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犬体内唾液酸受体的组织分布及对H3N2亚型犬流感病毒的易感性研究 被引量:3
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作者 秦海斌 强京宁 +5 位作者 宋珍华 贺星亮 温海 朱骞 包喜军 宋庆平 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期76-83,共8页
目的测定犬体不同组织器官内流感病毒受体的类型和分布差异,验证犬对H3N2亚型犬流感病毒的易感性。方法采集健康英国史宾格犬的不同组织器官,利用凝集素免疫荧光组织染色方法,检测组织内人型流感病毒唾液酸受体唾液酸α2,6-半乳糖(SAα2... 目的测定犬体不同组织器官内流感病毒受体的类型和分布差异,验证犬对H3N2亚型犬流感病毒的易感性。方法采集健康英国史宾格犬的不同组织器官,利用凝集素免疫荧光组织染色方法,检测组织内人型流感病毒唾液酸受体唾液酸α2,6-半乳糖(SAα2,6Gal)和禽型流感病毒唾液酸受体唾液酸α2,3-半乳糖(SAα2,3Gal)类型与分布;用H3N2亚型犬流感病毒人工感染英国史宾格犬,采集不同组织器官,用免疫组织化学染色法进行病毒的组织分布差异性分析。结果多种组织器官中同时存在着SAα2,6Gal和SAα2,3Gal两种类型的受体,少数组织器官中存在单一受体;SAα-2,6Gal受体在分布的广泛性、在同一器官中的表达量上高于SAα-2,3Gal型受体。人工感染后,病毒分布量与受体量整体趋势基本一致,仅在个别器官中存在差别。结论禽型和人型流感病毒受体广泛分布于犬的各个组织器官,犬具备同时感染禽型和人型流感病毒的分子基础。 展开更多
关键词 犬流感病毒 唾液酸受体 H3N2 人工感染
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犬热应激过程中HSP70和免疫相关细胞因子的变化 被引量:4
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作者 朱骞 秦海斌 +5 位作者 孙钦伟 宋珍华 张雅晨 温海 贺星亮 张汇东 《动物医学进展》 北大核心 2016年第1期29-33,共5页
为研究热应激造成犬免疫机能损伤的机制及损伤过程中免疫相关细胞因子的变化规律,分别在夏季持续高热天气中每隔7d、分5次采集了拉布拉多犬的血清和外周血单个核细胞(PBMC),检测血清中皮质醇(COR)、热休克蛋白70(HSP70)、白细胞介素2((I... 为研究热应激造成犬免疫机能损伤的机制及损伤过程中免疫相关细胞因子的变化规律,分别在夏季持续高热天气中每隔7d、分5次采集了拉布拉多犬的血清和外周血单个核细胞(PBMC),检测血清中皮质醇(COR)、热休克蛋白70(HSP70)、白细胞介素2((IL-2)和白细胞介素(IL-10)、Toll样受体2(TLR-2)和Toll样受体4(TLR-4)的含量及PBMC中HSP70、IL-2、IL-10、TLR-2、TLR-4的mRNA的表达,并与春季非应激温度下检测的同类指标进行比较。结果显示,夏季持续高热天气中犬长期处于应激状态,其PBMC中HSP70mRNA表达上调,IL-2、IL-10、TLR-2、TLR-4mRNA表达下调;血清中COR浓度持续高于正常值,HSP70浓度升高,IL-2、TLR-2浓度未发生显著变化,IL-10、TLR-4浓度显著低于正常水平。热应激条件下PBMC中白介素和Toll样受体mRNA表达下调,可能是导致犬的免疫功能抑制、抗感染免疫机能下降的原因。 展开更多
关键词 热应激 热应激蛋白 白细胞介素 TOLL样受体 MRNA
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热应激对拉布拉多犬生理、激素、血液生化指标的影响 被引量:12
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作者 秦海斌 朱骞 +5 位作者 张汇东 温海 高一龙 贺星亮 强京宁 李刚 《动物医学进展》 北大核心 2015年第4期41-45,共5页
为研究犬热应激时的生理生化状态,并探讨以生理生化指标作为衡量犬热应激程度的可行性,分别在14、18、28、35℃测量了拉布拉多犬的生理生化指标。结果表明,犬在14℃、18℃体内指标处于正常水平,在28℃、35℃时处于热应激状态;与正常水... 为研究犬热应激时的生理生化状态,并探讨以生理生化指标作为衡量犬热应激程度的可行性,分别在14、18、28、35℃测量了拉布拉多犬的生理生化指标。结果表明,犬在14℃、18℃体内指标处于正常水平,在28℃、35℃时处于热应激状态;与正常水平比较,犬在热应激时呼吸频率显著加快、血清皮质醇(COR)水平显著升高,呼吸、COR值升高与温度、温湿指数(THI)之间存在显著相关性;直肠温度、ACTH未发生显著变化;血清中的主要酶类中ALT、ASP、CK、LDH在急性热应激时显著升高,然后恢复至正常水平,GLU、ALP未发生显著变化。证明在犬热应激研究中,气温、THI、COR、呼吸频率可作为主要的参考指标;体温及血液中ACTH、GLU、ALP含量与犬热应激程度不相关;ALT、ASP、CK、LDH在不同动物热应激中的变化规律不一致,能否作为犬热应激程度的指示指标有待进一步研究。 展开更多
关键词 热应激 温湿指数 激素 生理指标 生化指标
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H3N2亚型犬流感病毒RT-LAMP快速检测方法的建立及应用 被引量:5
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作者 秦海斌 温海 +5 位作者 贺星亮 宋珍华 朱骞 包喜军 蒿阳 张艳龙 《动物医学进展》 北大核心 2019年第4期9-15,共7页
