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长链非编码核糖核酸肺腺癌转移相关转录本1和核旁斑组装转录本1在低氧预适应小鼠海马神经保护中的作用研究
1
作者 侯海东 闫磊 +4 位作者 王丽平 杨静 桂玉成 杜永强 邵国 《中国脑血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期525-536,共12页
目的探索长链非编码核糖核酸(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)和核旁斑组装转录本1(NEAT1)在低氧预适应(HPC)小鼠海马细胞中的表达及其与神经保护的关系。方法(1)将36只雄性美国癌症研究所(ICR)小鼠按照随机数字表法完全随机分为3... 目的探索长链非编码核糖核酸(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)和核旁斑组装转录本1(NEAT1)在低氧预适应(HPC)小鼠海马细胞中的表达及其与神经保护的关系。方法(1)将36只雄性美国癌症研究所(ICR)小鼠按照随机数字表法完全随机分为3组:对照组、低氧组和低氧预处理组,每组12只。对照组小鼠不进行低氧暴露,低氧组小鼠低氧暴露1次,低氧预处理组小鼠低氧暴露4次。低氧处理结束后立即将所有小鼠脱颈椎处死并分离海马组织分组保存。(2)将HT22细胞培养于含10%胎牛血清和100 U/ml青霉素-链霉素的培养基,细胞汇合率大于90%时将其转移至24孔板中培养后分2批进行处理。通过转染试剂将6 pmol的乱序小干扰核糖核酸(siRNA)、MALAT1 siRNA(siMALAT1)、siNEAT1、siMALAT1+siNEAT1分别一一对应转染至第一批HT22细胞的阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+siNEAT1组细胞中,空白组不做任何处理;然后在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)培养48 h;第二批HT22细胞中,利用转染试剂分别将6 pmol的乱序siRNA、乱序siRNA、siMALAT1、siMALAT1、siNEAT1、siNEAT1分别一一对应转染至阴性对照组、阴性对照+氧糖剥夺-再灌注(OGD/R)组、siMALAT1组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1组、siNEAT1+OGD/R组的HT22细胞中,转染后48 h将阴性对照组、siMALAT1组、siNEAT1组HT22细胞在正常条件下(5%CO_(2)和95%空气)继续培养,将阴性对照+OGD/R组、siMALAT1+OGD/R组、siNEAT1+OGD/R组细胞进行OGD/R处理,即低氧条件下(1%O_(2)+5%CO_(2)+94%N_(2))暴露8 h,之后再进行正常条件下培养16 h。(3)通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹法测定各组小鼠海马组织中MALAT1、NEAT1、N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基2B(NR2B)信使核糖核酸(mRNA)、NR2B蛋白水平的相对表达量和各组HT22细胞转染处理后NR2B mRNA、NR2B蛋白水平的相对表达量及各组HT22细胞转染和OGD/R后的血影蛋白分解产物、活化半胱氨酸蛋白酶蛋白3的相对表达量,并计算各组HT22细胞存活率。结果(1)3组小鼠海马中MALAT1(F=43.92)、NEAT1(F=506.40)、NR2B mRNA(F=50.64)及NR2B蛋白(F=41.24)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,低氧组MALAT1[(1.68±0.06)比(1.00±0.08)]、NR2B mRNA[(1.26±0.06)比(1.00±0.01)]及NR2B蛋白[(1.47±0.05)比(1.00±0.01)]的相对表达量均增加(均P<0.05),而NEAT1[(1.02±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量组间差异无统计学意义(P>0.05),低氧预处理组中MALAT1[(1.12±0.13)比(1.00±0.08)]和NEAT1[(2.88±0.10)比(1.00±0.03)]的相对表达量增加;与低氧组比较,低氧预处理组NR2B mRNA[(0.54±0.07)比(1.26±0.06)]及NR2B蛋白[(1.17±0.07)比(1.47±0.05)]的相对表达量均降低(均P<0.05)。(2)5组HT22细胞转染后NR2B mRNA(F=36.92)及NR2B蛋白(F=56.98)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与阴性对照组相比,siMALAT1组[NR2B mRNA:(2.04±0.08)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.72±0.13)比(0.93±0.02)]、siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.15±0.13)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(1.87±0.46)比(0.93±0.02)]、siMALAT1+siNEAT1组[NR2B mRNA:(2.09±0.16)比(0.94±0.04),NR2B蛋白:(2.07±0.30)比(0.93±0.02)]的NR2B mRNA及NR2B蛋白的相对表达量均增加(均P<0.05)。