广东地方品种鸡ALV-K分子流行病学及gag基因12 bp缺失对病毒体外复制能力影响的研究 被引量：3

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作者 郭妍妍 梁灿新 +3 位作者 李锦群 董欣怡 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3956-3966,共11页

为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A~G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8042份。通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测... 为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A~G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8042份。通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测p27抗原,共检出357份阳性,并对ELISA结果S/P值0.2~0.6的150份阳性样品进行PCR鉴定和env基因测序,共分离到32株ALV-K,进一步选取16株进行全基因组扩增及测序分析。结果显示,这16株ALV-K全长为7481~7496 bp,基因组符合5′-LTR-UTR-gag-pol-env-UTR-LTR-3′典型的反转录病毒结构,不含已知致癌基因;其gp85基因与ALV-K参考株位于同一进化分支上且相似性最高(>94.0%);其pol、gp37基因均比较保守,与ALV各亚群相似性均较高(>94.0%);其LTR与内源性ALV及大多数ALV-K参考株相似性最高(91.4%~99.5%),且LTR U3区与内源性ALV LTR有相同的转录调控元件;此外,观察到31.3%(5/16)的分离株在gag基因373-384位核苷酸存在12 bp的缺失,进一步以缺失株GD20 JM10为亲本,通过PCR分段扩增和同源重组的方法分别构建了缺失株(rGD20 JM10)和回补株(rGD20 JM10 A12)的cDNA克隆,将其转染DF-1细胞,ELISA和IFA结果表明,病毒拯救成功;体外复制动力学结果显示,两者差异不显著(P>0.05)。本研究所调查的广东7个种禽场的ALV-K流行株均携带内源性LTR,且分子特征较为稳定,故采用更敏感的检测技术在开展ALV净化时尤为重要,此外,gag基因373—384位核苷酸的规律性缺失对病毒的体外复制能力无显著影响。 展开更多

关键词 K亚群禽白血病病毒 地方品种鸡 分子流行病学 GAG基因 感染性克隆

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与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析

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作者 梁灿新 郑小雪 +3 位作者 舒雪利 周婉怡 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1127-1136,共10页

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus, FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。 展开更多

关键词 黄羽肉鸡 鸡内皮血管瘤 K亚群禽白血病病毒 遗传进化分析

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广东某种鸡场鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性、毒力基因检测

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作者 周迪 魏科 +1 位作者 段千禧 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5033-5042,共10页

【目的】了解某种鸡场鸡白痢沙门菌感染情况,并对其耐药性及毒力基因情况进行分析,旨在为鸡白痢防控提供依据。【方法】试验采集疑似患鸡白痢的病鸡肝脏病料进行沙门菌的分离培养,利用特异性引物通过PCR扩增对分离株进行菌种鉴别。使用... 【目的】了解某种鸡场鸡白痢沙门菌感染情况,并对其耐药性及毒力基因情况进行分析,旨在为鸡白痢防控提供依据。【方法】试验采集疑似患鸡白痢的病鸡肝脏病料进行沙门菌的分离培养,利用特异性引物通过PCR扩增对分离株进行菌种鉴别。使用多位点序列分型(MLST)技术获得其分子分型,利用琼脂稀释法测定分离株的最小抑菌浓度;运用二代基因测序技术分析分离株的耐药性与毒力基因特征。【结果】本研究共分离获得5株鸡白痢沙门菌分离株,分别命名为SPNH05-1~SPNH05-5。MLST分型结果显示,5株分离株均为ST92型。药敏试验结果显示,分离株均为多重耐药,共存在2种耐药谱:氨苄西林+萘啶酸+磺胺异噁唑和氨苄西林+萘啶酸+磺胺异噁唑+多黏菌素B。对分离株SPNH05-1、SPNH05-2进行二代基因测序,结果显示,2株分离株存在β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类、多肽类等28种耐药基因,存在151种毒力基因,主要与沙门菌黏附、三型分泌系统、应激、毒素等有关。【结论】本研究结果表明该种鸡场存在多重耐药鸡白痢沙门菌感染,分离株携带多种耐药和毒力基因,试验结果为该种鸡场鸡白痢净化提供参考。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌 分离鉴定 耐药性 毒力基因

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MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制解析

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作者 贾玉生 李易霖 +2 位作者 马露露 廖明 代曼曼 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3132-3142,共11页

MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽... MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽。利用晶体初筛试剂盒在体外培育肽和MHCⅠ的二元复合物晶体,并利用COOT、CCP4和PYMOL等软件对该晶体结构进行解析和分析。在这项研究中,作者发现二个与BF2*0201稳定结合的ALV-J CTL表位FVDFANRLI和SALQAFREV。得到一个优质晶体BF2*0201-SALQAFREV(SV9),其生长条件为1.0 mol·L^(-1)丁二酸(pH 7.0),0.1 mol·L^(-1)HEPES(pH 7.0),1%聚乙二醇单甲醚2000。解析高分辨率(1.72?)的BF2*0201-SV9复合物结构后发现BF2*0201抗原结合槽整体呈现弱负电性。保守的残基多位于抗原结合槽的两端,特异性氨基酸赋予BF2*0201中等大小的抗原结合槽。B、C和F口袋起着较重要的锚定作用,口袋残基和水分子与抗原多肽形成氢键作用,将其固定在抗原结合槽中。SV9表位构象中突出的P4-Gln和P7-Arg残基的构象特征表明该位点有被特异性TCR潜在识别的特性。BF2*0201-SV9复合物晶体结构特征有助于阐明B2单倍型MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位的机制,有助于解释B2单倍型鸡对ALV存在抗性的原因,为抗病育种工作奠定理论基础。 展开更多

关键词 MHC BF2*0201 ALV-J 递呈机制 晶体结构

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J亚群禽白血病病毒血液核酸筛查技术的建立

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作者 董欣怡 李锦群 +2 位作者 陈钦玺 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1115-1126,共12页

为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood ... 为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood quantitative polymerase chain reaction, ALV-J-B-qPCR)。根据GenBank中ALV-J pol及env基因序列,设计ALV-J的特异性引物,并优化反应条件,建立了ALV-J SYBR GreenⅠqPCR检测方法。以ALV-J病毒分离为阳性的鸡抗凝血为实验材料,分别制备抗凝血DNA、血细胞DNA、外周血淋巴细胞DNA、外周血淋巴细胞cDNA和血浆cDNA 5类血液检测模板进行ALV-J的PCR检测,筛选最佳检测模板;进一步比较蒸馏水破裂红细胞法提取混合血液DNA的混样方法,血液混样总体积为200μL的混样方法,血液混样总体积为10μL的混样方法共3种混样方法的检测准确性,筛选最佳混样方法。综合上述qPCR方法、检测模板与混样方法,成功建立了ALV-J-B-qPCR。运用ALV-J-B-qPCR分别进行预期流行率为1%~2%、4%~5%场景下的模拟筛查试验,并与病毒分离法比较。qPCR方法的特异性、灵敏性和重复性试验显示,该方法仅特异性扩增ALV-J,对标准质粒的最低检测限度为1×10^(2)copies·μL^(-1),批内与批间变异系数均<1%。对90份临床送检血液样品的检测结果显示,该qPCR方法对ALV-J的检出率(15.6%)高于p27抗原ELISA和普通PCR的检出率(12.2%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA最符合检测准确度高、操作复杂度和成本低的要求,为最佳检测模板。混样方法摸索试验中,混样总体积为10μL(混样规模<12份)的混样方法检测准确性最高,为最佳混样方法。在样本数为400份,预期流行率为4%~5%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为6.25%,比病毒分离法高2.00%;在样本数为400份,预期流行率为1%~2%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为2.25%,比病毒分离法高0.75%。本研究建立的ALV-J-B-qPCR技术具有灵敏性高、检测快速和节约成本的优势,为种禽场加快ALV净化进程提供了新的思路和方法。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 实时荧光定量PCR 混样检测 筛查技术

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H9N2亚型禽流感病毒感染鸡呼吸道应答模式研究

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作者 池周颖 李天旭 +6 位作者 吴亚鑫 瞿孝云 李思婕 孙敏华 张建峰 廖明 杜寿文 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3970-3979,共10页

【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡... 【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡的临床特征,采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品;感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化,收集气管灌洗液、气管和肺脏组织;通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量;应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律,通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性;通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平。【结果】H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征,但感染后1~5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸,且感染3 d后病毒载量最高,感染5 d后检测不到病毒核酸;感染5 d时,在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸,其中前两者载量高于肺脏;血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多,感染后5~9 d维持较高水平,且具有较强的病毒中和活性;血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势;但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低,且感染前后无明显变化。【结论】本研究成功建立了H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型,确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位,H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子,可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素。本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 呼吸道感染 免疫应答 模型评价

