥镜输精处理。繁殖季节与非繁殖季... 为促进同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业中的推广应用,达到一年两产或两年三产的目的,进而改变肉羊产业的生产方式及经济结构,在繁殖及非繁殖季节对内蒙古地区本地杂交羊进行同期发情及腹腔内窥镜输精处理。繁殖季节与非繁殖季节的发情率均为93%以上,差异不显著(P>0.05)。部分具有小尾寒羊血统的杂交羊同期发情处理后的第6天手术检查黄体,统计排卵率2.45个,只和1.68个,只。但是腹腔内窥镜输精的受胎率显著高于人工授精的受胎率。 展开更多

关键词 同期发情 内窥镜输精 推广应用

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奶牛体细胞核移植技术的商业化应用

5

作者 孙伟 郭继彤 +6 位作者 巴特尔 李荣凤 王建国 李明 胡树香 王春生 李喜和 《中国奶牛》 2012年第17期23-26,共4页

为了提高奶牛体细胞核移植产业化生产应用效率,拟通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎的体外生产技术条件,达到高效生产优质奶牛克隆胚胎进行克隆奶牛生产的目的。结果表明,从生产效率的角度考虑,卵母细胞直接进行盲吸去核处理,供体细胞无... 为了提高奶牛体细胞核移植产业化生产应用效率,拟通过优化高产奶牛体细胞克隆胚胎的体外生产技术条件,达到高效生产优质奶牛克隆胚胎进行克隆奶牛生产的目的。结果表明,从生产效率的角度考虑,卵母细胞直接进行盲吸去核处理,供体细胞无需进行同期饥饿处理,直接注入到盲吸去核后的受体卵子透明带下构建克隆胚胎,融合后的克隆胚胎在密封的混合三气(5%CO2+5%O2+90%N2)的气相条件下进行体外培养,利用西门塔尔牛做受体可以大规模地进行高产奶牛的商业化克隆。 展开更多

关键词 高产奶牛 体细胞 去核 核移植 条件优化

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IGF-1毛囊特异表达载体的构建以及转染绒山羊胎儿成纤维细胞的研究 被引量：13

6

作者 郭旭东 尹俊 +3 位作者 杨东山 毛舒燕 宝明涛 旭日干 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1460-1467,共8页

本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光... 本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l(IGF-1)毛囊特异表达载体pCDsR-KI,并转染绒山羊胎儿成纤维细胞,最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RT-PCR方法获得IGF-1 cDNA,其与KAP6-1基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF-1毛囊特异表达载体pCDsR-KI(大小7.4 kb)。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞,外源性表达载体以lipofectamineTM2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞,在DMEM/F12+10%FBS、37℃、5%CO2中培养,并添加G418筛选,获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆。经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中。通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常。为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞。 展开更多

关键词 绒山羊 胰岛素样生长因子l 红色荧光蛋白 毛囊细胞 胎儿成纤维细胞

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舍饲与半舍饲绒山羊弓形虫感染的血清学调查比较 被引量：2

7

作者 杨晓野 杨莲茹 +7 位作者 王建国 禹旺盛 旭日干 王志 赵治国 王瑞 刘卫星 崔雯 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期822-823,共2页

目的采用间接血凝试验检测技术对内蒙古某地区绒山羊舍饲与半舍饲条件下弓形虫感染进行血清学调查,以摸清弓形虫病在不同养殖模式下的流行规律。结果显示舍饲绒山羊阳性率为24.83%(32/149),血清凝集价范围为1∶64～1∶1024,其中1∶64的... 目的采用间接血凝试验检测技术对内蒙古某地区绒山羊舍饲与半舍饲条件下弓形虫感染进行血清学调查,以摸清弓形虫病在不同养殖模式下的流行规律。结果显示舍饲绒山羊阳性率为24.83%(32/149),血清凝集价范围为1∶64～1∶1024,其中1∶64的有22份,占59.5%;1∶256的有11份,占29.7%;1∶1024的有4份,占11.8%。而半舍饲绒山羊阳性感染率为1.25%(1/80),血清凝集价为1∶64。结果表明舍饲与半舍饲绒山羊弓形虫感染情况存在差异。 展开更多

关键词 绒山羊 舍饲 弓形虫 间接血凝试验

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小鼠双尾C蛋白Bicc1多克隆抗体的制备及细胞内定位的初步研究 被引量：2

8

作者 戴宝贞 周亮 +3 位作者 付玉龙 丁镇伟 李煜 吴冠青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1106-1109,共4页