为了快速诊断H3N2亚型犬流感病毒(CIV)感染,根据H3N2亚型CIV的M和HA基因序列,设计了3组LAMP引物,优化反应条件,建立了H3N2亚型CIV的RT-LAMP检测方法。结果表明,RT-LAMP方法能在63℃恒温条件下,在45min内完成扩增,通过反应管中预加的荧... 为了快速诊断H3N2亚型犬流感病毒(CIV)感染,根据H3N2亚型CIV的M和HA基因序列,设计了3组LAMP引物,优化反应条件,建立了H3N2亚型CIV的RT-LAMP检测方法。结果表明,RT-LAMP方法能在63℃恒温条件下,在45min内完成扩增,通过反应管中预加的荧光染料颜色的变化实现目视化判定。该方法对犬的常见病原无交叉反应,具有较好特异性;灵敏度是常规RT-PCR方法的100倍。该方法操作简单、快速灵敏、特异性强,适合现场应用,对H3N2亚型CIV的检测具有实际的应用价值。 展开更多
关键词 H3N2亚型犬流感病毒 环介导等温扩增 检测
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犬IFN-γ的原核表达及其对A型流感病毒H3N2亚型的抑制作用 被引量:3
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作者 秦海斌 朱海娟 +4 位作者 朱骞 宋珍华 温海 贺星亮 高一龙 《动物医学进展》 北大核心 2016年第7期1-6,共6页
为研究犬的7干扰素(IFN-γ)对犬流感病毒H3N2亚型的抑制作用,由经ConA诱导过的健康犬淋巴细胞中特异性地扩增犬IFN-γ(cIFN-γ)基因,构建重组原核表达载体pET-cIFN-γ,转化宿主菌BL21(DE3)中进行诱导表达,以MDCK—VSV法对纯... 为研究犬的7干扰素(IFN-γ)对犬流感病毒H3N2亚型的抑制作用,由经ConA诱导过的健康犬淋巴细胞中特异性地扩增犬IFN-γ(cIFN-γ)基因,构建重组原核表达载体pET-cIFN-γ,转化宿主菌BL21(DE3)中进行诱导表达,以MDCK—VSV法对纯化后产物进行抗病毒活性鉴定,并在MDCK细胞上测定对H3N2亚型犬流感病毒的抑制作用。结果表明,表达产物以包涵体形式存在,经变性、复性、纯化后,所制备犬IFN-γ的抗病毒活性为1.1×105U/rag,重组犬IFN-γ稀释2。倍后对犬流感病毒的增殖仍具有明显抑制作用。本研究成功表达了具备抗H3N2亚型流感病毒活性的犬IFN-γ,为犬流感病毒新型药物的开发奠定了基础。 展开更多
关键词 Γ干扰素 原核表达 流感病毒
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运输应激对拉布拉多犬血液皮质醇和生化指标的影响 被引量:4
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作者 朱骞 秦海斌 +5 位作者 温海 高一龙 贺星亮 宋珍华 李刚 张汇东 《天津农学院学报》 CAS 2018年第2期39-41,共3页
为探讨运输对犬的影响,本试验以拉布拉多犬为实验动物,运输前和运输2 h后分别采血,应用放射免疫、生化等方法测定血液皮质醇、促肾上腺皮质激素和生化指标。结果显示,运输后皮质醇(COR)浓度和谷草转氨酶(AST)比运输前显著增高(P<0.0... 为探讨运输对犬的影响,本试验以拉布拉多犬为实验动物,运输前和运输2 h后分别采血,应用放射免疫、生化等方法测定血液皮质醇、促肾上腺皮质激素和生化指标。结果显示,运输后皮质醇(COR)浓度和谷草转氨酶(AST)比运输前显著增高(P<0.05),肌酸激酶(CK)活性极显著增高(P<0.01),促肾上腺皮质激素(ACTH)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖(GLU)无明显差异(P>0.05)。结果表明,2 h运输可引起拉布拉多犬血液皮质醇、谷草转氨酶和肌酸激酶水平的变化。 展开更多
关键词 运输应激 拉布拉多犬 生化指标 皮质醇
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犬β-防御素cBD103的原核表达和纯化
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作者 朱骞 包银莉 +4 位作者 秦海斌 宋珍华 贺星亮 温海 高一龙 《动物医学进展》 北大核心 2017年第5期26-29,共4页
将犬β-防御素103(canineβ-defensin 103,cBD103)基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-cBD103,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白,并用肠激酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE鉴定... 将犬β-防御素103(canineβ-defensin 103,cBD103)基因亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-cBD103,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达后,利用Ni-NTA亲和层析纯化该蛋白,并用肠激酶酶切融合蛋白,SDS-PAGE鉴定表达产物和纯化产物。结果表明,质粒pET-cBD103经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,大肠埃希菌中成功表达出目的蛋白,蛋白大小约为24ku,以可溶性表达为主。经过纯化和酶切,得到大小8ku的cBD103,与预期大小一致。该研究在大肠埃希菌中表达了目的蛋白,为下一步大规模制备cBD103奠定了基础。 展开更多
关键词 犬阻防御素103 原核表达 纯化
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