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三株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列分析 被引量：5

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作者 刘国乾 曹蓝 +6 位作者 和君 冯军祥 张长辉 田进 焦培荣 亓文宝 廖明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期1-7,共7页

采用RT-PCR对3株H9N2亚型禽流感病毒基因组进行扩增,测序后再利用DNAStar和MEGA 4对所得到的序列和部分具有代表性的参考序列进行遗传演化及分子特点分析,旨在从分子水平探讨华南地区H9N2亚型禽流感病毒的流行特点,为该病的综合防控提... 采用RT-PCR对3株H9N2亚型禽流感病毒基因组进行扩增,测序后再利用DNAStar和MEGA 4对所得到的序列和部分具有代表性的参考序列进行遗传演化及分子特点分析,旨在从分子水平探讨华南地区H9N2亚型禽流感病毒的流行特点,为该病的综合防控提供依据。结果表明,3个分离株CK/GD/162/03、Francolin/GD/298/05与CK/GD/A8/10分别属于B34、B47和B54基因型;3个分离株HA基因未发生明显的变异,符合我国大陆H9N2亚型AIV HA基因的遗传进化特点,但内部基因出现不同程度重组且部分基因与人源高致病性H5N1亚型AIV同源性很高;CK/GD/162/03、Francolin/GD/298/05两株分离株具有宿主多样性。因此,对华南地区H9N2亚型AIV进行监控及分子流行病学调查具有重要意义。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 基因重组 遗传演化

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一株鸭源H3N6亚型禽流感病毒遗传进化分析 被引量：3

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作者 曹蓝 焦培荣 +5 位作者 宋亚芬 龚浪 袁润余 韦良孟 亓文宝 廖明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第7期17-24,共8页

从活禽交易市场健康鸭体内分离到一株H3N6亚型禽流感病毒,命名为A/Duck/Guangdong/E9/2012(H3N6),这是该亚型禽流感病毒在我国广东地区的首次分离报道。为分析其遗传进化特征,对该病毒全基因组序列进行了测定,进行了遗传进化分析。结果... 从活禽交易市场健康鸭体内分离到一株H3N6亚型禽流感病毒,命名为A/Duck/Guangdong/E9/2012(H3N6),这是该亚型禽流感病毒在我国广东地区的首次分离报道。为分析其遗传进化特征,对该病毒全基因组序列进行了测定,进行了遗传进化分析。结果显示,其HA裂解位点附近的氨基酸序列为PE-KQTR↓GLF,只含有1个碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒的HA裂解位点氨基酸序列的分子特征;其HA基因与2011年蒙古国分离的鸭源A/Duck/Mongolia/OIE-7457/2011(H3N5)禽流感病毒的HA基因同源性最高,其NA基因与2011年蒙古国分离的鸭源A/Duck/Mongolia/OIE-7438/2011(H4N6)禽流感病毒的NA基因同源性最高。全基因组分子遗传进化分析结果显示,其8个基因均属于欧亚谱系的禽源进化分支。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H3N6 基因组序列分析 分子遗传演化

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鸡干扰素调节因子7的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：3

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作者 崔鹏飞 邓国华 +2 位作者 韦良孟 焦培荣 廖明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第4期1-4,共4页

为表达鸡干扰素调节因子7蛋白并制备其多克隆抗体,通过RT-PCR技术扩增chIRF7基因的编码序列,构建重组质粒PET30a-chIRF7。将重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rchIRF7分子量约为60ku。... 为表达鸡干扰素调节因子7蛋白并制备其多克隆抗体,通过RT-PCR技术扩增chIRF7基因的编码序列,构建重组质粒PET30a-chIRF7。将重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21(DE3)后经IPTG诱导,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rchIRF7分子量约为60ku。将纯化的重组蛋白免疫接种小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA测定血清抗体滴度在1∶51 200以上,IFA检测结果显示制备的鼠抗chIRF7蛋白多抗能够与AIV刺激的CEF细胞内的chIRF7蛋白发生特异性反应,表明通过原核表达系统表达的重组蛋白rchIRF7具有很好的免疫原性,以其制备的鼠抗chIRF7蛋白多克隆抗体滴度高、特异性好。 展开更多

关键词 鸡干扰素调节因子7 原核表达 多克隆抗体

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H6N6亚型禽流感病毒广东分离株分子遗传演化分析 被引量：5

