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绵羊YAP1基因的克隆及其真核表达载体和突变型载体的构建
1
作者
李达
孙伟
+6 位作者
苏锐
张占英
马月辉
张有法
陈玲
吴文忠
周洪
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1198-1204,共7页
本研究旨在克隆绵羊YAP1基因CDS序列,构建并鉴定其真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1,及其磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1S42A。本研究利用RT-PCR技术,从湖羊背最长肌克隆YAP1基因编码区序列,T-A克隆到pMD 19-T载体中,进行测序。利用酶切和T4...
本研究旨在克隆绵羊YAP1基因CDS序列,构建并鉴定其真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1,及其磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1S42A。本研究利用RT-PCR技术,从湖羊背最长肌克隆YAP1基因编码区序列,T-A克隆到pMD 19-T载体中,进行测序。利用酶切和T4连接酶连接方法,将YAP1基因编码区克隆到pEGFP-C 1载体中,构建pEGFP-C 1-YAP1真核表达载体,以真核表达载体为模板,构建磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1S42A,2种载体均进行PCR、BamHⅠ和XhoⅠ双酶切、BamHⅠ单酶切及测序鉴定。结果克隆出YAP1基因的全长cDNA序列,获得GenBank登录号JQ 714252,其长度为1 712bp,编码区1 212bp,编码403个氨基酸。重组质粒pEGFP-C1-YAP1经PCR、酶切、测序鉴定,证实YAP1基因CDS区已正确克隆入pEGFP-C1表达载体;经测序鉴定,YAP1第42位丝氨酸成功突变为丙氨酸。本研究成功克隆绵羊YAP1基因全长cDNA序列,并构建了重组真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1及磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1S42A,为进一步研究YAP1蛋白表达及其生物学活性奠定基础。
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关键词
绵羊
YAP1基因
真核表达载体
磷酸化位点突变体
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题名
绵羊YAP1基因的克隆及其真核表达载体和突变型载体的构建
1
作者
李达
孙伟
苏锐
张占英
马月辉
张有法
陈玲
吴文忠
周洪
机构
扬州大学动物科学与技术学院
保定市中华路小学
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
苏州市畜牧兽医站
徐州市睢宁县林牧渔业局
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1198-1204,共7页
基金
中国博士后科学基金特别资助项目(200902154)
科技部家养动物种质资源平台
+4 种基金
现代肉羊产业技术体系建设(CARS-39)
江苏高校优势学科建设工程资助项目
江苏省农业科技支撑计划项目(BE2012331)
江苏省六大人才高峰项目
江苏省工程技术研究中心项目(BM2012308)
文摘
本研究旨在克隆绵羊YAP1基因CDS序列,构建并鉴定其真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1,及其磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1S42A。本研究利用RT-PCR技术,从湖羊背最长肌克隆YAP1基因编码区序列,T-A克隆到pMD 19-T载体中,进行测序。利用酶切和T4连接酶连接方法,将YAP1基因编码区克隆到pEGFP-C 1载体中,构建pEGFP-C 1-YAP1真核表达载体,以真核表达载体为模板,构建磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1S42A,2种载体均进行PCR、BamHⅠ和XhoⅠ双酶切、BamHⅠ单酶切及测序鉴定。结果克隆出YAP1基因的全长cDNA序列,获得GenBank登录号JQ 714252,其长度为1 712bp,编码区1 212bp,编码403个氨基酸。重组质粒pEGFP-C1-YAP1经PCR、酶切、测序鉴定,证实YAP1基因CDS区已正确克隆入pEGFP-C1表达载体;经测序鉴定,YAP1第42位丝氨酸成功突变为丙氨酸。本研究成功克隆绵羊YAP1基因全长cDNA序列,并构建了重组真核表达质粒pEGFP-C1-YAP1及磷酸化位点突变体pEGFP-C1-YAP1S42A,为进一步研究YAP1蛋白表达及其生物学活性奠定基础。
关键词
绵羊
YAP1基因
真核表达载体
磷酸化位点突变体
Keywords
sheep
YAP1 gene
eukaryotic expression vector
phosphorylation site mutant
分类号
S826 [农业科学—畜牧学]
S813.3 [农业科学—畜牧学]
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题名
作者
出处
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1
绵羊YAP1基因的克隆及其真核表达载体和突变型载体的构建
李达
孙伟
苏锐
张占英
马月辉
张有法
陈玲
吴文忠
周洪
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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