2018—2022年我国H5亚型禽流感的流行特点及防控 被引量：1

1

作者 尤博文 陈禧悦 +1 位作者 廖明 代曼曼 《中国家禽》 北大核心 2024年第1期90-96,共7页

H5亚型高致病性禽流感在我国频繁发生,对我国养禽业造成严重危害,同时亦对我国公共卫生带来了巨大挑战。近年来,随着H5亚型禽流感病毒的不断进化,其在我国的流行情况也发生了一定变化。文章对2018年1月—2022年11月我国暴发的H5亚型禽... H5亚型高致病性禽流感在我国频繁发生,对我国养禽业造成严重危害,同时亦对我国公共卫生带来了巨大挑战。近年来,随着H5亚型禽流感病毒的不断进化,其在我国的流行情况也发生了一定变化。文章对2018年1月—2022年11月我国暴发的H5亚型禽流感相关公共数据进行分析,并结合血清学和病原学的监测数据,阐述了H5亚型禽流感病毒传播与进化过程、流行情况和特点,以期为我国H5亚型禽流感的防控提供理论依据。 展开更多

关键词 H5亚型禽流感 流行特点 防控

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我国禽流感流行趋势和疫苗研究现状 被引量：3

2

作者 张涛 张家豪 +1 位作者 廖明 亓文宝 《中国家禽》 北大核心 2025年第5期141-151,共11页

禽流感病毒(AIV)作为一种传染性强、突变率高的人兽共患病病原体,给我国养禽业造成巨大的隐患和损失,更对人类健康造成了严重威胁。多年来,尽管我国已经实施了诸如扑杀、强制免疫、封锁疫区等一系列传统和新型的策略来防止AIV在家禽中传... 禽流感病毒(AIV)作为一种传染性强、突变率高的人兽共患病病原体,给我国养禽业造成巨大的隐患和损失,更对人类健康造成了严重威胁。多年来,尽管我国已经实施了诸如扑杀、强制免疫、封锁疫区等一系列传统和新型的策略来防止AIV在家禽中传播,但是AIV在国内仍然散发流行。目前,疫苗接种仍然是防控禽流感的最有效方法,禽流感灭活疫苗已获准在养禽业中大规模生产使用,而其他新型疫苗也正在研发中。文章阐述了禽流感灭活疫苗、弱毒疫苗、亚单位疫苗、病毒载体疫苗、核酸疫苗和通用疫苗的研发策略及研究现状,并分析了不同类型疫苗的优缺点,为禽流感疫苗的研发提供参考。 展开更多

关键词 禽流感病毒 家禽 免疫 防控 疫苗

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我国近阶段禽流感的流行特点分析与防控对策建议 被引量：13

3

作者 廖明 焦培荣 +1 位作者 亓文宝 徐成刚 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期580-583,共4页

文章在分析H5亚型、H9亚型、H6亚型及H7亚型禽流感形势的基础上,研判了我国禽流感的流行趋势,并提出了防控对策.

关键词 禽流感 流行特点 防控对策

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G57基因型H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统的建立与验证

4

作者 史玉婷 韩心雨 +5 位作者 钟沐卉 林耀忠 柳腾飞 李焰 尹会方 贾伟新 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第4期1825-1833,共9页

旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构... 旨在构建当前流行毒株H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的反向遗传操作平台。毒株A/Chicken/Guangdong/M/2021(H9N2)(简称为M)分离自广东某养鸡场病料。鉴定并分析其全基因组序列,通过RT-PCR以及无缝克隆技术完成质粒构建,共转染293T细胞成功拯救毒株命名为rM。测定病毒的稳定性和生长曲线;进行动物试验,从传播效率、致病性角度验证克隆毒株与原毒的一致性。结果显示:M毒株为G57基因型,为近年的流行毒株。M毒株与rM毒株在酸稳定性、热稳定性、致病性以及传播性等方面保持一致的生物学特性。综上,成功建立了G57基因型H9N2亚型AIV的反向遗传系统,且从体内和体外试验两个方面全面验证M与rM的生物学特性保持一致。 展开更多

关键词 反向遗传 H9N2 禽流感病毒 G57基因型

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当前我国H5、H7亚型禽流感流行现状及防控建议 被引量：19

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作者 贾伟新 廖明 《中国家禽》 北大核心 2017年第16期1-4,共4页

