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大鼠神经干细胞中MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号转导通路的实验研究 被引量:9
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作者 赵宇 谢鹏 +1 位作者 朱晓峰 蔡志友 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期14-17,共4页
目的应用丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性阻滞剂PD98059孵育大鼠神经干细胞(NSC),探讨MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路在NSC中的作用。方法体外分离、培养大鼠NSC,应用不同浓度的PD98059孵育NSC后进行WTS-8、Nestin,BrdU、β-tub... 目的应用丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性阻滞剂PD98059孵育大鼠神经干细胞(NSC),探讨MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路在NSC中的作用。方法体外分离、培养大鼠NSC,应用不同浓度的PD98059孵育NSC后进行WTS-8、Nestin,BrdU、β-tubulin-Ⅲ、Western blot检测。结果PD98059对NSC的存活、增殖和分化的影响呈剂量依赖性,在PD98059较高浓度时NSC的存活率明显下降(P<0.05),BrdU和β-tubulin-Ⅲ的阳性细胞数明显少于正常对照组(P<0.05)。PD98059阻断ERK表达的作用呈剂量依赖性。结论MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路对大鼠NSC的存活、增殖、分化起重要作用。 展开更多
关键词 丝裂原激活的蛋白激酶激酶 细胞外信号调控激酶 神经干细胞
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大鼠神经干细胞中PI3-K/AKT信号转导通路的研究 被引量:6
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作者 赵宇 谢鹏 朱晓峰 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1191-1195,共5页
目的应用PI3-K特异性阻滞剂LY294002孵育大鼠神经干细胞(NSCs),探讨PI3-K/AKT信号转导通路在NSCs中的作用。方法体外分离、培养E15-16胎鼠NSCs,应用不同浓度(0-40μmol/L)的LY294002孵育NSCs后进行细胞存活(WST-8检测)、增殖(Brd... 目的应用PI3-K特异性阻滞剂LY294002孵育大鼠神经干细胞(NSCs),探讨PI3-K/AKT信号转导通路在NSCs中的作用。方法体外分离、培养E15-16胎鼠NSCs,应用不同浓度(0-40μmol/L)的LY294002孵育NSCs后进行细胞存活(WST-8检测)、增殖(BrdU免疫组织化学鉴定)、分化(βTubulin-Ⅲ免疫组织化学鉴定)和AKT磷酸化蛋白水平(Western Blotting)的检测。结果LY294002对NSCs的存活、增殖和分化的影响呈剂量依赖性。在LY294002较高浓度(25、30、35、40μmol/L)时,NSCs的存活率明显下降(P〈0.05);LY294002为30、35、40μmol/L时,BrdU阳性细胞数明显少于正常对照组(LY294002 0μmol/L)(P〈0.05);LY294002为35、40μmol/L时,βTubulin-Ⅲ的阳性细胞数明显少于正常对照组(P〈0.05)。LY294002阻断AKT表达的作用呈剂量依赖性。结论PI3-K/AKT信号转导通路对大鼠NSCs的存活、增殖、分化起重要作用。 展开更多
关键词 磷脂酰肌醇3激酶 蛋白激酶B 神经干细胞 大鼠
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神经干细胞和神经生长因子联合移植对大脑中动脉阻塞大鼠的影响 被引量:11
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作者 赵宇 谢鹏 +1 位作者 朱晓峰 蔡志友 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1123-1126,共4页
