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形觉剥夺性近视模型大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1表达及Wnt/β-catenin信号通路的调控作用 被引量:9
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作者 张新 巨朝娟 +1 位作者 张剑 赵燕 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期861-866,共6页
目的:构建形觉剥夺性近视(FDM)大鼠模型,阐明FDM大鼠巩膜成纤维细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及其与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法: 40只大鼠随机分为对照组和FDM模型组,每组20只,FDM模型组大鼠建立FDM模型... 目的:构建形觉剥夺性近视(FDM)大鼠模型,阐明FDM大鼠巩膜成纤维细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)的表达及其与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的关系。方法: 40只大鼠随机分为对照组和FDM模型组,每组20只,FDM模型组大鼠建立FDM模型。测定大鼠眼轴长度;取大鼠眼球分离巩膜组织,采用Western blotting法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定大鼠巩膜组织中TGF-β1蛋白和mNRA表达水平。分离培养对照组和FDM模型组大鼠巩膜成纤维细胞,对照组大鼠巩膜成纤维细胞作为对照组,FDM模型组大鼠巩膜成纤维细胞分为FDM组和FDM+Dickkopf相关蛋白1(DDK1)组(加入DDK1培养),采用Western blotting法和RT-PCR法测定各组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、3型核糖核酸酶(DCL3)、结肠腺瘤样息肉蛋白(APC)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、p21-GSK3β和β-catenin蛋白及mRNA表达水平。结果:与对照组比较,FDM组大鼠眼轴长度均明显增加(P<0.05),巩膜组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。对照组、FDM组和FDM+DDK1组大鼠巩膜成纤维细胞中GSK3β蛋白和mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),TGF-β1、DCL3、APC、p21-GSK3β和β-catenin蛋白及mRNA表达水平比较差异有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,FDM组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、APC蛋白和mRNA表达水平降低(P<0.05),DCL3、p21-GSK3β、β-catenin蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05);与FDM组比较,FDM+DDK1组大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1、APC蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05),DCL3、p21-GSK3β、β-catenin蛋白和mRNA表达水平降低(P<0.05)。结论: FDM模型大鼠巩膜成纤维细胞中TGF-β1表达水平降低,其水平受Wnt/β-catenin信号通路调控。 展开更多
关键词 近视 巩膜 成纤维细胞 转化生长因子Β1 Wnt/β-连环蛋白 大鼠 SD
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LINC00467通过靶向miR-495-3p调控视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡 被引量:5
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作者 李思莹 周萍萍 +2 位作者 齐艳秀 张剑 王玉清 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1423-1427,1433,共6页
目的:探讨LINC00467对视网膜母细胞瘤(Rb)细胞增殖、凋亡的影响和分子机制。方法:RT-qPCR检测Rb组织和正常视网膜组织中LINC00467和miR-495-3p表达。将Y79细胞分为si-NC、si-LINC00467、miR-NC、miR-495-3p、siLINC00467+anti-miR-NC、s... 目的:探讨LINC00467对视网膜母细胞瘤(Rb)细胞增殖、凋亡的影响和分子机制。方法:RT-qPCR检测Rb组织和正常视网膜组织中LINC00467和miR-495-3p表达。将Y79细胞分为si-NC、si-LINC00467、miR-NC、miR-495-3p、siLINC00467+anti-miR-NC、si-LINC00467+anti-miR-495-3p组,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR确定LINC00467对miR-495-3p的靶向调控作用。结果:抑制LINC00467表达,Y79细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。过表达miR-495-3p后Y79细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达显著升高(P<0.05)。抑制miR-495-3p表达可逆转抑制LINC00467表达对Y79细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响(P<0.05)。结论:Rb中LINC00467表达升高,miR-495-3p表达降低。抑制LINC00467通过靶向上调miR-495-3p抑制Rb细胞增殖,诱导其凋亡。 展开更多
关键词 LINC00467 miR-495-3p 视网膜母细胞瘤 细胞增殖 凋亡