目的:制备小鼠双尾C蛋白Bicc1的多克隆抗体并确定其在细胞内定位。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增小鼠Bicc1编码61E-199A的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生Bicc1-N抗原。纯化目的蛋白并制备兔抗B... 目的:制备小鼠双尾C蛋白Bicc1的多克隆抗体并确定其在细胞内定位。方法:根据生物信息学分析结果,PCR扩增小鼠Bicc1编码61E-199A的cDNA片段。将该片段克隆到GST融合蛋白表达载体上,在IPTG诱导下产生Bicc1-N抗原。纯化目的蛋白并制备兔抗Bicc1蛋白多克隆抗体。Western blot鉴定抗体特异性,并以间接免疫荧光法初步分析该蛋白在细胞内定位。结果:成功构建Bicc1-N片段原核表达载体,在大肠杆菌中实现可溶性表达,制备小鼠Bicc1蛋白的多克隆抗体,并证实该蛋白主要表达于细胞质内。结论:成功制备了高效价并特异的兔抗Bicc1多克隆抗体,为进一步研究Bicc1基因产物的生物功能奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠双尾-C基因 Bicc1 多克隆抗体 多囊肾

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检测生精过程中减数分裂完成的质粒载体的构建 被引量：2

9

作者 于泊洋 罗奋华 +1 位作者 张岩 吴应积 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期202-207,共6页

旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动... 旨在构建在所有转染细胞中表达绿色荧光、在核分裂的次级精母细胞、圆形精子细胞及长形精子细胞中表达红色荧光蛋白的cmv-eGFP-Gsg2-DsRed载体。重组载体是以本实验室保存CMV-EGFP-pDsRed质粒载体为基础载体,在其多克隆位点插入Gsg2启动子,期待可以启动红色荧光蛋白基因的表达。经大鼠睾丸共培养细胞转染试验证实,成功构建了含有Gsg2启动子的表达双荧光蛋白质粒载体。 展开更多

关键词 小鼠 Gsg2启动子 CMV启动子 精子发生

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阿尔巴斯绒山羊iPSCs诱导及培养体系的优化 被引量：1

10

作者 邰大鹏 乃门塔娜 +3 位作者 诺明途 王潇 梁浩 刘东军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期106-113,共8页

阿尔巴斯绒山羊多潜能干细胞(giPSCs)在遗传育种方面有重要的应用价值,然而目前还没有完善的giPSCs诱导及培养体系。为了获得稳定的giPSCs诱导及培养体系,根据培养基中添加的血清和小分子化合物的不同,构建了5组不同的培养基体系,分别... 阿尔巴斯绒山羊多潜能干细胞(giPSCs)在遗传育种方面有重要的应用价值,然而目前还没有完善的giPSCs诱导及培养体系。为了获得稳定的giPSCs诱导及培养体系,根据培养基中添加的血清和小分子化合物的不同,构建了5组不同的培养基体系,分别观察了giPSCs在不同培养基中的生长状态、增殖能力以及重编程效率,并检测了不同组giPSCs的多潜能性,最后分析了不同小分子化合物的组合对giPSCs重编程效率和干细胞标记基因表达的影响。结果发现,血清的添加更适合giPSCs的诱导培养,小分子化合物Vc、VPA和LiCL能有效促进giPSCs的生成和自我更新。这为完善而稳定的绒山羊i PSCs诱导培养体系的建立奠定了基础,并且为阿尔巴斯绒山羊胚胎干细胞的建系提供了试验平台。 展开更多

关键词 阿尔巴斯绒山羊 IPSCS 诱导及培养基体系 小分子化合物

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构建骨骼肌特异表达人FS基因载体及其稳定转染绵羊胎儿成纤维细胞 被引量：1

11

作者 王玮 袁建龙 +6 位作者 金永 朱兵 岳群华 梁浩 郭旭东 刘东军 仓明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期140-145,共6页

旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特... 旨在构建骨骼肌特异表达人卵泡抑制素(follistatin,FS)基因载体并得到其稳定转染的蒙古绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。首先通过RT-PCR方法克隆得到人FS基因cDNA序列,然后与猪骨骼肌特异表达启动子α-actin以及红色荧光蛋白表达元件连接,构建成FS基因骨骼肌特异表达载体pCFCDS。脂质体介导外源表达载体转染绵羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选后得到稳定转染的绵羊转基因细胞克隆。PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,分析转基因细胞系的核型和生长状况。结果显示,成功构建得到绵羊骨骼肌特异表达人FS基因的真核表达载体,并得到其稳定转染的转基因绵羊胎儿成纤维细胞系,为后期通过体细胞核移植方法制作转FS基因克隆绵羊奠定基础。 展开更多

