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蒙古绵羊ghrelin cDNA的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 吕东媛 曹贵方 +1 位作者 白春玲 旭日干 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期735-739,共5页
根据GenBank中报道的绵羊ghrelin序列设计一对特异性引物,以蒙古绵羊真胃组织中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出蒙古绵羊ghrelin的cDNA,并克隆到pTZ19载体中,经限制性内切酶谱和DNA序列测定,证实所克隆的蒙古绵羊ghrelin的cDNA... 根据GenBank中报道的绵羊ghrelin序列设计一对特异性引物,以蒙古绵羊真胃组织中提取的总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增出蒙古绵羊ghrelin的cDNA,并克隆到pTZ19载体中,经限制性内切酶谱和DNA序列测定,证实所克隆的蒙古绵羊ghrelin的cDNA为ghrelin的部分序列,因为用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊ghrelin序列进行对比,205个碱基中仅有1个碱基的差异,该差异不影响翻译后多肽的序列。该段cDNA包含由168个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码56个氨基酸残基的前原蒙古绵羊ghrelin。对蒙古绵羊ghrelin的研究将有助于进一步揭示其生理和病理功能,对反刍动物多种疾病过程的认识及防治策略具有深远意义。 展开更多
关键词 蒙古绵羊 GHRELIN CDNA 克隆 序列分析
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蒙古绵羊Bcl-2基因3’端cDNA的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 郭宏儒 曹贵方 锡林高娃 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第11期28-31,共4页
为扩增蒙古绵羊Bcl-2基因3’端,根据GenBank上已公布的牛的序列,设计了2条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出Bcl-2的cDNA,并重组到PMD18-T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的cDNA为Bcl-2,因为该cDN... 为扩增蒙古绵羊Bcl-2基因3’端,根据GenBank上已公布的牛的序列,设计了2条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出Bcl-2的cDNA,并重组到PMD18-T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的cDNA为Bcl-2,因为该cDNA包含由261个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码83个氨基酸。经比对,与牛的核苷酸序列的同源性为95.8%。 展开更多
关键词 绵羊 BCL-2基因 克隆 序列分析 CDNA
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蒙古绵羊Bcl-2基因5′端cDNA的克隆及序列分析
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作者 郭宏儒 任秀珍 曹贵方 《山东畜牧兽医》 2015年第2期1-2,共2页
为扩增蒙古绵羊bcl-2基因5′端,根据Gen Bank上已公布的牛的序列,设计了2条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出bcl-2的c DNA,并重组到p Blueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,测出5′RACE产物434个核... 为扩增蒙古绵羊bcl-2基因5′端,根据Gen Bank上已公布的牛的序列,设计了2条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出bcl-2的c DNA,并重组到p Blueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,测出5′RACE产物434个核苷酸序列,该序列包括C端144个氨基酸编码序列、翻译起始密码子ATG。 展开更多
关键词 绵羊 BCL-2基因 克隆 5′RACE CDNA
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蒙古绵羊Bcl-2基因cDNA的克隆及序列分析
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作者 郭宏儒 任秀珍 曹贵方 《山东畜牧兽医》 2015年第3期3-5,共3页
为扩增蒙古绵羊bcl-2基因全序列,根据Gen Bank上已公布的牛的序列,设计了3条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR,技术扩增出bcl-2的c DNA,并重组到p Blueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的c DNA为bcl... 为扩增蒙古绵羊bcl-2基因全序列,根据Gen Bank上已公布的牛的序列,设计了3条引物。从蒙古绵羊脾中提取总RNA,采用RT-PCR,技术扩增出bcl-2的c DNA,并重组到p Blueselect T载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的c DNA为bcl-2,因为该c DNA包含由687个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码229个氨基酸。经比对,与牛的核苷酸序列和氨基酸序列的同源性分别为95.5%和93.4%。 展开更多