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杞菊地黄丸对青光眼模型大鼠视网膜结构的保护作用及其机制 被引量:7
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作者 赵燕 张新 +2 位作者 张剑 田石琦 常英霞 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期994-998,共5页
目的:探讨杞菊地黄丸对青光眼大鼠模型视网膜结构的保护作用,并阐明其作用机制。方法:50只SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,低、中和高剂量杞菊地黄丸组(n=10);除空白对照组外各组大鼠通过烙闭大鼠巩膜上静脉制作青光眼动物模型,低、... 目的:探讨杞菊地黄丸对青光眼大鼠模型视网膜结构的保护作用,并阐明其作用机制。方法:50只SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,低、中和高剂量杞菊地黄丸组(n=10);除空白对照组外各组大鼠通过烙闭大鼠巩膜上静脉制作青光眼动物模型,低、中和高剂量杞菊地黄丸组大鼠分别灌胃给予剂量为1、2和4g·kg^(-1)的杞菊地黄丸,空白对照组和模型组大鼠分别灌胃给予等体积生理盐水,每天1次。12周后处死大鼠,取眼球制石蜡切片,行HE染色;TUNEL染色检测视网膜神经节细胞的凋亡情况,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组大鼠视网膜组织中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)mRNA表达水平,采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜组织中Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠视网膜神经纤维排列不整齐,纤维间质水肿,细胞层呈空泡样,视网膜神经节细胞数目明显减少;与模型组比较,高剂量杞菊地黄丸组大鼠眼视网膜神经节细胞数目增多,低和中剂量杞菊地黄丸组大鼠眼视网膜神经纤维细胞排列整齐且神经节细胞形态正常。与模型组比较,低、中和高剂量杞菊地黄丸组大鼠视网膜神经节细胞凋亡指数明显减少(P<0.05),Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05),Bax和caspase-3 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:杞菊地黄丸通过调控Bcl-2、Bax和caspase-3mRNA和蛋白的表达,抑制视网膜神经节细胞的凋亡,对青光眼大鼠视网膜起保护作用。 展开更多
关键词 杞菊地黄丸 青光眼 大鼠 SD 凋亡指数
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不同光量子数蓝光长时间间断照射对豚鼠屈光发育及视网膜损伤作用 被引量:6
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作者 徐志刚 符俊达 +2 位作者 吕淑慧 杨笑天 王玉清 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第1期15-18,共4页
目的观察不同光量子数蓝光长时间间断照射对豚鼠屈光发育及视网膜损伤作用。方法将56只普通级英国短毛三色健康雄性豚鼠分成7组:白光组(8只),实验组(48只)。白光组应用光量子数为3.0μmol·m^(-2)·s^(-1)的白色光间断照射;实... 目的观察不同光量子数蓝光长时间间断照射对豚鼠屈光发育及视网膜损伤作用。方法将56只普通级英国短毛三色健康雄性豚鼠分成7组:白光组(8只),实验组(48只)。白光组应用光量子数为3.0μmol·m^(-2)·s^(-1)的白色光间断照射;实验组应用不同光量子数的蓝光间断照射,分为蓝光A、B、C、D、E、F 6组(每组8只),分别接受3.0μmol·m^(-2)·s^(-1)、4.5μmol·m^(-2)·s^(-1)、6.0μmol·m^(-2)·s^(-1)、7.5μmol·m^(-2)·s^(-1)、9.0μmol·m^(-2)·s^(-1)、12.0μmol·m-2·s^(-1)的光量子数照射。每2周对豚鼠屈光度、眼轴长度、玻璃体腔长度进行一次检测。并在光照20周后,对豚鼠视网膜及巩膜组织进行HE染色及TUNEL细胞凋亡检测,观察各组视网膜组织的损伤情况。结果实验前各组屈光度检测结果比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。光照20周后,白光组和蓝光A组屈光度比较差异有统计学意义(P<0.05),白光组屈光度随着实验的进行趋向于近视方向发展,变化幅度为(^(-1).84±0.35)D,蓝光A组趋向于远视方向发展,变化幅度为(1.17±0.47)D;不同光量子数照射下的蓝光各组中,蓝光B组屈光度变化幅度最大,为(1.52±0.63)D,与其他蓝光各组比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。光照20周后,各组豚鼠眼轴及玻璃体腔均有一定程度的增长:光照20周后,白光组和蓝光A组比较差异有统计学意义(P<0.05),白光组变化幅度为(1.24±0.13)mm,蓝光A组变化幅度为(1.10±0.05)mm;不同光量子数照射下的蓝光各组中,蓝光B组眼轴长度变化幅度最小,为(1.05±0.06)mm,但与其他蓝光各组比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。光照20周后,白光组视网膜各层清晰,局部可见皱缩,巩膜胶原纤维排列紧密,局部可见细小间隙;蓝光A组和蓝光F组与白光组的改变差异不明显。结论蓝光长时间间断照射可以抑制豚鼠近视形成,光量子数为4.5μmol·m^(-2)·s^(-1)时抑制作用最强;不同光量子数的蓝光长时间间断照射均会对视网膜组织造成一定的损伤。 展开更多
关键词 蓝光 光量子数 屈光发育 视网膜损伤
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骨髓间充质干细胞向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞的分化 被引量:4
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作者 徐志刚 穆敬中 +2 位作者 吕淑慧 李宏 刘远光 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第2期126-129,134,共5页