当前我国H5、H7亚型禽流感同时流行且流行毒株复杂多样,给我国养禽业的疫病防控和健康发展带来极大挑战。为有效防控禽流感,政府及相关部门应完善防疫政策、加强防疫技术及产品的储备,养禽企业应坚持"预防为主"的原则,严格执... 当前我国H5、H7亚型禽流感同时流行且流行毒株复杂多样,给我国养禽业的疫病防控和健康发展带来极大挑战。为有效防控禽流感,政府及相关部门应完善防疫政策、加强防疫技术及产品的储备,养禽企业应坚持"预防为主"的原则,严格执行生物安全防疫措施,落实好禽流感疫苗免疫工作。 展开更多

关键词 H5亚型禽流感 H7N9 流行 防控

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表达副猪格拉瑟菌GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌构建及免疫学评价

6

作者 陈丽璇 符颖 +3 位作者 陈政权 李莉莉 张伟孝 张建民 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第3期319-325,共7页

【目的】构建能同时表达副猪格拉瑟菌Glaesserella parasuis关键抗原GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌Salmonella choleraesuis,并评估其作为二联疫苗候选株的潜力,以期为预防G.parasuis和S.choleraesuis感染提供一种新型高效的解决方... 【目的】构建能同时表达副猪格拉瑟菌Glaesserella parasuis关键抗原GAPDH和OmP26的重组猪霍乱沙门氏菌Salmonella choleraesuis,并评估其作为二联疫苗候选株的潜力,以期为预防G.parasuis和S.choleraesuis感染提供一种新型高效的解决方法。【方法】选取多种血清型的G.parasuis中广泛存在的抗原GAPDH和OmP26作为外源抗原,以S.choleraesuis C500Δasd缺失株为载体,构建同时表达GAPDH和OmP26的G.parasuis-S.choleraesuis重组菌株,并对其生物学特性和免疫效果展开研究。【结果】PCR与测序结果共同表明,本研究成功构建重组菌株C501(pYA-GAPDH-OmP26),该菌株能稳定携带GAPDH和OmP26基因片段(大小分别为1020和798 bp),在连续传代100次中均能稳定扩增目标片段;且生长曲线、生化特性与对照菌C501(pYA3493)一致。重组菌株C501(pYA-GAPDH-OmP26)对S.choleraesuis C78-1和G.parasuis 5型强毒株SH0165的保护率分别为62.5%和50.0%,而C501(pYA3493)对S.choleraesuis C78-1的保护率为50.0%,对G.parasuis 5型强毒株SH0165则无保护作用。【结论】重组沙门氏菌C501(pYA-GAPDH-OmP26)能稳定携带异源基因,具有与亲本菌株相近的生物学特性及良好的表达特性,能够诱导机体对G.parasuis和S.choleraesuis产生联合免疫反应,为G.parasuis-S.choleraesuis二联基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 副猪格拉瑟菌 猪霍乱沙门氏菌 C500Δasd缺失株 GAPDH OmP26

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从活禽交易的干预效果看我国禽流感的流行与防控 被引量：12

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作者 贾伟新 廖明 《中国家禽》 北大核心 2015年第22期1-3,共3页

我国当前的禽流感防控形势依然严峻,除高致病性禽流感的威胁外,还需要警惕能感染人的重组病毒。其中活禽交易市场在禽流感病毒传播中扮演重要角色,它是禽流感病毒重要的集散地和疫病传播环节,但禽流感的防控不能仅限于干预活禽交易市场... 我国当前的禽流感防控形势依然严峻,除高致病性禽流感的威胁外,还需要警惕能感染人的重组病毒。其中活禽交易市场在禽流感病毒传播中扮演重要角色,它是禽流感病毒重要的集散地和疫病传播环节,但禽流感的防控不能仅限于干预活禽交易市场,还有赖于行政部门和养禽企业多方共同努力。 展开更多

关键词 活禽交易 禽流感病毒 流行 传播

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F亚群禽白血病病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立

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作者 潘洪艳 李锦群 +2 位作者 李琪 袁伊琳 曹伟胜 《广东畜牧兽医科技》 2025年第2期23-29,共7页