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作者 张烁 林宏文 +9 位作者 袁润余 宋亚芬 崔进 龚浪 瞿孝云 韩翡 吴晓薇 徐成刚 廖明 焦培荣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期989-996,共8页

2010年至2011年在中国广东地区活禽交易市场进行流行病学调查时,在鸭咽和泄殖腔拭子中分离到2株H6N6亚型禽流感病毒,分别命名为A/Duck/Guangdong/C45/2010(H6N6)、A/Duck/Guangdong/C120/2011(H6N6)。应用RT-PCR分别对2株毒株的8个基因... 2010年至2011年在中国广东地区活禽交易市场进行流行病学调查时,在鸭咽和泄殖腔拭子中分离到2株H6N6亚型禽流感病毒,分别命名为A/Duck/Guangdong/C45/2010(H6N6)、A/Duck/Guangdong/C120/2011(H6N6)。应用RT-PCR分别对2株毒株的8个基因片段进行了克隆、测序与分析,结果表明:2毒株的HA裂解位点附近的氨基酸序列为P-Q-I-E-T-R-G,只有1个碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒HA裂解位点附近的氨基酸序列特征;与2毒株HA基因相似性最高的毒株为A/Duck/Guangxi/GXd-5/2010(H6N1),与NA基因相似性最高的毒株分别为A/Duck/Fujian/3242/2007(H6N6)和A/Duck/Fujian/6159/2007(H6N6)。全基因组分子遗传演化分析表明,2毒株的8个基因片段均属于欧亚谱系的禽源演化分支;但HA基因属于ST2853-like分支,NP基因属于HN573-like分支,PB2、PB1、PA、M和NS基因属于ST339-like分支,说明本研究中的2株病毒为不同基因群间基因交换的重组病毒。因此,有必要加强H6亚型禽流感病毒流行病学调查以便及时关注其遗传变异与致病性进化,为中国禽流感的预防与控制提供数据支持和理论指导。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H6N6 分子遗传演化分析

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H5N1亚型禽流感病毒感染番鸭引起肺损伤和脑损伤的机制探索 被引量：3

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作者 李奇 叶昱 +8 位作者 佟铁铸 刘洁 刘杨 章震 苗配思 高应棋 张娇 樊惠英 廖明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期962-969,共8页

旨在初步探讨H5N1禽流感病毒引起番鸭肺和脑组织损伤的潜在机制。采用两株H5N1禽流感病毒DK383(A/Duck/Guangdong/383/2008)和DK212(A/Duck/Guangdong/212/2004)分别感染番鸭,于感染后1、2和3d取肺、脑组织,进行病理学观察,并检测病毒... 旨在初步探讨H5N1禽流感病毒引起番鸭肺和脑组织损伤的潜在机制。采用两株H5N1禽流感病毒DK383(A/Duck/Guangdong/383/2008)和DK212(A/Duck/Guangdong/212/2004)分别感染番鸭,于感染后1、2和3d取肺、脑组织,进行病理学观察,并检测病毒复制水平及损伤相关因子的变化情况。结果表明,DK383株感染番鸭后,引起明显的呼吸困难和神经症状,致死率为70%,DK212株则无明显临床症状。病理组织学变化显示,DK383感染番鸭后造成了肺损伤和脑损伤,大脑组织神经元发生广泛性变性、坏死,肺淤血出血严重;而DK212组和空白组未见明显病理变化。与DK212株相比,DK383株在肺和脑组织内的病毒复制水平更高,激活TLR-TRIFTRAF6通路的能力更强,诱导了更强的免疫反应。本研究提示,DK383在番鸭肺和脑组织高水平复制,引起番鸭产生过度的先天免疫应答反应,从而造成肺和脑组织损伤。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H5N1亚型 调控 损伤

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一株鸭源新城疫病毒毒力基因分析及其对鸭的致病性研究 被引量：2

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作者 黎先伟 孙敏华 +4 位作者 何静 汪招雄 刘大伟 杨凤 任涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期27-32,共6页