目的探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)的分化情况。方法体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠BMSC,记录BMSC的增殖情况并进行鉴定;制备细胞爬片并在双层培养板内与新生鼠视网膜神经... 目的探讨与新生鼠视网膜神经细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)的分化情况。方法体外贴壁培养法分离培养Lewis大鼠BMSC,记录BMSC的增殖情况并进行鉴定;制备细胞爬片并在双层培养板内与新生鼠视网膜神经细胞共培养,观察BMSC的神经存活和分化情况,并行免疫荧光染色鉴定。结果早期的BMSC分裂较缓慢,第2天进入快速增殖期,细胞生长活跃,大约持续至第5天,细胞分裂进入平台期,增殖缓慢或轻微下降。流式细胞仪显示,90.27%的3代BMSC处于G0-G1期,其余9.73%的细胞处于G2期、S期和M期;93.28%的4代BMSC处于G0-G1期,其余6.72%的细胞处于G2期、S期和M期。流式细胞仪检测示3代和4代BMSC抗原CD90+/CD45-分别为92%、90%,体外获得了较高纯度的BMSC。MTT法检测共培养后3d、5d、7d的细胞存活率分别为(65.48±9.95)%、(73.56±8.68)%、(76.84±8.65)%,与对照组[(66.14±10.45)%、(70.11±9.60)%、(73.21±6.98)%]比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫荧光染色显示,共培养组诱导后部分BMSC视蛋白、巢蛋白于3d后、微管蛋白于5d后出现阳性反应,对照组均为阴性。结论 BMSC具有向光感受器样细胞和视网膜神经样细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 共培养 视网膜神经样细胞 光感受器样细胞
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不同损伤条件下热休克蛋白27在人晶状体上皮细胞中的表达
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作者 马立威 张雪岩 +1 位作者 许军 张劲松 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期795-797,共3页
目的观察不同损伤条件下热休克蛋白27(HSP27)在人晶状体上皮细胞系SRA01中的表达情况。方法体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01,在添加香烟烟雾凝聚物(CSC,25 mg/mL)或过氧化氢(H2O2,50 mmol/L)条件下培养30 min后,恢复至正常培养条件。... 目的观察不同损伤条件下热休克蛋白27(HSP27)在人晶状体上皮细胞系SRA01中的表达情况。方法体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01,在添加香烟烟雾凝聚物(CSC,25 mg/mL)或过氧化氢(H2O2,50 mmol/L)条件下培养30 min后,恢复至正常培养条件。分别于处理0,2,4,6,16,24 h时,采用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HSP27的表达情况。结果在生理和应激情况下,人晶状体上皮细胞内均有HSP27的表达。应激损伤后4 h,HSP27 mRNA和蛋白的表达明显增加,8 h达最高峰,24 h仍维持在较高水平。CSC组细胞HSP27的表达较过氧化损伤组弱(P<0.05)。结论体外培养的人晶状体上皮细胞中存在HSP27的表达。不同损伤应激可诱导HSP27的表达增加,HSP27可能通过对抗应激作用保护晶状体上皮细胞。 展开更多
关键词 应激 热休克蛋白27 晶状体上皮细胞 过氧化损伤 香烟烟雾凝聚物
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结缔组织生长因子在2型糖尿病大鼠虹膜中的表达
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作者 王虹 吉雷 +3 位作者 刘远光 周萍萍 张鹏 王冬兰 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第2期108-111,共4页
目的探索2型糖尿病大鼠虹膜新生血管(new vascularization of iris,NVI)的形成与虹膜组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的关系。方法将Wistar大鼠40只随机分为实验组和对照组,每组各20只大鼠。实验组... 目的探索2型糖尿病大鼠虹膜新生血管(new vascularization of iris,NVI)的形成与虹膜组织中结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的关系。方法将Wistar大鼠40只随机分为实验组和对照组,每组各20只大鼠。实验组大鼠通过腹腔注射STZ制备2型糖尿病大鼠模型,对照组为正常大鼠。造模成功后取出大鼠眼球,将实验组及对照组各取15只眼球用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)定量分析大鼠虹膜中CTGF的表达情况,实验组及对照组另25只眼球取虹膜进行光镜和电镜观察(其中光镜观察各15只眼球,电镜观察各10只眼球)。结果光镜和电镜下将实验组与对照组相比较,实验组大鼠虹膜有明显的NVI的特征性改变,而对照组无显著改变。在实验组大鼠虹膜中CTGF的含量为(1010.49±8.18)ng·L-1,而在对照组大鼠虹膜中CTGF的含量为(644.82±8.08)ng·L-1,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 2型糖尿病大鼠虹膜中CTGF的含量与其NVI的生成有一定关系。 展开更多
关键词 2型糖尿病大鼠 虹膜新生血管 结缔组织生长因子
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白藜芦醇对糖尿病大鼠视网膜中SIRT1基因表达的干预作用 被引量:6