为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV⁃F),该研究针对ALV⁃F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV⁃F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4μM。利用最适... 为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV⁃F),该研究针对ALV⁃F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV⁃F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4μM。利用最适反应条件建立的标准曲线方程为y=-3.303x+42.525,R2=0.997,扩增效率E=100.8%,重组质粒标准品拷贝数与Ct值具有良好的线性关系。特异性试验结果表明,该方法仅能特异性检测ALV⁃F,对ALV⁃A、ALV⁃B、ALV⁃J、ALV⁃K、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)、网状内皮组织增生病病毒(REV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)无交叉反应;敏感试验结果表明,该方法最低检测限度为4.67×10^(2)拷贝/μL,敏感性是普通PCR的1000倍;稳定性试验结果表明,批间和批内稳定性试验的变异系数均小于2%。利用该方法、ALV p27 ELISA和普通PCR方法分别对23份七彩山鸡胚所制备的原代细胞(PEF)样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率均为95.65%(22/23),而ALV p27 ELISA阳性检出率仅为39.13%(9/23),该方法与普通PCR总符合率为100%,与ALV p27 ELISA总符合率为43.48%;进一步利用该方法、病毒分离法(结合ALV p27 ELISA)和普通PCR方法分别对20份七彩山鸡抗凝血样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率分别为100.00%(20/20)和75.00%(15/20),两者总符合率为75.00%,而病毒分离法阳性检出率为0.00%(0/20)。本研究建立的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,能够有效检测临床样品,可以为ALV⁃F的精准检测提供技术支持。 展开更多

关键词 禽白血病 ALV⁃F SYBR GreenⅠ荧光定量PCR

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一株鸡源H3N8亚型禽流感病毒的遗传进化和对仓鼠致病性的分析

9

作者 李婷 王梦遥 +8 位作者 乔方方 张立吉 杨文静 张钰炘 黄江武 周婉婷 孙敏华 和君 廖明 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第9期1862-1872,共11页

目的:本研究从广东省阳江市某养殖场的病鸡中分离到一株H3N8亚型禽流感病毒,命名为A/chicken/Yangjiang/552/2023(简称YJ/552),进一步探索其遗传进化特征、生物学特性和致病力,为H3N8亚型禽流感病毒的防治提供理论基础。方法:采集病鸡... 目的:本研究从广东省阳江市某养殖场的病鸡中分离到一株H3N8亚型禽流感病毒,命名为A/chicken/Yangjiang/552/2023(简称YJ/552),进一步探索其遗传进化特征、生物学特性和致病力,为H3N8亚型禽流感病毒的防治提供理论基础。方法:采集病鸡的肺脏组织并分离纯化出一株鸡源H3N8禽流感病毒,进行全基因组测序并分析其遗传进化情况;检测该毒株生物学特性,并在叙利亚仓鼠(以下简称“仓鼠”)进行致病性和传播性评估。结果:(1)该H3N8分离株是由欧亚禽源H3基因、北美禽源N8基因和H9N2亚型AIV的6个内部基因通过复杂重组产生的新型H3N8亚型禽流感病毒,其HA蛋白裂解位点为PEKQTR↓GLF,属于低致病性禽流感病毒。(2)分离株YJ/552的HA基因与A/China/ZMD-22-2/2022(H3N8)核苷酸同源性最高(99.09%),NA基因与A/chicken/Dong⁃guan/879/2022(H3N8)核苷酸同源性最高(99.01%),其6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M和NS)均源自H9N2亚型AIV。(3)受体结合实验发现,该毒株具备与α-2,3唾液酸受体和α-2,6唾液酸受体的结合能力,且优先与禽源受体结合。(4)动物感染性实验发现,该病毒仅引起仓鼠体重轻微下降,但可在仓鼠肺内和气管内高效复制,排毒期持续9 d,同居组动物排毒期为8 d。病理分析发现,该毒株可引起呼吸道脏器肺脏和气管炎性细胞浸润等明显病理变化。抗体结果显示,感染组仓鼠从第3天起检出病毒抗体,在第14天高达9~10 log2,提示本毒株可引起仓鼠较强的免疫反应。结论:YJ/552是一株三源重组的在鸡胚复制能力强的低致病性禽流感病毒,具备禽、人双受体结合特性,可在呼吸系统高效复制和传播,应尽快对病原展开监控。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H3N8亚型 遗传进化 仓鼠致病性

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当前我国H5亚型禽流感的流行情况及防控对策 被引量：15

