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SNAPIN基因对受体酪氨酸激酶c-MET在HEK 293T细胞中表达的影响
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作者 高迎春 张传领 +3 位作者 牛丽丽 温建勋 程国强 肖瑞 《山西医科大学学报》 CAS 2015年第8期724-728,共5页
目的探讨HEK 293T细胞中受体酪氨酸激酶c-MET的表达是否受SNAPIN基因表达的影响。方法构建pEGFPSNAPIN荧光蛋白表达载体,并将pEGFP-SNAPIN荧光蛋白表达载体和siRNA干扰片段通过脂质体转染的方法分别转染到HEK 293T细胞中,利用实时定量PC... 目的探讨HEK 293T细胞中受体酪氨酸激酶c-MET的表达是否受SNAPIN基因表达的影响。方法构建pEGFPSNAPIN荧光蛋白表达载体,并将pEGFP-SNAPIN荧光蛋白表达载体和siRNA干扰片段通过脂质体转染的方法分别转染到HEK 293T细胞中,利用实时定量PCR的方法在转录水平上观察SNAPIN表达改变对其相互作用蛋白c-MET的影响。结果成功构建pEGFP-SNAPIN荧光蛋白表达载体;实时定量PCR实验结果显示SNAPIN被沉默后其表达量降低,c-MET的表达也相应下降;转染pEGFP-SNAPIN荧光蛋白表达载体后,SNAPIN的表达量增加,c-MET的表达也相应增加。结论转录水平上SNAPIN相互作用蛋白c-MET的表达可能受到SNAPIN的调控。 展开更多
关键词 SNAPIN C-MET HEK 293T细胞
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小鼠肌球蛋白轻链激酶生物信息学分析
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作者 边艳超 张传领 +6 位作者 张浩 王万伦 张婷 刘桐佳 刘爽 邢凯佳 肖瑞 《中国医药科学》 2022年第19期30-33,共4页
目的利用生物信息学方法探讨小鼠肌球蛋白轻链激酶(MYLK)的结构、编码蛋白质的结构及功能等,为研究MYLK蛋白功能调节机制奠定基础。方法通过生物信息学分析,对MYLK基因编码的产物及理化性质、信号肽、跨膜结构、二级结构、三级结构、结... 目的利用生物信息学方法探讨小鼠肌球蛋白轻链激酶(MYLK)的结构、编码蛋白质的结构及功能等,为研究MYLK蛋白功能调节机制奠定基础。方法通过生物信息学分析,对MYLK基因编码的产物及理化性质、信号肽、跨膜结构、二级结构、三级结构、结构域、亚细胞定位、磷酸化及互相作用蛋白等进行预测分析。结果MYLK由1950个氨基酸组成,为理论等电点为5.92的亲水性不稳定蛋白,无信号肽和跨膜区域,二级结构主要为无规则卷曲,成功构建其三级结构,MYLK蛋白有四种结构域,主要存在于细胞核,有较多的Thr、Ser磷酸化位点,Tyr磷酸化位点相对较少,与MYLK相互作用的蛋白主要是肌球蛋白和钙调蛋白。结论MYLK是具有核定位、无跨膜结构、亲水性不稳定的蛋白质,在细胞黏附、迁移、凋亡等生理活动中具有极为重要的意义。 展开更多
关键词 肌球蛋白轻链激酶 生物信息学分析 功能结构 蛋白质相互作用
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Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达特征 被引量:1
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作者 李蕊秀 高迎春 +3 位作者 吴家栋 李文秀 张传领 肖瑞 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第1期15-19,共5页
目的明确Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达与定位并探究Usp9y的功能。方法利用生物信息学分析结合RT-PCR方法检测小鼠睾丸相关细胞系和C57BL/6J小鼠各个组织(子宫,睾丸,心,肝,脾,肺,肾,大脑,小脑,眼球)中Us... 目的明确Usp9y基因在不同发育阶段小鼠睾丸组织和睾丸相关细胞系中的表达与定位并探究Usp9y的功能。方法利用生物信息学分析结合RT-PCR方法检测小鼠睾丸相关细胞系和C57BL/6J小鼠各个组织(子宫,睾丸,心,肝,脾,肺,肾,大脑,小脑,眼球)中Usp9y基因表达的特异性;利用q PCR法检测不同日龄小鼠睾丸中Usp9y基因的表达差异性。结果生物信息学分析结果显示Usp9y基因在成年小鼠睾丸中特异性表达(P <0. 05)。RT-PCR结果证实Usp9y在小鼠睾丸组织中特异性表达(P <0. 05)。usp9y在小鼠睾丸间质细胞(TM3)中特异性表达,在小鼠精原细胞(GC-1)和小鼠睾丸支持细胞(15P-1)中未检测到表达。q PCR结果显示相比其他日龄小鼠,18日龄的小鼠睾丸Usp9y表达显著升高(P <0. 05)。结论通过RT-PCR的方法确定Usp9y基因在TM3细胞中特异性表达;小鼠Usp9y基因在小鼠出生后18 d表达明显增高,上述结果表明Usp9y基因在精子发生早期发挥着不可替代的作用。 展开更多
