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少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因突变分析及其真核表达载体的构建
被引量:
6
1
作者
雷科
车团结
+3 位作者
王锦明
邓旎
张琳
何祥一
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期610-613,共4页
目的克隆少汗型外胚层发育不良症(HED)eda-A1基因并进行突变分析,同时构建eda-A1基因编码序列突变型(M)和野生型(W)的真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步明析eda基因的功能奠定基础。方法设计含有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点的...
目的克隆少汗型外胚层发育不良症(HED)eda-A1基因并进行突变分析,同时构建eda-A1基因编码序列突变型(M)和野生型(W)的真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步明析eda基因的功能奠定基础。方法设计含有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点的引物,从HED患者和正常人外周血淋巴细胞中提取总mRNA,利用RT-PCR法克隆eda-A1(M/W)基因cDNA序列;并运用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pcDNA3.1(-)载体和eda-A1基因片段,将eda-A1(M/W)插入到pcDNA3.1(-)载体中,从而构建新的真核表达载体,命名为pcDNA3.1(-)-eda-A1-M和pcDNA3.1(-)-eda-A1-W。结果成功克隆少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因,并发现未见报道过的907位A→C错义突变,导致306位编码氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸;经PCR法、重组载体双酶切法、DNA测序验证,成功构建了pcDNA3.1(-)-eda-A1-W/M的真核表达载体。结论成功构建少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因(突变型和野生型)真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步研究该基因在牙齿发育中的生物学作用奠定了实验基础。
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关键词
少汗型外胚层发育不良症
eda—A1基因
突变
真核表达载体
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职称材料
牛轮状病毒VP7基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立
被引量:
3
2
作者
魏锁成
巩转娣
+1 位作者
车团结
田风林
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期151-154,共4页
为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒(BRV)VP7基因的荧光定量PCR检测方法,本研究设计扩增BRV VP7基因的特异性引物,将扩增的VP7基因片段(342 bp)克隆于pMD18-T载体中(pMD-VP7),作为重组质粒标准品,建立EvaGreen荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)...
为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒(BRV)VP7基因的荧光定量PCR检测方法,本研究设计扩增BRV VP7基因的特异性引物,将扩增的VP7基因片段(342 bp)克隆于pMD18-T载体中(pMD-VP7),作为重组质粒标准品,建立EvaGreen荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。经反应条件优化,结果表明该方法的最低检测量为8.03拷贝/μL。该方法对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复变异系数均小于3%。采用该方法对12份ELISA阳性样本检测出10份阳性,符合率83.33%。本研究建立的BVR VP7 qRT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和对标本的检测能力较强等特点,可以用于临床诊断和流行病学调查。
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关键词
轮状病毒
VP7基因
实时荧光定量PCR
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职称材料
兰州地区唾液幽门螺杆菌感染状况分析
被引量:
1
3
作者
郭瑞
车团结
+3 位作者
居军
杨森
何祥一
张莹
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期358-362,共5页
目的: 分析兰州地区人群唾液幽门螺杆菌的感染状况,为防治幽门螺杆菌提供科学依据。方法 收集兰州地区941例患者的唾液标本进行幽门螺杆菌的细菌学培养,并进行革兰染色镜检及生化特性鉴定。对不同口腔卫生情况、口腔疾病、性别、...
目的: 分析兰州地区人群唾液幽门螺杆菌的感染状况,为防治幽门螺杆菌提供科学依据。方法 收集兰州地区941例患者的唾液标本进行幽门螺杆菌的细菌学培养,并进行革兰染色镜检及生化特性鉴定。对不同口腔卫生情况、口腔疾病、性别、城乡、年龄段患者的唾液幽门螺杆菌感染率及生长情况进行分析。结果 兰州地区人群唾液幽门螺杆菌的阳性率为42.72%。不同口腔卫生和口腔疾病情况下,患者唾液幽门螺杆菌的阳性率均存在统计学差异(P&lt;0.05)。男性与女性的唾液幽门螺杆菌阳性率分别为38.45%、47.89%,女性阳性率高于男性(P=0.004,χ2=8.492);城市、农村人群的唾液幽门螺杆菌阳性率分别为33.99%、50.93%,农村人群的阳性率高于城市人群(P=0.000,χ2=27.551)。10~59岁各年龄段唾液幽门螺杆菌阳性率基本上变化不大,呈平坦趋势,60岁之后呈上升趋势。不同年龄段唾液幽门螺杆菌生长量无统计学差异(P=0.086)。结论 兰州地区人群的唾液幽门螺杆菌阳性率与其口腔卫生、口腔疾病、性别、年龄及生活环境等均相关。
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关键词
幽门螺杆菌
细菌培养
兰州
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职称材料
题名
少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因突变分析及其真核表达载体的构建
