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基于CRISPR-Cas12a技术的呼吸道合胞病毒检测方法的建立
1
作者
姚雪春
李磊
+3 位作者
王志贤
盛长忠
ZHOU Zeqi
TAN Cherie S
《生物技术通报》
北大核心
2025年第1期103-109,共7页
【目的】呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是婴幼儿急性呼吸道感染的最常见原因。基于RT-ERACRISPR/Cas12a技术,建立一种RSV快速特异性的检测方法。【方法】针对RSV N基因保守区域设计合成特异性crRNA及酶促重组等温扩...
【目的】呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是婴幼儿急性呼吸道感染的最常见原因。基于RT-ERACRISPR/Cas12a技术,建立一种RSV快速特异性的检测方法。【方法】针对RSV N基因保守区域设计合成特异性crRNA及酶促重组等温扩增(ERA)引物,筛选最佳扩增引物-crRNA组合建立检测体系;通过荧光法检测RSV核酸,确定检测方法的灵敏度及特异性。【结果】根据Cas12a的激活原理,针对A型及B型RSV分别设计合成RSV-crRNA1及RSV-crRNA2,二者混合加入检测体系,可同时检测到A型及B型RSV,并具有协同作用;实验筛选出一组最佳引物组合(RSV-F+RSV-R3J),最低检出限为5×10^(2) copies/mL,可在39℃恒温条件下,35 min内完成检测;该方法与其他核酸测试样本无交叉反应,只能检测出RSV核酸,具有较高的特异性。【结论】基于RT-ERA-CRISPR/Cas12a技术,成功建立了一种灵敏度高、特异性强、快速、低成本的RSV核酸检测方法,该方法不依赖复杂的检测仪器,任何能够提供恒温环境和检测荧光信号功能的仪器均可适用。因此,该方法适用于RSV即时检测,还可能应用于其他病原体感染的检测。
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关键词
呼吸道合胞病毒
CRISPR-Cas12a技术
酶促重组等温扩增
即时检测
核酸检测
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职称材料
曲霉半乳甘露聚糖磁微粒化学发光法检测体系的建立及评价
被引量：
1
2
作者
马梦男
高欣欣
+2 位作者
刘春龙
张舟
王梦凡
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第21期2623-2627,2633,共6页
目的:制备抗曲霉半乳甘露聚糖(GM)的多克隆抗体,并基于所获抗体建立并评价曲霉半乳甘露聚糖磁微粒化学发光(CLIA)检测体系。方法:高纯度GM抗原作为免疫原制备高效价、交叉反应弱的多克隆抗体。以磁微粒偶联的链霉亲和素,生物素标志的抗G...
目的:制备抗曲霉半乳甘露聚糖(GM)的多克隆抗体,并基于所获抗体建立并评价曲霉半乳甘露聚糖磁微粒化学发光(CLIA)检测体系。方法:高纯度GM抗原作为免疫原制备高效价、交叉反应弱的多克隆抗体。以磁微粒偶联的链霉亲和素,生物素标志的抗GM抗体,待测血清样本和吖啶磺酰胺标志的抗GM抗体建立GM磁微粒化学发光夹心法检测体系,并对其进行条件优化和性能评估。结果:检测回收率(100±15)%;分析内精密度、分析间精密度均<10%;分析灵敏度LoB、LoD分别为0.05、0.08 ng/ml;线性区间为0.15~50.00 ng/ml;Kappa系数0.88>0.75,与市售伯乐试剂盒具有良好的一致性。结论:本研究建立的GM磁微粒化学发光定性检测方法性能良好,具有潜在的市场转化应用前景,为侵袭性曲霉病早期临床诊断提供有益技术借鉴。
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关键词
半乳甘露聚糖
多克隆抗体
磁微粒化学发光法
侵袭性曲霉病
性能评估
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职称材料
题名
基于CRISPR-Cas12a技术的呼吸道合胞病毒检测方法的建立
1
作者
姚雪春
李磊
王志贤
盛长忠
ZHOU Zeqi
TAN Cherie S
机构
天津大学医学工程与转化医学
研究
院
侵袭性真菌病机制研究与精准诊断北京市重点实验室丹娜生物分中心
天津市
侵袭
性
真菌病
精
准
诊断
技术企业
重点