关键词 Usp9y基因 睾丸 间质细胞 精原细胞 睾丸支持细胞 小鼠
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细胞羧肽酶1调控小鼠睾丸初级精母细胞GC-2增殖的作用与机制研究
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作者 张婷 王万伦 +4 位作者 刘桐佳 刘爽 边艳超 张传领 肖瑞 《中国医药导报》 CAS 2022年第32期10-13,30,共5页
目的探讨细胞羧肽酶1(CCP1)在小鼠睾丸初级精母细胞(GC-2)增殖中的作用及分子机制。方法体外正常培养GC-2细胞,利用含有空载质粒与CCP1重组质粒的慢病毒感染GC-2细胞构建阴性对照组(NC组)与CCP1过表达组(GC-2+CCP1组)细胞。CCK-8法与流... 目的探讨细胞羧肽酶1(CCP1)在小鼠睾丸初级精母细胞(GC-2)增殖中的作用及分子机制。方法体外正常培养GC-2细胞,利用含有空载质粒与CCP1重组质粒的慢病毒感染GC-2细胞构建阴性对照组(NC组)与CCP1过表达组(GC-2+CCP1组)细胞。CCK-8法与流式细胞术分别检测CCP1过表达对GC-2细胞增殖与周期的影响;实时荧光定量PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(Cdk2)、细胞周期蛋白B1(Ccnb1)和细胞周期蛋白D1(Ccnd1)的表达;Western blot检测Cdk2蛋白表达。结果CCK-8与流式细胞术结果显示,GC-2+CCP1组细胞的体外分裂增殖能力低于NC组,并发生了G_(2)/M期阻滞,差异有统计学意义(P<0.05)。GC-2+CCP1组细胞的CDK2 mRNA与蛋白表达高于NC组、Ccnb1与Ccnd1 mRNA低于NC组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论CCP1过表达可能通过影响细胞周期因子Cdk2、Ccnb1与Ccnd1的表达抑制GC-2细胞体外增殖能力发生G_(2)/M期阻滞。 展开更多
关键词 细胞羧肽酶1 小鼠睾丸初级精母细胞 细胞周期蛋白依赖性激酶2 细胞周期蛋白B1 细胞周期蛋白D1
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不同阻滞阶段非梗阻性无精子症的生物信息学分析
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作者 王万伦 刘桐佳 +3 位作者 张婷 李硕 边艳超 肖瑞 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2022年第4期270-274,297,共6页
目的:利用生物信息学筛选不同阻滞阶段非梗阻性无精子症(NOA)相关的调控因子及其调控途径,为后续的功能研究提供依据。方法:从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中获得GSE45885的基因表达谱矩阵,筛选其中的正常样本以及不同阻滞阶段NO... 目的:利用生物信息学筛选不同阻滞阶段非梗阻性无精子症(NOA)相关的调控因子及其调控途径,为后续的功能研究提供依据。方法:从GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中获得GSE45885的基因表达谱矩阵,筛选其中的正常样本以及不同阻滞阶段NOA样本,包括4例正常生精样本和20例NOA患者样本,20例NOA患者中有2例患者处于减数分裂前期阻滞阶段(PRE),7例处于减数分裂期阻滞阶段(MEI),11例处于减数分裂后期阻滞阶段(POST)。将正常生精样本设置为对照组(CON),使用GEO2R在线工具鉴定正常生精样本与不同阻滞阶段NOA样本之间的差异基因,对GEO芯片中不同阻滞阶段的NOA数据整合归一化并进行矫正后取交集。对差异表达的基因以及其靶基因进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,获取关键通路;基于在线工具(STRING)构建蛋白质相互作用(PPI)网络图。然后利用Cytoscape中的Cyto Hubba插件对枢纽基因进行筛选。结果:在PRE中筛选出463个上调基因,12个下调基因;在MEI和POST中分别发现2个和3个下调基因,无上调基因。PRE中上调基因通过一些重要途径,如精子发生、精子细胞发育、精子的运动、纤毛运动和微管形成等功能来调控生精过程。在上述的3个阻滞阶段NOA中筛选出2个共同差异基因,均为微小RNA(mi RNA),2个mi RNA有58个共同靶基因。利用在线生物信息学工具STRING成功构建PRE中上调基因的PPI网络图,并使用Cytoscape筛选出网络中前10个枢纽基因,包括DNAI1、DNAI2、PGK2、ROPN1L、ARMC4、DRC1、DNAAF3、CABYR、ZMYND10和CCDC65。结论:识别枢纽基因和共同差异基因及其通路为后续研究NOA的发生机制提供了有价值的参考,DRC1、ARMC4、MIR15A和MIR509-3可作为后续NOA发病机制研究的潜在靶点。 展开更多
关键词 无精子症 基因表达谱 非梗阻性无精子症 靶基因 功能富集分析
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