关键词 绵羊 BCL-2基因 克隆 序列分析 CDNA
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蒙古绵羊Ghrelin基因的克隆和原核表达 被引量:2
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作者 梁建荣 曹贵方 +3 位作者 赵鹏伟 温世勇 程兰玲 凃勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1782-1786,共5页
为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况。本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析。将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET... 为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况。本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析。将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET-32a(+)连接,并转化BL21(DE3)大肠杆菌。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明克隆的蒙古绵羊Ghrelin基因序列与已发表基因序列有2个碱基的差异,该碱基的变化并不影响氨基酸序列,目的蛋白主要以可溶性形式存在,Western-blot初步证实了所获得的融合蛋白是特异的。本研究成功构建了蒙古绵羊Ghrelin基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究蒙古绵羊Ghrelin基因的功能提供参考。 展开更多
关键词 GHRELIN 基因克隆 原核表达 蒙古绵羊
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骆驼β-防御素caBD-1cDNA的克隆及序列分析 被引量:8
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作者 杨银凤 唐博 曹贵方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期357-361,共5页
β-防御素是一类富含半胱氨酸的抗微生物多肽,主要表达在哺乳动物黏膜上皮内。我们发现了一种新的β-防御素—骆驼β-防御素-1(caBD-1)。从骆驼舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出caBD-1的cDNA,并重组到pBlueselectT载体,... β-防御素是一类富含半胱氨酸的抗微生物多肽,主要表达在哺乳动物黏膜上皮内。我们发现了一种新的β-防御素—骆驼β-防御素-1(caBD-1)。从骆驼舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出caBD-1的cDNA,并重组到pBlueselectT载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的caBD-1的cDNA为β-防御素,因为该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原防御素,该前原防御素含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。骆驼β-防御素的发现对我们更好地理解骆驼黏膜防御机制有很大帮助。 展开更多
关键词 骆驼 Β-防御素 CDNA 基因克隆 序列分析 抗微生物多肽 先天性免疫
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佳米驴β防御素aBD-1基因克隆及序列分析 被引量:2
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作者 屈雷 闫海龙 +3 位作者 庞全海 敬晓棋 杨银凤 高晔 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第8期34-38,共5页
为获得佳米驴β防御素-1(aBD-1)的全长cDNA序列,为开发其药用功能积累资料。从佳米驴舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出aBD-1(ass-βdefensin-1)cDNA的中间片段后,再采用RACE法,扩增佳米驴β防御素aBD-1的cDNA全序列。aBD... 为获得佳米驴β防御素-1(aBD-1)的全长cDNA序列,为开发其药用功能积累资料。从佳米驴舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出aBD-1(ass-βdefensin-1)cDNA的中间片段后,再采用RACE法,扩增佳米驴β防御素aBD-1的cDNA全序列。aBD-1 cDNA全序列长为360 bp,其中包含192 bp的开放阅读框,37 bp的5′非翻译区(5′UTR),102 bp的3′非翻译区(3′UTR)以及poly(A)26。在GenBank上注册号为EU265778,测序结果和序列生物信息学分析结果表明,其与马β防御素eBD-1、牛的β防御素TAP、绵羊的β防御素sBD-1、猪的β防御素pBD-1和人的β防御素hBD-2的同源性分别为92%、68%、75%、75%和68%。aBD-1全长cDNA是β防御素家族中的一个新基因。 展开更多
关键词 佳米驴 Β防御素 逆转录-聚合酶链式反应 RACE CDNA
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骆驼β-防御素-1(caBD-1)基因在组织中的表达定位检测 被引量:2
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作者 杨银凤 余兴邦 +2 位作者 唐博 曹贵方 范光丽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1347-1350,共4页