(3)6组HT22细胞转染及OGD/R处理后血影蛋白分解产物(145/150 kDa蛋白;F=12.43)、血影蛋白分解产物(120 kDa蛋白;F=7.15)、活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白(F=6.61)的相对表达量差异均有统计学意义(均P<0.05)。与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(0.85±0.34)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.52±0.19)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.15±0.24)]相对表达量均增加(均P<0.05);与阴性对照+OGD/R组比较,siMALAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.42±0.48)比(1.23±0.17)]、120 kDa[(1.33±0.37)比(0.80±0.21)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(2.43±0.35)比(1.46±0.39)]相对表达量均增加(均P<0.05);与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组的145/150 kDa[(1.28±0.44)比(0.87±0.32)]、120 kDa[(0.81±0.36)比(0.63±0.16)]的血影蛋白分解产物及活化的半胱氨酸蛋白酶蛋白3蛋白[(1.51±0.45)比(1.01±0.27)]相对表达量均增加(均P<0.05)。(4)6组HT22细胞存活率差异有统计学意义(F=5.54,P<0.05)。与阴性对照组比较,siMALAT1组、siNEAT1组、siMALAT1+OGD/R组及siNEAT1+OGD/R组HT22细胞存活率均降低[(0.65±0.40)、(0.76±0.35)、(0.24±0.17)、(0.23±0.16)比(0.84±0.04),均P<0.05];与siMALAT1组比较,siMALAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.24±0.17)比(0.65±0.40),P<0.05];与siNEAT1组比较,siNEAT1+OGD/R组细胞存活率降低[(0.23±0.16)比(0.76±0.35),P<0.05]。结论HPC增加了小鼠海马组织中MALAT1和NEAT1的表达,MALAT1和NEAT1可能通过影响NR2B的表达参与小鼠缺血缺氧后的神经保护作用。 展开更多
关键词 低氧预处理 长非编码RNA MALAT1 NEAT1 NR2B
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低氧预适应对HT22细胞和小鼠海马突触和突触旁中NR2B及其酪氨酸1336的磷酸化的影响
2
作者 王志刚 刘晓蕾 +5 位作者 闫磊 王志广 张志勇 姜树原 杨静 邵国 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第11期1-10,共10页
目的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基2B(NR2B)及其磷酸化参与大脑缺血/低氧神经损伤。低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)作为一种内源性保护干预措施,可以保护大脑免受缺血/低氧损伤。本研究拟通过体内和体外实验研究HPC对海马... 目的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基2B(NR2B)及其磷酸化参与大脑缺血/低氧神经损伤。低氧预适应(hypoxic preconditioning,HPC)作为一种内源性保护干预措施,可以保护大脑免受缺血/低氧损伤。本研究拟通过体内和体外实验研究HPC对海马细胞中NR2B及其两个酪氨酸位点(1252和1336)磷酸化的影响,探讨其在HPC神经保护中的作用。方法6~8周龄雄性SPF级ICR小鼠和小鼠海马神经元细胞系HT22重复暴露于低氧环境复制HPC动物模型和细胞模型。免疫蛋白印迹和免疫荧光检测HPC小鼠海马和HT22细胞中NR2B的水平及其酪氨酸1336(pY1336NR2B)和1252(pY1252NR2B)的磷酸化水平。通过免疫蛋白印迹分析NR2B、pY1336NR2B和pY1252NR2B在突触部位(TxP)和突触旁部位(TxS)中的分布,同时检测指示细胞凋亡的cleaved caspase-3和α-spectrin的水平。结果HPC下调小鼠海马和HT22细胞中NR2B和pY1336NR2B的水平。小鼠海马突触旁部位(TxS)中NR2B和pY1336NR2B水平的变化与海马和HT22细胞中的变化相似,而突触部位(TxP)中的变化则表现出相反的趋势。结论NR2B和pY1336NR2B的下调可能参与了HPC诱导的神经保护作用,它们在突触和突触旁的定位可能在神经保护中发挥不同的作用。 展开更多
关键词 低氧预适应 NR2B 突触 细胞凋亡
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低氧预适应对小鼠海马HT22细胞线粒体能量代谢的影响 被引量：1
3
作者 齐瑞芳 李娜 +6 位作者 王立军 吕军 石瑞丽 马宝慧 时静华 郝肖琼 邵国 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第10期1585-1588,1594,共5页