关键词 绵羊 卵泡抑制素 骨骼肌特异表达载体 转基因细胞系

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脱氧胆酸处理对大鼠肌肉卫星细胞的影响 被引量：1

12

作者 焦泽华 段彪 +2 位作者 白春玲 魏著英 李光鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第12期39-42,共4页

肌肉卫星细胞是组织特异性干细胞,负责骨骼肌的生长和再生。尽管卫星细胞的发现已有50多年的历史,但肌肉卫星细胞的维持培养仍是一个难以解决的问题。本研究使用脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)处理肌肉卫星细胞,结果发现,50μmol/L脱... 肌肉卫星细胞是组织特异性干细胞,负责骨骼肌的生长和再生。尽管卫星细胞的发现已有50多年的历史,但肌肉卫星细胞的维持培养仍是一个难以解决的问题。本研究使用脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)处理肌肉卫星细胞,结果发现,50μmol/L脱氧胆酸能显著促进肌肉卫星细胞的增殖。Western blotting检测发现50μmol/L DCA能促进细胞内β-catenin表达水平的持续增加。处理6 d后的细胞仍然保持着肌肉卫星细胞的成肌能力。 展开更多

关键词 脱氧胆酸(DCA) 大鼠 卫星细胞

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狂犬疫苗单克隆抗体制备过程中细胞融合条件的探索 被引量：1

13

作者 李云霞 司静 李煜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期167-172,177,共7页

在充分了解SP2/0细胞系的生长、增殖和遗传特性后,以聚乙二醇(PEG)诱导动物细胞融合为契机,意在探索不同分子量、不同浓度的PEG作融合剂对诱导SP2/0细胞与脾细胞融合的最适条件,在HAT选择培养基下通过细胞融合率的变化进行比较。结果表... 在充分了解SP2/0细胞系的生长、增殖和遗传特性后,以聚乙二醇(PEG)诱导动物细胞融合为契机,意在探索不同分子量、不同浓度的PEG作融合剂对诱导SP2/0细胞与脾细胞融合的最适条件,在HAT选择培养基下通过细胞融合率的变化进行比较。结果表明,分子量为4000,浓度为50%的PEG诱导的细胞融合率最高,为下一步制备狂犬病毒疫苗单克隆抗体奠定基础。 展开更多

关键词 SP2/0细胞 生长曲线 染色体计数 PEG 细胞融合 HAT选择培养基 融合率

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山羊胚胎体外培养条件的优化 被引量：1

14

作者 刘羿羿 赵高平 +4 位作者 李燕 白俊 王申元 巴特尔 周欢敏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第4期146-149,共4页

为优化山羊胚胎体外培养条件,本试验比较了含有3种不同来源血清(优质胎牛血清、发情山羊血清、前列腺素(PG)处理后发情山羊血清)的M199对卵母细胞成熟效果的影响,成熟率分别为65.95%、49.2%、76.47%,差异极显著(P<0.01);本试验还分... 为优化山羊胚胎体外培养条件,本试验比较了含有3种不同来源血清(优质胎牛血清、发情山羊血清、前列腺素(PG)处理后发情山羊血清)的M199对卵母细胞成熟效果的影响,成熟率分别为65.95%、49.2%、76.47%,差异极显著(P<0.01);本试验还分别采用了SOFaa、CR1aa+输卵管上皮细胞共培养,以及改进的DMEM/F12发育体系培养受精卵,结果发现,SOFaa、CR1aa+输卵管上皮细胞的发育培养系统得到的囊胚率为29.62%、24.73%,差异不显著(P>0.05),改进的DMEM/F12发育液囊胚率最高为48.42%,差异极显著(P<0.01)。 展开更多

关键词 发情山羊血清 囊胚率 输卵管上皮细胞

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小鼠FABP4基因启动子驱动红色荧光蛋白载体的构建及在牛体细胞中的表达