为了解中国鸭源新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的毒力特点,从2009年广东地区发病鸭群中分离和鉴定出1株新城疫病毒（简称NDV-104）,对其生物学特性、致病性和融合蛋白（fusion,F）、血凝素神经氨酸酶（hemagglutinin-neuram... 为了解中国鸭源新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）的毒力特点,从2009年广东地区发病鸭群中分离和鉴定出1株新城疫病毒（简称NDV-104）,对其生物学特性、致病性和融合蛋白（fusion,F）、血凝素神经氨酸酶（hemagglutinin-neuraminidase,HN）基因进行了研究。结果显示,分离株的MDT、ICPI和IVPI分别为56.4 h、1.95和1.64,结合F蛋白裂解位点（112~117位）的氨基酸序列分析,确定了分离株为新城疫强毒。致病性结果表明,分离病毒对雏鸭具有感染性和致病性。F基因遗传进化结果显示,分离株属于基因Ⅶd亚型。F、HN蛋白的氨基酸同源性结果表明,分离株与2000年以来国内外分离到的基因Ⅶ型NDV同源性较高,分别为96.6%~99.3%和97.0%~99.7%,而其与常用疫苗株B1、V4、Clone30、Mukteswar和LaSota的F、HN蛋白氨基酸序列的同源性较低,且与LaSota株和V4株的同源性最低,分别仅为88.1%和87.6%,说明分离株与经典新城疫病毒毒株存在一定的差异。 展开更多

关键词 鸭 新城疫病毒 融合蛋白基因 血凝素神经氨酸酶基因 致病性

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广东省部分地区禽源和猪源沙门菌血清型与耐药性及Ⅰ类整合子分析 被引量：2

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作者 林嘉特 任行星 +6 位作者 符颖 王伟芳 詹泽强 张红霞 梁德媚 廖明 张建民 《动物医学进展》 北大核心 2017年第2期32-36,共5页

为了解广东省禽场和猪场沙门菌的血清型和耐药性情况,本研究2015年从广东省多个养殖场共采集样品126份,分离出沙门菌24株,分离率为19.04%。采用Kauffmann-White法、Kirby-Bauer法和PCR方法对分离株进行了血清型鉴定、药敏试验和Ⅰ类整... 为了解广东省禽场和猪场沙门菌的血清型和耐药性情况,本研究2015年从广东省多个养殖场共采集样品126份,分离出沙门菌24株,分离率为19.04%。采用Kauffmann-White法、Kirby-Bauer法和PCR方法对分离株进行了血清型鉴定、药敏试验和Ⅰ类整合子检测。血清型鉴定结果显示,24株沙门菌共鉴定出4种血清型,分别是鼠伤寒沙门菌(14株)、印第安纳沙门菌(8株)、科瓦利斯沙门菌(1株)和阿尔巴尼沙门菌(1株)。药敏试验结果显示,分离株对四环素(83.33%)、氨苄西林(70.83%)、磺胺异恶唑(70.83%)、萘啶酸(66.67%)、复方新诺明(58.33%)、卡那霉素(54.17%)、阿米卡星(54.17%)、庆大霉素(50.00%)的耐药率较高,有54.17%(13/24)的菌株对8种及8种以上抗菌药物耐药。Ⅰ类整合子检测结果显示,Ⅰ类整合酶阳性率为29.17%(7/24),整合酶阳性菌株中仅有1株扩增到携带耐药基因aadA2的基因盒。上述结果表明,广东省禽场和猪场沙门菌分离率较高,耐药情况严重,菌株的耐药性与其血清型和Ⅰ类整合子的携带有一定的相关性。 展开更多

关键词 沙门菌 血清型 耐药性 Ⅰ类整合子

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广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况及耐药性分析 被引量：8

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作者 王少君 孙康泰 +11 位作者 熊智颖 瞿孝云 马叶本 陈政权 张红霞 温俊平 白洁 詹泽强 高远 韦懿桓 廖明 张建民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2509-2517,共9页