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作者 张笃贞 张涤 +1 位作者 孙鹏 王冬兰 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第4期322-325,共4页
目的观察白藜芦醇(Resveratrol,Res)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜中沉默信息调节因子(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)基因表达的影响,探讨其对糖尿病视网膜病变可能的作用... 目的观察白藜芦醇(Resveratrol,Res)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠视网膜中沉默信息调节因子(silent mating type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)基因表达的影响,探讨其对糖尿病视网膜病变可能的作用机制。方法随机选择15只正常大鼠为正常对照组(NC组),STZ成功诱导糖尿病模型大鼠57只,用随机数字表法分为糖尿病模型(DC)组、Res低剂量给药(RL)组、Res高剂量给药(RH)组,每组各19只。各组分别选择不同剂量Res灌胃12周,苏木精-伊红染色观察大鼠视网膜组织病理学改变,免疫组织化学染色检测抗癌基因p53蛋白表达,RT-PCR检测SIRT1、p53 mRNA在大鼠视网膜中的表达情况。结果 HE染色结果显示:NC组视网膜结构层次清晰;DC组较NC组视网膜变薄,结构破环,神经节细胞数目减少;RL组较DC组略有改善;RH组视网膜结构基本正常。免疫组织化学染色结果显示:DC组、NC组、RL组、RH组大鼠p53阳性细胞核数目分别为(103.857 1±8.071 1)个、(9.142 9±2.035 4)个、(63.714 3±6.750 7)个、(15.751 4±1.988 1)个,各组间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。DC组、NC组、RL组、RH组SIRT1 mRNA相对表达量分别为1.234 6±0.026 0、1.499 3±0.098 8、1.269 7±0.0280、1.392 1±0.053 1,DC组均低于RL组、RH组、NC组,各组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。DC组、NC组、RL组、RH组p53 mRNA相对表达量分别为1.503 4±0.081 3、0.952 0±0.110 2、1.429 3±0.110 0、1.027 1±0.088 7,DC组均高于RL、RH、NC组,各组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论Res对糖尿病大鼠的视网膜损害具有一定的保护作用,其机制可能与Res促进视网膜中SIRT1的表达从而抑制视网膜的细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 糖尿病视网膜病变 SIRT1 P53
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山茱萸多糖对衰老小鼠视网膜相关因子表达的影响 被引量:2
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作者 陈小龙 李晶 +2 位作者 齐艳秀 刘远光 王冬兰 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第4期324-327,共4页
目的观察山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠视网膜组织相关因子表达的影响。方法昆明小鼠90只,随机分为3组,每组30只,其中给药组:100mg·kg-1·d-1皮下注射D-半乳糖45d后,按照0.4g·kg-1体质量经胃给予山茱萸多糖,连续给药30d... 目的观察山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老小鼠视网膜组织相关因子表达的影响。方法昆明小鼠90只,随机分为3组,每组30只,其中给药组:100mg·kg-1·d-1皮下注射D-半乳糖45d后,按照0.4g·kg-1体质量经胃给予山茱萸多糖,连续给药30d;衰老组:100mg·kg-1·d-1皮下注射D-半乳糖45d后,经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30d;对照组:每日上午侧腹部皮下注射生理盐水,剂量参照衰老组D-半乳糖给药量,45d后经胃给予相当于给药组药量体积的温开水连续30d。于末次给药后次日处死小鼠,测定小鼠视网膜组织超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)含量及总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC),RT-PCR法测定小鼠视网膜组织SIRT1、p53mRNA的表达。结果对照组视网膜组织中的T-SOD和T-AOC分别为(341.27±10.22)U·mgprot-1和(287.40±10.70)U·mgprot-1,明显高于衰老组的(66.92±22·74)U·mgprot-1和(104.36±6.76)U·mgprot-1及给药组的(78.61±27.70)U·mgprot-1和(209.44±11.11)U·mgprot-1(均为P<0.05),而给药组与衰老组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与对照组小鼠视网膜组织中SIRT1、p53mRNA相对表达量(0.64±0.10、0.12±0.03)相比,衰老组及给药组的SIRT1mRNA表达下降,相对表达量分别为0.13±0·05、0.24±0.07,p53mRNA的表达上升,相对表达量分别为0.82±0.06、0.54±0.16,给药组与衰老组相比差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论随着机体的衰老,SIRT1在视网膜组织中的表达减少,p53在视网膜组织中的表达增多;山茱萸多糖尚不能有效地提高D-半乳糖致衰老小鼠视网膜组织中SIRT1基因的表达。 展开更多
关键词 山茱萸多糖 衰老模型小鼠视网膜 超氧化物歧化酶 抗氧化能力 SIRT1 p53
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