15

作者 岳永莉 于海泉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期26-30,共5页

小鼠脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)的启动子/增强子元件是脂肪组织特异性启动元件,为了鉴定该元件在牛体细胞中的启动效果,首先以小鼠肝脏DNA为模板,通过PCR克隆得到5.9 kb的FABP4基因启动子片段,连入p MD19-T载体后进行酶切及测序鉴定,... 小鼠脂肪型脂肪酸结合蛋白(FABP4)的启动子/增强子元件是脂肪组织特异性启动元件,为了鉴定该元件在牛体细胞中的启动效果,首先以小鼠肝脏DNA为模板,通过PCR克隆得到5.9 kb的FABP4基因启动子片段,连入p MD19-T载体后进行酶切及测序鉴定,经Eco T 22I酶切去除非核心启动子区后精简为2.3 kb的片段,通过SacⅡ酶切将5.9 kb片段和2.3 kb片段的启动子连入红色荧光蛋白载体p Ds-Red 2-1的多克隆位点,构建为表达质粒p MF5.9-Red和p MF2.3-Red,利用脂质体法将上述载体分别转染牛脂肪间充质干细胞及牛胎儿成纤维细胞,24 h后实时定量PCR检测红色荧光蛋白转录水平。结果表明,克隆得到的5.9 kb小鼠FABP4启动子片段酶切及测序结果正确,与红色荧光蛋白载体相连的载体p MF5.9-Red和p MF2.3-Red酶切结果与预期相符,表达载体构建成功,实时定量PCR结果显示以上2种细胞在转染后24 h红色荧光蛋白均有表达,且p MF2.3-Red的转录水平是p MF5.9-Red的2倍以上。成功构建了小鼠FABP4启动子驱动红色荧光蛋白表达载体p MF5.9-Red和p MF2.3-Red,5.9 kb片段和2.3 kb片段均可驱动外源基因在牛体细胞中转录,且2.3 kb片段启动效率高于5.9 kb片段。 展开更多

关键词 小鼠FABP4启动子 载体构建 牛体细胞

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牛转FAD3B基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估 被引量：4

16

作者 王子东 苏建国 +7 位作者 段彪 杨春荣 高广琦 康峰 张荣芳 胡晓明 扈廷茂 李光鹏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期118-126,共9页

采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为... 采用RT-PCR扩增亚麻种子(Linum usitatissimumLinn)FAD3B基因,构建不同启动子的两种重组真核表达载体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B,通过qRT-PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象,评价9种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA、UXT、PPP1R11、RPS15A、SF3A1、EEF1A2和HMBS的稳定性。根据GeNorm、NormFinder和BestKeeper 3种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序。结果显示,内参基因稳定性的综合排序为PPP1R11>EEF1A2>18S rRNA>RPS15A>GAPDH>HMBS>UXT>ACTB>SF3A1,其中PPP1R11和EEF1A2是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平,从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。 展开更多

关键词 实时荧光定量RT-PCR 转基因细胞 内参基因 GENORM NORMFINDER Bestkeeper

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牛组织中MBD1基因表达及其DNA甲基化调节 被引量：3

17

作者 王会敏 奥旭东 +2 位作者 岳永莉 高海霞 于海泉 《四川动物》 CSCD 北大核心 2012年第5期725-728,共4页

DNA甲基化是主要的表观遗传调节方式,在转录水平调节基因的表达,甲基化CpG结合蛋白MBD1能够结合甲基化及非甲基化的DNA,通过抑制域抑制基因的转录,在DNA甲基化和转录抑制之间起重要作用,但DNA甲基化对MBD1自身的调节作用还不清楚。本研... DNA甲基化是主要的表观遗传调节方式,在转录水平调节基因的表达,甲基化CpG结合蛋白MBD1能够结合甲基化及非甲基化的DNA,通过抑制域抑制基因的转录,在DNA甲基化和转录抑制之间起重要作用,但DNA甲基化对MBD1自身的调节作用还不清楚。本研究首先利用RT-PCR检测成年牛心脏、肾脏、肝脏、睾丸及卵巢5种组织中MBD1基因mRNA的表达;并根据牛MBD1调节区序列,针对其中的12个CpG位点设计引物,利用甲基化PCR测序分析方法,分析该调节区的DNA甲基化状态在牛5种组织中的变化。结果表明,在牛的5种组织中,MBD1基因在心脏和肾脏的表达量低于肝脏、睾丸及卵巢,且差异显著(P<0.05);DNA甲基化检测显示,心脏和肾脏MBD1调节区的甲基化比率较肝脏、睾丸及卵巢甲基化低,说明调控区DNA甲基化与MBD1基因的组织特异性表达相关。 展开更多