目的探讨低氧预适应(HPC)对小鼠海马HT22细胞线粒体能量代谢的影响及其可能机制。方法将小鼠海马神经细胞HT22分为对照组、低氧组、HPC组,通过检测各组三磷酸腺苷(ATP)和活性氧(ROS)的水平,以观察HPC对细胞线粒体能量代谢的影响;采用Wes... 目的探讨低氧预适应(HPC)对小鼠海马HT22细胞线粒体能量代谢的影响及其可能机制。方法将小鼠海马神经细胞HT22分为对照组、低氧组、HPC组,通过检测各组三磷酸腺苷(ATP)和活性氧(ROS)的水平,以观察HPC对细胞线粒体能量代谢的影响;采用Western blot法检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR蛋白和自噬底物P62蛋白的表达;细胞免疫荧光法检测磷酸化mTOR,LysoTracker^(TM)探针检测溶酶体,验证HPC引起细胞代谢改变是否与mTOR/自噬通路有关。结果与对照组相比,低氧组ATP明显下降,ROS水平增加,HPC处理后,ATP水平增加,ROS水平降低。与对照组相比,HPC组磷酸化mTOR表达下调,自噬底物P62表达下调。结论HPC可能通过mTOR/自噬信号通路影响HT22细胞能量代谢从而对HT22细胞发挥保护作用。 展开更多
关键词 低氧预适应 线粒体代谢 MTOR 自噬 神经保护
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Ezrin蛋白在幽门螺杆菌感染的结节性胃炎中的研究进展
4
作者 王朋 朱宏伟 +3 位作者 姜树原 刘晓蕾 高冰 邵国 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期150-156,共7页
ERM蛋白家族(包括ezrin、radixin、moesin)在细胞形态、迁移和信号转导中发挥着至关重要的作用。Ezrin是ERM蛋白家族的成员之一,是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染宿主所致细胞毒性的重要介质,通过ezrin磷酸化可以调节其与肌动蛋... ERM蛋白家族(包括ezrin、radixin、moesin)在细胞形态、迁移和信号转导中发挥着至关重要的作用。Ezrin是ERM蛋白家族的成员之一,是幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)感染宿主所致细胞毒性的重要介质,通过ezrin磷酸化可以调节其与肌动蛋白细胞骨架的相互作用,进而对细胞形态产生显著影响。本文综述了ezrin蛋白在H.pylori感染引发的结节性胃炎中的重要性,探讨了ezrin蛋白的结构及其功能、信号通路及磷酸化与结节性胃炎的关系,为以ezrin蛋白作为潜在的治疗靶点对结节性胃炎的防治提供新思路。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 结节性胃炎 ERM蛋白 EZRIN
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透明细胞肾细胞癌的表观遗传学研究进展 被引量：9
5
作者 高永胜 闫少春 +1 位作者 贾小娥 邵国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期178-182,共5页
肾脏肿瘤的发病率在人类泌尿系统肿瘤中排名第3，约占恶性肿瘤的3%，发病年龄主要在50~70岁，每年导致90000多例患者死亡，且呈递增趋势［1］。肾癌的具体发病机制不详，除遗传因素外，吸烟、肥胖、污染和辐射等也是重要因素。大多数透... 肾脏肿瘤的发病率在人类泌尿系统肿瘤中排名第3，约占恶性肿瘤的3%，发病年龄主要在50~70岁，每年导致90000多例患者死亡，且呈递增趋势［1］。肾癌的具体发病机制不详，除遗传因素外，吸烟、肥胖、污染和辐射等也是重要因素。大多数透明细胞肾细胞癌（clearcellrenalcellcarcinoma，ccRCC）患者在早期无任何症状，20%~30%患者在诊断时已发展或转移［2］，故预后较差；患者出现诸如血尿和腰痛等典型症状时，已失去最佳的治疗机会。目前，ccRCC发生机理和机制尚未完全清楚。近年来对ccRCC病因及发病机制的深入研究发现，许多表观遗传学的改变，尤其是DNA甲基化（DNAmethylation）异常、组蛋白修饰及非编码RNA调节可能是ccRCC发生发展的重要分子机制，主要涉及DNA、蛋白质和RNA等水平调控基因的表达。这些都为ccRCC的病因研究及诊断、治疗和预后提供了新的理念与途径。 展开更多
关键词 透明细胞肾细胞癌 DNA甲基化 组蛋白修饰 微小RNA DNA甲基转移酶
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丙酮酸钠对小鼠海马神经HT22细胞神经保护作用 被引量：2
6
作者 李娜 蔡珂沁 +7 位作者 李文欣 吕军 石瑞丽 马宝慧 时静华 郝肖琼 邵国 齐瑞芳 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1522-1526,共5页
目的研究丙酮酸钠(sodium pyruvate,SP)在低氧条件下对小鼠海马神经细胞HT22的神经保护作用。方法在低氧条件下,用MTS检测不同浓度SP孵育HT22细胞的活性变化;从形态学上,采用铁染色观察SP对HT22细胞的影响;应用溶酶体染色检测SP对HT22... 目的研究丙酮酸钠(sodium pyruvate,SP)在低氧条件下对小鼠海马神经细胞HT22的神经保护作用。方法在低氧条件下,用MTS检测不同浓度SP孵育HT22细胞的活性变化;从形态学上,采用铁染色观察SP对HT22细胞的影响;应用溶酶体染色检测SP对HT22细胞的溶酶体变化;采用Western blot检测Bcl-2、Bax和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的表达。结果5 mmol·L^(-1)的SP能提高HT22细胞活力以及减少HT22细胞损伤;SP提高Bcl-2的表达,降低Bax的表达,使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加。结论在低氧的条件下给予SP可能通过减少HT22细胞凋亡,激活自噬发挥神经保护作用,从而降低低氧损伤。 展开更多
关键词 低氧 丙酮酸钠 HT22细胞 细胞凋亡 自噬 神经保护
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