本研究旨在了解广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况、耐药水平与耐药基因携带情况。对2016年从广东省五个地级市采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因的检测和分子分型。结果显示,245份鸡肉样品... 本研究旨在了解广东省零售市场鸡肉中肯塔基沙门菌的流行情况、耐药水平与耐药基因携带情况。对2016年从广东省五个地级市采集的鸡肉样品进行沙门菌分离鉴定、血清型鉴定、药敏试验、耐药基因的检测和分子分型。结果显示,245份鸡肉样品中沙门菌阳性率为62.04%(152/245),共鉴定出19种血清型,其中主要血清型有阿贡纳(Salmonella Agona,29/152,19.08%)、科瓦利斯(S.Corvallis,25/152,16.45%)以及肯塔基(S.Kentucky,20/152,13.16%)。肯塔基沙门菌药敏试验结果显示对磺胺异噁唑(100%)、萘啶酸(90%)、四环素(75%)、氨苄西林(65%)、头孢他啶(55%)、环丙沙星(55%)的耐药率较高,有85%(17/20)的菌株对3种及3种以上的抗菌药物耐药。对喹诺酮耐药基因的检测结果显示,95%(19/20)的菌株具有gyr A突变(Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly),其中有57.89%(11/19)的菌株发生gyrA双突变(Ser83Phe与Asp87Asr、Ser83Phe与Asp87Gly),5.26%(1/19)发生gyrA三突变(Ser83Phe、Asp87Asn、Asp87Gly);100%(20/20)的菌株具有parC突变(Tyr62Ser、Ser85Ile)。45%(9/20)分离株携带质粒介导的喹诺酮抗性(PMQR)基因(aac(6′)-Ib-cr、qnrB、qnrS、oqxAB),最常见的是aac(6′)-Ib-cr耐药基因。β-内酰胺类耐药基因bla TEM-1、bla OXA-1和bla CTX-M-55的检出率分别为25%、10%和5%。PFGE图谱的聚类分析结果显示,肯塔基沙门菌之间具有不同的亲缘关系与遗传多样性,部分菌株具有高度同源性。肯塔基沙门菌在广东省零售市场鸡肉中是主要的流行血清型之一。其对传统药物磺胺异噁唑、萘啶酸、四环素和氨苄西林耐药较严重,对环丙沙星以及头孢他啶耐药尤其严重,具有多种多重耐药表型。肯塔基沙门菌其喹诺酮耐药决定区突变率高。分子分型揭示了菌株间跨地区传播的可能,为肯塔基沙门菌溯源提供一定的依据。 展开更多

关键词 肯塔基沙门菌 耐药性 耐药基因 分子分型

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非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立 被引量：5

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作者 徐玲玉 曹琛福 +4 位作者 李中圣 陈俊宏 柳腾飞 王新凯 贾伟新 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期813-821,共9页

旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原,并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体,采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件,并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性... 旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的阻断ELISA方法。采用原核表达的ASFV p54蛋白作为包被抗原,并制备了针对p54蛋白的单克隆抗体,采用方阵滴定法确定了阻断ELISA方法的最佳反应条件,并对建立的方法进行了敏感性、特异性、重复性和符合性评价。结果显示,抗原最佳包被浓度为2.0μg·mL^(-1),抗原包被温度及时间为4℃过夜,被检血清稀释度为1∶40,酶标单抗稀释度为1∶1000,被检血清作用时间为1 h,酶标单抗作用时间为30 min,底物作用时间为10 min。经阴、阳性样品检测和特异性、敏感性试验,当临界值阻断率≥55.2%时,判定为阳性,当阻断率<43.4%时,判定为阴性,介于两者之间判定为可疑。该方法与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、猪流感病毒、猪伪狂犬病病毒阳性血清不发生交叉反应,特异性好。批内重复试验及批间重复试验的变异系数(CV)均在10%以内。将该方法进行初步应用,并与商品化ELISA试剂盒进行符合性试验,两者的检测符合率为98%。综上表明,建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于ASFV临床样品的抗体检测。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 ASFV 阻断ELISA p54蛋白 单克隆抗体

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种蛋孵化死胚及孵化厅环境样本中铜绿假单胞菌的分离鉴定及其耐药性分析 被引量：4

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作者 余蕴 向勇 +4 位作者 李庆钵 刘鹏 黎丽珍 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期548-555,共8页

本研究旨在了解种鸡场中种蛋孵化死胚和周围环境中感染或污染铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的比率及分离株的耐药性。从广东省的5个规模化种鸡场采集孵化厅死胚及其周围环境样本进行PA的分离鉴定,采用K-B纸片扩散法分析其抗... 本研究旨在了解种鸡场中种蛋孵化死胚和周围环境中感染或污染铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的比率及分离株的耐药性。从广东省的5个规模化种鸡场采集孵化厅死胚及其周围环境样本进行PA的分离鉴定,采用K-B纸片扩散法分析其抗菌药物敏感性,并通过常规PCR检测对应的耐药基因。结果显示,在采集的679份样本中,分离到共77株(77/679,11.3%)PA,其中2株来源于环境样本(2/24,8.3%),75株来源于死胚(75/655,11.5%)。药敏试验检测显示,耐药率最高的是复方新诺明(100%)和四环素(100%),其次为氯霉素(75.4%),另外第三代头孢噻肟也有检测出耐药株,耐药率达11.7%;多重耐药率高达62.3%;耐药基因qacE△1-sul1(29.9%)和ant(3″)-I(29.9%)的检出率最高,其次为DHA(28.3%),而oprD_(2)基因阳性率为11.7%,提示其对碳青霉烯类抗菌药的耐药性转移风险水平较高。综上,所调查的5个种鸡场的种蛋孵化死胚及其周围环境中均存在不同程度的PA感染或污染,且分离鉴定的菌株表现出较强的耐药性。因此建议该5个种禽场在养殖过程中要加强饲养管理,及时清洁和消毒种蛋、孵化机及其周边环境;另一方面应定期进行药敏试验,合理使用抗菌药物,以尽量减少耐药及多重耐药菌株的出现。 展开更多