关键词 MBD1 组织 DNA甲基化 MRNA表达

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小鼠KGF基因毛囊特异性表达载体的构建及mESC脂质体悬浮转染条件的优化 被引量：1

18

作者 梁伟 肖红 +4 位作者 高笑宇 杜晓媛 汪慧 郭旭东 刘东军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期107-117,共11页

旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞(mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA... 旨在构建小鼠角质细胞生长因子(KGF)真核表达载体pCDsR-UKA,通过脂质体转染法转染小鼠胚胎干细胞(mESC),并进一步优化其转染条件,最终获得可以正常生长并稳定表达红色荧光蛋白的转KGF基因的ES细胞。利用RT-PCR技术扩增小鼠KGF基因cDNA并构建表达载体pCDsR-UKA(6.6 kb),经鉴定正确的重组质粒DNA用脂质体包裹后转染mESC。从小鼠成纤维细胞cDNA扩增出891 bp的KGF基因片段与UHS启动子和BGH polyA序列成功重组到pCDsRed2载体中。经酶切和DNA测序验证,插入载体的DNA片段为KGF基因且方向正确。采用脂质体法优化转染条件,mESC最高转染效率达到(34.4±4.1)%。经G418筛选的转基因ES细胞通过PCR鉴定证实外源基因已整合在ES细胞基因组中。成功获得了小鼠KGF基因片段,以及真核表达载体pCDsR-UKA,经优化的脂质体悬浮法转染条件,在六孔板中当DNA与脂质体比例为3∶10时,可获得最佳转染效率且不改变ES细胞的生长状态,经筛选获得了转基因ES细胞克隆。为下一步通过四倍体补偿技术获得ES小鼠提供了转基因ES细胞。 展开更多

关键词 KGF 表达载体 胚胎干细胞 毛囊 UHS 红色荧光蛋白 脂质体转染 悬浮法

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牛体细胞中Gadd45a的表达与DNA甲基化修饰 被引量：2

19

作者 李轲涵 岳永莉 +1 位作者 辛鹏慧 于海泉 《四川动物》 CSCD 北大核心 2008年第5期794-796,共3页

目的检测成年牛心脏、肾脏、肝脏及睾丸组织中Gadd45a基因表达情况及DNA甲基化状态,并说明二者之间的关系。结果牛Gadd45a基因在心脏中没有表达,而在其他3种组织中有表达且略有差异。选定该基因调控区中的7个CpG位点,利用甲基化特异性PC... 目的检测成年牛心脏、肾脏、肝脏及睾丸组织中Gadd45a基因表达情况及DNA甲基化状态,并说明二者之间的关系。结果牛Gadd45a基因在心脏中没有表达,而在其他3种组织中有表达且略有差异。选定该基因调控区中的7个CpG位点,利用甲基化特异性PCR检测CpG位点的DNA甲基化状态,结果心脏中的甲基化程度明显高于其他3种组织。结论DNA甲基化对牛Gadd45a基因的组织特异性表达有一定影响。 展开更多

关键词 牛 正常体细胞 DNA甲基化

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牛体外受精胚胎早期发育过程中基因差异表达的研究 被引量：1

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作者 陈苏仁 张鑫 +2 位作者 栗雪冰 仓明 刘东军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期816-822,共7页

本研究旨在筛选牛体外受精胚胎早期发育差异表达基因,并进行差异表达分析。选取牛卵母细胞、体外受精8细胞期和囊胚期胚胎为试验材料,进行mRNA差异表达研究。初步克隆出4个牛卵母细胞和早期胚胎发育不同阶段差异表达的基因,同源性分析显... 本研究旨在筛选牛体外受精胚胎早期发育差异表达基因,并进行差异表达分析。选取牛卵母细胞、体外受精8细胞期和囊胚期胚胎为试验材料,进行mRNA差异表达研究。初步克隆出4个牛卵母细胞和早期胚胎发育不同阶段差异表达的基因,同源性分析显示,它们分别与高移动样蛋白盒结构域4基因(HMGXB4)、热休克蛋白40亚家族C成员8基因(Dnajc8)、突触膜胞吐调节2基因(RI MS2)和核糖体蛋白L31基因(RPL31)高度同源。RT-PCR检测验证,HMGXB4、Dnajc8、RI MS2和RPL31在牛卵母细胞和早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与其参与不同的生理活动有关。 展开更多

关键词 牛 早期胚胎 MRNA差异显示 基因表达

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