Mammalian β-defensins are endogenous cysteine-rich peptide antibiotics that are produced either by epithelial cells lining the respiratory,digestive and urogenital tracts or by granulocytes and macrophages.Here,we ex... Mammalian β-defensins are endogenous cysteine-rich peptide antibiotics that are produced either by epithelial cells lining the respiratory,digestive and urogenital tracts or by granulocytes and macrophages.Here,we examined the expressive tissues of caBD-1 mRNA in camels through RNA in situ hybridization using the digoxigenin-labeled antisense nucleic acid probe which is 42bp and was designed and synthesized according the known caBD-1 cDNA sequence.The result indicates that caBD-1 mRNA express in the stratified squamous epithelium of dorsal tongue and the columnar epithelium of intestinal crypts. 展开更多
关键词 β-肛防御素 骆驼 原位杂交
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驯鹿β-防御素-1(reBD-1)基因在组织中表达的原位杂交检测 被引量:2
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作者 杨银凤 赵艳芳 +1 位作者 都格尔斯仁 吴萨日娜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期723-727,共5页
β-防御素主要是由哺乳动物黏膜上皮细胞产生,分布在机体宿主-环境的界面位置。在本研究中,利用已克隆的驯鹿β-防御素reBD-1cDNA作为探针,经地高辛标记后再应用原位杂交技术检测reBD-1mRNA在驯鹿组织内的表达部位。结果显示reBD-1mRNA... β-防御素主要是由哺乳动物黏膜上皮细胞产生,分布在机体宿主-环境的界面位置。在本研究中,利用已克隆的驯鹿β-防御素reBD-1cDNA作为探针,经地高辛标记后再应用原位杂交技术检测reBD-1mRNA在驯鹿组织内的表达部位。结果显示reBD-1mRNA表达在舌背表面的复层扁平上皮内,实质性器官肾也表达在肾小管及肾小囊上皮内,而淋巴器官脾脏内reBD-1mRNA表达在淋巴细胞和红髓的巨噬细胞内。表明驯鹿β-防御素不仅表达在上皮细胞内,而且在非上皮细胞内也有表达,提示reBD-1在黏膜和系统防御中均起着重要的作用。 展开更多
关键词 Β-防御素 驯鹿 原位杂交
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驯鹿β-防御素-1(reBD-1)mRNA在驯鹿组织器官中的表达检测 被引量:7
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作者 吴萨日娜 赵艳芳 +2 位作者 余兴帮 都格尔斯仁 杨银凤 《中国草食动物》 2006年第6期23-26,共4页
为了检测reBD-1mRNA在驯鹿体内可能的表达器官,研究根据已知的reBD-1cDNA序列设计了一对预计扩增产物为121bp的引物,以驯鹿舌、食管、瘤胃、网胃、皱胃、十二指肠、回肠、结肠、肝、肺、气管、肾、膀胱、睾丸、附睾、心脏、脾脏中提取的... 为了检测reBD-1mRNA在驯鹿体内可能的表达器官,研究根据已知的reBD-1cDNA序列设计了一对预计扩增产物为121bp的引物,以驯鹿舌、食管、瘤胃、网胃、皱胃、十二指肠、回肠、结肠、肝、肺、气管、肾、膀胱、睾丸、附睾、心脏、脾脏中提取的总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测驯鹿的上述器官内reBD-1mRNA的表达情况。结果显示reBD-1mRNA在上述组织器官中均有表达,其中在舌、瘤胃、睾丸中表达最强;在食管、十二指肠、结肠、气管、脾脏中有中等量的表达;在网胃、皱胃、回肠、肝、肺、肾、膀胱、附睾、心脏内的表达较弱。β-防御素reBD-1在驯鹿体内的广泛表达提示reBD-1有助于驯鹿的先天性宿主防御。 展开更多
关键词 Β-防御素 驯鹿 组织表达
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骆驼β-防御素caBD-1全长cDNA的扩增 被引量:1
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作者 杨银凤 唐博 +1 位作者 曹贵方 王永胜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期264-268,共5页
获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设... 获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设计一条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功的克隆了骆驼β_防御素caBD_1cD NA的5′末端序列。本研究扩增出的caBD_1cDNA序列全322bp,其中包含一个由192bp组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原caBD_1肽。 展开更多
关键词 反向嵌套PCR 5’RACE 3’RACE Β-防御素 骆驼