关键词 种鸡场 死胚 铜绿假单胞菌 耐药性 耐药基因

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猪A群轮状病毒SCJY-13株的分离鉴定及致病性分析 被引量：4

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作者 陈小飞 张斌 +2 位作者 张春红 张建峰 廖明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第2期660-668,共9页

【目的】在从腹泻仔猪粪便中分离鉴定猪A群轮状病毒(Rotavirus group A,RVA)并了解其致病性。【方法】应用MA-104细胞从仔猪腹泻粪便中分离鉴定RVA,将其经口感染健康初生仔猪,观察其临床症状,并利用实时荧光定量PCR检测排毒、HE染色观... 【目的】在从腹泻仔猪粪便中分离鉴定猪A群轮状病毒(Rotavirus group A,RVA)并了解其致病性。【方法】应用MA-104细胞从仔猪腹泻粪便中分离鉴定RVA,将其经口感染健康初生仔猪,观察其临床症状,并利用实时荧光定量PCR检测排毒、HE染色观察病理变化、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)试验了解病毒分布。【结果】分离到1株可引起MA-104细胞明显细胞病变的G9P[23]RVA,命名为RVA/Pig-tc/CHN/SCJY-13/2017/G9P[23](简称SCJY-13株),病毒滴度为10^(5.5) TCID_(50)/100μL。经口感染SCJY-13株的仔猪在感染后11 h出现腹泻,持续到感染后165 h完全恢复,其发病率为100%(7/7),病死率为28.57%(2/7)。感染后8 h可从仔猪肛拭子检测到病毒核酸,直至感染后192 h,峰值出现在感染后24 h。感染后54 h各段小肠病毒载量达到最高,其中回肠中病毒载量最高,显著高于十二指肠、空肠(P<0.05);HE染色和IHC检测结果显示,SCJY-13在感染仔猪小肠的绒毛及隐窝中大量聚集,尤其是回肠段;SCJY-13株感染引起十二指肠、空肠和回肠绒毛固有层大量淋巴细胞浸润、黏膜上皮细胞和肠绒毛尖端空泡变性、柱状细胞增多、绒毛断裂脱落等,以回肠段较严重。【结论】SCJY-13株能引起新生仔猪100%发病,其主要靶位区在回肠,感染后排毒时间长。本试验结果为猪RVA的致病性研究提供了一定的参考依据。 展开更多

关键词 猪 A群轮状病毒(RVA) G9P23 分离鉴定 致病性

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猪A群轮状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量：5

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作者 陈小飞 严楠 +1 位作者 张斌 廖明 《动物医学进展》 北大核心 2021年第2期41-45,共5页

根据近5年来GenBank发布的猪A群轮状病毒(RVA)VP6基因序列,针对保守区域设计1对特异性引物,优化反应体系及条件,建立了TB Green实时荧光定量PCR方法。该方法在模板浓度为1.06×10^8 copies/μL~1.06×10^2 copies/μL范围内线... 根据近5年来GenBank发布的猪A群轮状病毒(RVA)VP6基因序列,针对保守区域设计1对特异性引物,优化反应体系及条件,建立了TB Green实时荧光定量PCR方法。该方法在模板浓度为1.06×10^8 copies/μL~1.06×10^2 copies/μL范围内线性关系良好,相关系数R^2=0.9975,最低检出浓度为106 copies/μL;批内及批间变异系数小于2%。利用该方法对猪RVA亚型G3、G4、G5、G9和G26检测均为阳性,而对猪常见病原(猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒、猪呼肠孤病毒MRV、猪捷申病毒、巴氏杆菌、链球菌以及猪等孢球虫)检测均为阴性。对91份临床腹泻样品进行检测,研究建立的猪RVA TB Green实时荧光定量PCR检出率(43.96%,40/91)高于已报道的猪RVA SYBR Green荧光定量PCR(42.86%,39/91)和国家标准RVA的普通RT-PCR(12.09%,11/91),且符合率为100%。建立的RVA荧光定量PCR检测方法为流行病学调查和早期诊断提供了技术支撑。 展开更多