被引量:
6
1
作者
雷科
车团结
王锦明
邓旎
张琳
何祥一
机构
兰州
大学口腔医院口腔修复科
兰州
大学生命科学院细胞生物学研究所
兰州百源基因技术有限公司
出处
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期610-613,共4页
基金
甘肃省科技攻关计划资助项目(0709TCYA053)
文摘
目的克隆少汗型外胚层发育不良症(HED)eda-A1基因并进行突变分析,同时构建eda-A1基因编码序列突变型(M)和野生型(W)的真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步明析eda基因的功能奠定基础。方法设计含有BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点的引物,从HED患者和正常人外周血淋巴细胞中提取总mRNA,利用RT-PCR法克隆eda-A1(M/W)基因cDNA序列;并运用BamHⅠ和HindⅢ双酶切pcDNA3.1(-)载体和eda-A1基因片段,将eda-A1(M/W)插入到pcDNA3.1(-)载体中,从而构建新的真核表达载体,命名为pcDNA3.1(-)-eda-A1-M和pcDNA3.1(-)-eda-A1-W。结果成功克隆少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因,并发现未见报道过的907位A→C错义突变,导致306位编码氨基酸由谷氨酰胺变异为脯氨酸;经PCR法、重组载体双酶切法、DNA测序验证,成功构建了pcDNA3.1(-)-eda-A1-W/M的真核表达载体。结论成功构建少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因(突变型和野生型)真核表达载体pcDNA3.1(-)-eda-A1-M/W,为进一步研究该基因在牙齿发育中的生物学作用奠定了实验基础。
关键词
少汗型外胚层发育不良症
eda—A1基因
突变
真核表达载体
Keywords
hypohidrotic ectodermal dysplasia
eda-A1 gene
mutation
eukaryotic expression vector
分类号
R596 [医药卫生—内科学]
R450 [医药卫生—治疗学]
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职称材料
题名
牛轮状病毒VP7基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立
被引量:
3
2
作者
魏锁成
巩转娣
车团结
田风林
机构
西北民族大学生命科学与工程学院
西北民族大学医学院附属医院
兰州百源基因技术有限公司
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期151-154,共4页
基金
2007年甘肃省科技支撑计划项目(0708NKCA079)
甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目(GNSW-2010-10)
文摘
为建立快速特异的定量检测牛轮状病毒(BRV)VP7基因的荧光定量PCR检测方法,本研究设计扩增BRV VP7基因的特异性引物,将扩增的VP7基因片段(342 bp)克隆于pMD18-T载体中(pMD-VP7),作为重组质粒标准品,建立EvaGreen荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法。经反应条件优化,结果表明该方法的最低检测量为8.03拷贝/μL。该方法对牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒、猪流行性腹泻病毒及牛结核分枝杆菌的检测结果均为阴性,表明其具有良好的特异性。批内和批间重复变异系数均小于3%。采用该方法对12份ELISA阳性样本检测出10份阳性,符合率83.33%。本研究建立的BVR VP7 qRT-PCR检测方法具有特异、灵敏、快速和对标本的检测能力较强等特点,可以用于临床诊断和流行病学调查。
关键词
轮状病毒
VP7基因
实时荧光定量PCR
Keywords
rotavims
VP7 gene
real-time fluorescence quantitative PCR
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
兰州地区唾液幽门螺杆菌感染状况分析
被引量:
1
3
作者
郭瑞
车团结
居军
杨森
何祥一
张莹
机构
兰州
大学第一临床医学院检验科
兰州
大学生命科学院细胞生物研究所
甘肃省人民医院检验中心
兰州
大学口腔医学院口腔修复学教研室
兰州百源基因技术有限公司
出处
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第4期358-362,共5页
文摘
目的: 分析兰州地区人群唾液幽门螺杆菌的感染状况,为防治幽门螺杆菌提供科学依据。方法 收集兰州地区941例患者的唾液标本进行幽门螺杆菌的细菌学培养,并进行革兰染色镜检及生化特性鉴定。对不同口腔卫生情况、口腔疾病、性别、城乡、年龄段患者的唾液幽门螺杆菌感染率及生长情况进行分析。结果 兰州地区人群唾液幽门螺杆菌的阳性率为42.72%。不同口腔卫生和口腔疾病情况下,患者唾液幽门螺杆菌的阳性率均存在统计学差异(P&lt;0.05)。男性与女性的唾液幽门螺杆菌阳性率分别为38.45%、47.89%,女性阳性率高于男性(P=0.004,χ2=8.492);城市、农村人群的唾液幽门螺杆菌阳性率分别为33.99%、50.93%,农村人群的阳性率高于城市人群(P=0.000,χ2=27.551)。10~59岁各年龄段唾液幽门螺杆菌阳性率基本上变化不大,呈平坦趋势,60岁之后呈上升趋势。不同年龄段唾液幽门螺杆菌生长量无统计学差异(P=0.086)。结论 兰州地区人群的唾液幽门螺杆菌阳性率与其口腔卫生、口腔疾病、性别、年龄及生活环境等均相关。
关键词
幽门螺杆菌
细菌培养
兰州
Keywords
Helicobacter pylori
bacterial culture
Lanzhou
分类号
R515 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
少汗型外胚层发育不良症eda-A1基因突变分析及其真核表达载体的构建
雷科
车团结
王锦明
邓旎
张琳
何祥一
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
牛轮状病毒VP7基因荧光定量RT-PCR检测方法的建立
魏锁成
巩转娣
车团结
田风林
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
兰州地区唾液幽门螺杆菌感染状况分析
郭瑞
车团结
居军
杨森
何祥一
张莹
《华西口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
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职称材料
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