实验室
出处
《生物技术通报》
北大核心
2025年第1期103-109,共7页
基金
技术创新引导专项(22YDPYSY00120)。
文摘
【目的】呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是婴幼儿急性呼吸道感染的最常见原因。基于RT-ERACRISPR/Cas12a技术,建立一种RSV快速特异性的检测方法。【方法】针对RSV N基因保守区域设计合成特异性crRNA及酶促重组等温扩增(ERA)引物,筛选最佳扩增引物-crRNA组合建立检测体系;通过荧光法检测RSV核酸,确定检测方法的灵敏度及特异性。【结果】根据Cas12a的激活原理,针对A型及B型RSV分别设计合成RSV-crRNA1及RSV-crRNA2,二者混合加入检测体系,可同时检测到A型及B型RSV,并具有协同作用;实验筛选出一组最佳引物组合(RSV-F+RSV-R3J),最低检出限为5×10^(2) copies/mL,可在39℃恒温条件下,35 min内完成检测;该方法与其他核酸测试样本无交叉反应,只能检测出RSV核酸,具有较高的特异性。【结论】基于RT-ERA-CRISPR/Cas12a技术,成功建立了一种灵敏度高、特异性强、快速、低成本的RSV核酸检测方法,该方法不依赖复杂的检测仪器,任何能够提供恒温环境和检测荧光信号功能的仪器均可适用。因此,该方法适用于RSV即时检测,还可能应用于其他病原体感染的检测。
关键词
呼吸道合胞病毒
CRISPR-Cas12a技术
酶促重组等温扩增
即时检测
核酸检测
Keywords
respiratory syncytial virus
CRISPR-Cas12a technology
enzymatic recombinase amplification
point-of-care test
nucleic acid testing
分类号
R373.14 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
曲霉半乳甘露聚糖磁微粒化学发光法检测体系的建立及评价
被引量：
1
2
作者
马梦男
高欣欣
刘春龙
张舟
王梦凡
机构
天津大学化工学院
“
侵袭
性
真菌病
机制
研究与
精
准
诊断
”
北京市
重点
实验室
丹娜
生物
分中心
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第21期2623-2627,2633,共6页
基金
天津市科技计划项目(15ZXQXSY00050)。
文摘
目的:制备抗曲霉半乳甘露聚糖(GM)的多克隆抗体,并基于所获抗体建立并评价曲霉半乳甘露聚糖磁微粒化学发光(CLIA)检测体系。方法:高纯度GM抗原作为免疫原制备高效价、交叉反应弱的多克隆抗体。以磁微粒偶联的链霉亲和素,生物素标志的抗GM抗体,待测血清样本和吖啶磺酰胺标志的抗GM抗体建立GM磁微粒化学发光夹心法检测体系,并对其进行条件优化和性能评估。结果:检测回收率(100±15)%;分析内精密度、分析间精密度均<10%;分析灵敏度LoB、LoD分别为0.05、0.08 ng/ml;线性区间为0.15~50.00 ng/ml;Kappa系数0.88>0.75,与市售伯乐试剂盒具有良好的一致性。结论:本研究建立的GM磁微粒化学发光定性检测方法性能良好,具有潜在的市场转化应用前景,为侵袭性曲霉病早期临床诊断提供有益技术借鉴。
关键词
半乳甘露聚糖
多克隆抗体
磁微粒化学发光法
侵袭性曲霉病
性能评估
Keywords
Galactomannan
Polyclonal antibody
Magnetic particle chemiluminescence method
Invasive aspergillosis
Per-formance evaluation
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于CRISPR-Cas12a技术的呼吸道合胞病毒检测方法的建立
姚雪春
李磊
王志贤
盛长忠
ZHOU Zeqi
TAN Cherie S
《生物技术通报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
曲霉半乳甘露聚糖磁微粒化学发光法检测体系的建立及评价
马梦男
高欣欣
刘春龙
张舟
王梦凡
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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