关键词 猪轮状病毒 荧光定量PCR VP6基因

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STM1827在鼠伤寒沙门菌生物被膜形成及环境应激中的调控作用 被引量：2

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作者 李莉莉 陈凯风 +6 位作者 陈兵 周洲平 王南威 瞿孝云 徐成刚 廖明 张建民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5207-5217,共11页

旨在研究环二鸟苷酸(c-di-GMP)通路代谢基因STM1827对鼠伤寒沙门菌生物被膜的调控及其相关生物学功能。首先通过测定c-di-GMP水平分析STM1827对c-di-GMP合成的影响;进一步通过生物被膜及运动性等试验分析STM1827对生物被膜形成的作用;... 旨在研究环二鸟苷酸(c-di-GMP)通路代谢基因STM1827对鼠伤寒沙门菌生物被膜的调控及其相关生物学功能。首先通过测定c-di-GMP水平分析STM1827对c-di-GMP合成的影响;进一步通过生物被膜及运动性等试验分析STM1827对生物被膜形成的作用;最后通过氧胁迫和消毒剂胁迫等试验分析STM1827对鼠伤寒沙门菌环境应激适应能力的影响。结果显示,缺失株269ΔSTM1827胞内c-di-GMP水平与野生株相比升高了33.16%;在生物被膜形成方面,缺失株269ΔSTM1827生物被膜形成能力与野生株相比上调了2.19倍,生物被膜相关胞外多糖含量增加1.3倍,且胞外多糖合成基因表达量显著升高(P<0.0001);在运动性方面,与野生株相比,269ΔSM1827运动性降低了13%,鞭毛相关基因表达量显著降低(P<0.05);在氧应激和消毒剂应激条件下,STM1827基因缺失增强鼠伤寒沙门菌在氧胁迫和SDS消毒剂胁迫下的适应能力。研究表明,STM1827可以降解c-di-GMP,且通过抑制胞外多糖的合成与促进细菌运动性,进而抑制生物被膜形成,最终导致细菌在氧胁迫和消毒剂胁迫下的耐受性降低。本研究为鼠伤寒沙门菌病作用靶点的筛查和防控措施的开发提供理论基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 环二鸟苷酸 STM1827 生物被膜 运动性 适应性

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鸡源弯曲菌的分离鉴定和耐药性检测 被引量：3

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作者 廖昕萌 陈凯风 +2 位作者 周华亮 林琦杰 张建民 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期51-55,共5页

为了解弯曲菌在肉鸡养殖场中的流行和耐药情况,于2018年12月至2019年6月从广东省某肉鸡养殖场随机采集泄殖腔拭子140份,进行弯曲菌的分离鉴定、药敏试验和耐药基因的检测。结果共分离到75株弯曲菌,分离率为53.6%,其中结肠弯曲菌的分离率... 为了解弯曲菌在肉鸡养殖场中的流行和耐药情况,于2018年12月至2019年6月从广东省某肉鸡养殖场随机采集泄殖腔拭子140份,进行弯曲菌的分离鉴定、药敏试验和耐药基因的检测。结果共分离到75株弯曲菌,分离率为53.6%,其中结肠弯曲菌的分离率为30%,空肠弯曲菌的分离率为23.6%,结肠弯曲菌为优势弯曲菌。药敏试验显示,分离菌株对萘啶酸的耐药性最高(88.0%)。庆大霉素和红霉素作为治疗弯曲菌感染的一线药物其耐药率分别为68.0%和73.3%。75株弯曲菌对12种抗生素产生了47种耐药模式,多重耐药率达到了92.0%。耐药基因检测发现,四环素类耐药基因tet(O)检出率高达62.7%。研究表明,广东省肉鸡养殖场中弯曲菌的污染率较高,耐药情况严重,耐药谱复杂多样,多重耐药率较高,对公共卫生具有潜在威胁,需要加强监测与深入研究。 展开更多

关键词 弯曲菌 分离鉴定 耐药 肉鸡

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