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鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达与多克隆抗体制备
被引量：
2
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作者
张喜文
鲁绍芳
+8 位作者
李盼盼
冉梦媛
李卓燕
焦凤超
董建国
黄立
赵聘
曲哲会
时代
《养殖与饲料》
2023年第4期19-25,共7页
[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)...
[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE和Western blot进行IPTG诱导表达产物分析与鉴定,从IPTG的浓度和诱导时间进行表达条件优化,并进行表达产物可溶性分析,重组DTMUV NS1蛋白经亲和层析纯化后免疫小鼠,制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,并通过间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。[结果]成功克隆DTMUV NS1基因,约1065 bp,获得重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)后,可见分子质量约43 ku的特异蛋白,可以与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生免疫反应,终浓度为0.8 mmol/L的IPTG诱导2~5 h为DTMUV NS1蛋白最佳表达条件,呈包涵体形式表达,经亲和层析纯化后,成功获得分子质量约43ku的NS1蛋白,蛋白质量浓度为329μg/m L,鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体可以与DTMUV发生特异性免疫反应。[结论]本研究利用原核表达系统表达和纯化DTMUV NS1蛋白,并制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,可为DTMUV致病机制研究和免疫学检测方法建立提供物质材料与技术指导。
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关键词
鸭坦布苏病毒
NS1蛋白
原核表达系统
多克隆抗体
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职称材料
题名
鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达与多克隆抗体制备
被引量：
2
1
作者
张喜文
鲁绍芳
李盼盼
冉梦媛
李卓燕
焦凤超
董建国
黄立
赵聘
曲哲会
时代
机构
信阳
农林学院动物科技学院
信阳市畜禽重大疫病防控综合技术研究重点实验室
河南省水禽资源开发利用与
疫病
防控
工程
技术
研究
中心
河南省
信阳市
浉河区农业农村局
出处
《养殖与饲料》
2023年第4期19-25,共7页
基金
河南省科技攻关项目(222102110188)
信阳农林学院高水平科研孵化器建设项目(FCL202004),信阳农林学院科技创新团队建设项目(XNKJTD-014),信阳农林学院青年科研基金项目(20200113),信阳农林学院青年科研基金项目(QN2021012)
信阳市创新应用专项(20200016)。
文摘
[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE和Western blot进行IPTG诱导表达产物分析与鉴定,从IPTG的浓度和诱导时间进行表达条件优化,并进行表达产物可溶性分析,重组DTMUV NS1蛋白经亲和层析纯化后免疫小鼠,制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,并通过间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。[结果]成功克隆DTMUV NS1基因,约1065 bp,获得重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)后,可见分子质量约43 ku的特异蛋白,可以与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生免疫反应,终浓度为0.8 mmol/L的IPTG诱导2~5 h为DTMUV NS1蛋白最佳表达条件,呈包涵体形式表达,经亲和层析纯化后,成功获得分子质量约43ku的NS1蛋白,蛋白质量浓度为329μg/m L,鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体可以与DTMUV发生特异性免疫反应。[结论]本研究利用原核表达系统表达和纯化DTMUV NS1蛋白,并制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,可为DTMUV致病机制研究和免疫学检测方法建立提供物质材料与技术指导。
关键词
鸭坦布苏病毒
NS1蛋白
原核表达系统
多克隆抗体
Keywords
duck Tembusu virus
NS1 protein
prokaryotic expression system
polyclonal antibody
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达与多克隆抗体制备
张喜文
鲁绍芳
李盼盼
冉梦媛
李卓燕
焦凤超
董建国
黄立
赵聘
曲哲会
时代
《养殖与饲料》
2023
2
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