目的将神经干细胞(NSCs)移植和神经生长因子(NGF)单独及联合应用于大脑中动脉阻塞(MCAo)模型大鼠,观察NGF和NSCs移植对大鼠缺血性脑卒中神经功能恢复的作用及NGF对自体和移植NSCs的影响。方法体外分离、培养新生大鼠海马NSCs,BrdU标记... 目的将神经干细胞(NSCs)移植和神经生长因子(NGF)单独及联合应用于大脑中动脉阻塞(MCAo)模型大鼠,观察NGF和NSCs移植对大鼠缺血性脑卒中神经功能恢复的作用及NGF对自体和移植NSCs的影响。方法体外分离、培养新生大鼠海马NSCs,BrdU标记。实验动物随机分为A组(MCAo组)、B组(MCAo+NGF组)、C组(MCAo+NSCs组)及D组(MCAo+NGF+NSCs组),每组16只,移植后进行神经功能损害评分(NSS),用免疫组化行BrdU、槽蛋白检测,分析结果。结果移植后的2周、4周神经功能评分显示D组显著好于其他3组(P<0.05),B组与C组显著好于A组(P<0.05)。B组的槽蛋白及BrdU阳性细胞数显著多于A组(P<0.05),D组的BrdU阳性细胞数显著多于C组(P<0.05)。结论NSCs移植和NGF单独及联合应用对MCAo大鼠的神经功能恢复均有作用,二者联合具有协同作用。NGF对自体NSCs的激活、增殖有促进作用,对移植NSCs的增殖有促进作用。 展开更多
关键词 神经干细胞 神经生长因子 神经干细胞移植 大鼠大脑中动脉阻塞
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胶质瘤干细胞对BCNU耐药的体外实验研究 被引量:4
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作者 徐忠烨 程远 +3 位作者 唐文渊 陈维福 刘鹏飞 朱晓锋 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期116-118,共3页
目的探讨胶质瘤干细胞(GSCs)对双氯乙基亚硝脲(BCNU)的耐药能力及导致耐药的相关分子机制。方法从来源于手术切除的恶性胶质瘤中分离培养GSCs,并应用免疫细胞化学染色和FACS鉴定;分别利用MTT法和Ki67染色观察和分析不同浓度BCNU对胶质... 目的探讨胶质瘤干细胞(GSCs)对双氯乙基亚硝脲(BCNU)的耐药能力及导致耐药的相关分子机制。方法从来源于手术切除的恶性胶质瘤中分离培养GSCs,并应用免疫细胞化学染色和FACS鉴定;分别利用MTT法和Ki67染色观察和分析不同浓度BCNU对胶质瘤细胞和GSCs的活力和增殖能力的影响;应用RT-PCR法测定O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine DNA-transferase,MGMT)mRNA在胶质瘤细胞、GSCs和正常脑组织中的表达。结果本研究中获得的GSCs为Nestin和CD133阳性,具有自我更新、分裂增殖和多分化潜能,流式细胞术分析证实收获的细胞克隆中99.79%的细胞为CD133阳性细胞,符合我们的实验要求;与胶质瘤细胞相比,GSCs具有较强的抗BCNU化疗能力(P<0.01),在BCNU的浓度达到2 g/L后,胶质瘤细胞存活率近于0并基本停止增殖,而GSCs仍有32.3%±4.5%的存活率并仍有43.6%±3.5%的增殖率,当BCNU浓度在2 g/L到8 g/L间尚可以进一步诱导GSCs耐药能力的增强;RT-PCR结果表明在GSCs中MGMTmRNA的表达明显高于胶质瘤细胞,而在正常脑组织中则无MG-MTmRNA的表达。结论GSCs比胶质瘤细胞更具耐药性,是胶质瘤产生耐药的关键,而MGMT是GSCs产生耐药的分子机制之一。 展开更多
关键词 胶质瘤干细胞 耐药 双氯乙基亚硝脲 O6-甲基鸟嘌呤 DNA 甲基转移酶
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神经干细胞移植抑制缺血再灌注大鼠脑内星形胶质细胞的激活和炎症反应 被引量:2
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作者 赵宇 谢鹏 +1 位作者 朱晓峰 蔡志友 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期678-681,共4页
目的观察神经干细胞(NSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和炎症因子(IL-1β、TNF-α)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法大鼠随机分为脑组织缺血再灌注损伤模型组(MCAO组)和神经干细胞移植组(MCAO+NSCs... 目的观察神经干细胞(NSCs)移植对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和炎症因子(IL-1β、TNF-α)表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法大鼠随机分为脑组织缺血再灌注损伤模型组(MCAO组)和神经干细胞移植组(MCAO+NSCs组),每组16只,干细胞移植后进行神经功能损害评分(NSS),采用蛋白质免疫印迹法和免疫组织化学法检测脑组织GFAP表达,蛋白质免疫印迹法检测脑组织IL-1β、TNF-α的表达。结果移植后2周、4周神经功能评分显示MCAO+NSCs组显著优于MCAO组(P<0.05);MCAO+NSCs组Nestin、Brdu阳性细胞数多于MCAO组(P<0.05),GFAP阳性细胞数显著少于MCAO组(P<0.05);MCAO+NSCs组IL-1β、TNF-α表达水平显著低于MCAO组(P<0.05)。结论 NSCs移植可能通过抑制脑组织星形胶质细胞的激活、降低脑内炎症反应对大鼠缺血再灌注损伤脑组织发挥保护作用。 展开更多
关键词 神经干细胞移植 大脑中动脉阻塞 胶质纤维酸性蛋白 炎症
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