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荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的差异表达 被引量:1
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作者 程兰玲 曹贵方 +3 位作者 温世勇 赵鹏伟 关洪敏 菅瑞珍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期65-68,共4页
本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%,BNBD7、TAP为98.... 本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%,BNBD7、TAP为98.5%;实时荧光定量PCR检测6种防御素的mRNA水平的表达,它们之间的表达量都有显著性差异(BNBD4与BNBD5除外),其中LAP表达量最多,BNBD7,EBD,BNBD5,BNBD4次之,TAP的表达量最低。 展开更多
关键词 Β-防御素 差异表达 荷斯坦奶牛 乳腺炎
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驯鹿β-防御素reBD-1 cDNA的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 杨银凤 赵艳芳 +1 位作者 余兴帮 郝永峰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期740-744,共5页
从驯鹿舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出reBD-1的cDNA,并重组到pBlueselectT载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的reBD-1的cDNA为β-防御素,因为该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码6... 从驯鹿舌黏膜上皮组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术扩增出reBD-1的cDNA,并重组到pBlueselectT载体,经限制性内切酶谱分析和DNA序列测定,证实所克隆的reBD-1的cDNA为β-防御素,因为该cDNA包含由192个碱基组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原防御素,该前原防御素含有β-防御素特征性结构即6个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。驯鹿β-防御素属首次发现,为更好地了解驯鹿黏膜防御机制有很大的帮助。 展开更多
关键词 Β-防御素 驯鹿 CDNA
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佳米驴β-防御素aBD-1组织表达
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作者 闫海龙 高晔 +2 位作者 庞全海 屈雷 杨银凤 《中国草食动物》 2010年第4期9-13,共5页
为检测aBD-1 mRNA在佳米驴体内可能的表达器官,根据已知aBD-1 cDNA的全长序列设计一对预计扩增产物为266bp的引物,以佳米驴舌背表面、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、气管、胰腺、膀胱、子宫、心脏、肝脏、肺脏、... 为检测aBD-1 mRNA在佳米驴体内可能的表达器官,根据已知aBD-1 cDNA的全长序列设计一对预计扩增产物为266bp的引物,以佳米驴舌背表面、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、气管、胰腺、膀胱、子宫、心脏、肝脏、肺脏、肾脏、脾脏、淋巴结、卵巢组织中提取的总RNA为模板,采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测佳米驴的上述器官内aBD-1 mRNA的表达情况,同时以β-肌动蛋白(β-actin)基因作为内参。结果显示:aBD-1 mRNA在佳米驴的舌、盲肠和结肠内有强的表达,在食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、直肠、气管内有比较强的表达,在膀胱和子宫内有弱的表达,而在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰腺、淋巴结、卵巢等实质性器官组织内无表达。 展开更多
关键词 佳米驴 Β-防御素 RT—PCR RACE
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荷斯坦奶牛乳腺LAP基因的克隆与序列分析
15
作者 程兰玲 曹贵方 +2 位作者 赵鹏伟 凃勇 包图雅 《湖南农业科学》 2012年第3期132-135,共4页
为了研究奶牛乳腺防御素基因的表达调控机制,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出LAP基因的核心片段序列,并与NCBI数据库序列比对同源性;进一步扩增其DNA序列中间片段;其后运用反向PCR技术并结合半巢式PCR技术扩增其侧翼的序列。... 为了研究奶牛乳腺防御素基因的表达调控机制,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出LAP基因的核心片段序列,并与NCBI数据库序列比对同源性;进一步扩增其DNA序列中间片段;其后运用反向PCR技术并结合半巢式PCR技术扩增其侧翼的序列。结果表明:序列与NCBI数据库中序列同源性为100%,确认为LAP基因;DNA序列扩增得到1 760 bp的中间序列,并预测了其酶切位点;得到5'侧翼序列107 bp,3'侧翼序列87 bp,经预测发现有转录因子GATA。为进一步研究防御素的防御功能、寻找防御素基因体外表达调控机制以及利用基因工程防治奶牛乳腺炎积累了基本资料。 展开更多
关键词 荷斯坦奶牛 乳腺炎 舌抗菌肽(LAP)基因 反向PCR 防御素
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