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作者 李伟强 何婉婷 +8 位作者 王霞 刘智婷 张友 王文清 赵冰兵 陈祖贤 廖明 瞿孝云 焦培荣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期114-116,共3页

禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒引起的一种主要感染禽类的人兽共患传染病。禽流感病毒的自然宿主是水禽,但它也可以感染多种家禽和人等哺乳动物,因此禽流感是威胁养禽业和人类健康的主要传染病之一。禽流感病毒在进化过... 禽流感（Avian Influenza,AI）是由A型流感病毒引起的一种主要感染禽类的人兽共患传染病。禽流感病毒的自然宿主是水禽,但它也可以感染多种家禽和人等哺乳动物,因此禽流感是威胁养禽业和人类健康的主要传染病之一。禽流感病毒在进化过程中易通过基因重排或基因突变而发生变异,导致新的毒株不断出现。另外,我国幅员辽阔、家禽品种繁多、养殖方式多样化,这增加了防控禽流感的难度。 展开更多

关键词 H5亚型禽流感 防控对策 流行情况 人兽共患传染病 禽流感病毒 A型流感病毒 家禽品种 自然宿主

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广东地方品种鸡ALV-K分子流行病学及gag基因12 bp缺失对病毒体外复制能力影响的研究 被引量：5

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作者 郭妍妍 梁灿新 +3 位作者 李锦群 董欣怡 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3956-3966,共11页

为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A~G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8042份。通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测... 为了解目前广东地方品种鸡K亚群禽白血病病毒(avian leukosis virus,ALV-K)的分子特征,于2020-2021年,从广东7家(A~G)正在进行外源性ALV净化的、外观健康的规模化种禽场核心群采集抗凝血样品共8042份。通过血浆接种DF-1细胞、ELISA检测p27抗原,共检出357份阳性,并对ELISA结果S/P值0.2~0.6的150份阳性样品进行PCR鉴定和env基因测序,共分离到32株ALV-K,进一步选取16株进行全基因组扩增及测序分析。结果显示,这16株ALV-K全长为7481~7496 bp,基因组符合5′-LTR-UTR-gag-pol-env-UTR-LTR-3′典型的反转录病毒结构,不含已知致癌基因;其gp85基因与ALV-K参考株位于同一进化分支上且相似性最高(>94.0%);其pol、gp37基因均比较保守,与ALV各亚群相似性均较高(>94.0%);其LTR与内源性ALV及大多数ALV-K参考株相似性最高(91.4%~99.5%),且LTR U3区与内源性ALV LTR有相同的转录调控元件;此外,观察到31.3%(5/16)的分离株在gag基因373-384位核苷酸存在12 bp的缺失,进一步以缺失株GD20 JM10为亲本,通过PCR分段扩增和同源重组的方法分别构建了缺失株(rGD20 JM10)和回补株(rGD20 JM10 A12)的cDNA克隆,将其转染DF-1细胞,ELISA和IFA结果表明,病毒拯救成功;体外复制动力学结果显示,两者差异不显著(P>0.05)。本研究所调查的广东7个种禽场的ALV-K流行株均携带内源性LTR,且分子特征较为稳定,故采用更敏感的检测技术在开展ALV净化时尤为重要,此外,gag基因373—384位核苷酸的规律性缺失对病毒的体外复制能力无显著影响。 展开更多

关键词 K亚群禽白血病病毒 地方品种鸡 分子流行病学 GAG基因 感染性克隆

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当前非洲猪瘟流行状况、诊断及防控措施 被引量：2

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作者 黎金荣 关蕴 +7 位作者 武文博 张俊生 薛倩 刘静 王霞 何婉婷 孙海亮 焦培荣 《广东畜牧兽医科技》 2019年第4期1-5,17,51,52,共8页

非洲猪瘟由非洲猪瘟病毒感染引起的一种烈性、广泛出血性传染病,其发病率和死亡率可达100%,是我国法定的一类动物疫病。2018年8月我国首次报道了非洲猪瘟疫情,截至2019年4月12日已有30个省份共121起疫情,对养猪业造成了严重的损失。为... 非洲猪瘟由非洲猪瘟病毒感染引起的一种烈性、广泛出血性传染病,其发病率和死亡率可达100%,是我国法定的一类动物疫病。2018年8月我国首次报道了非洲猪瘟疫情,截至2019年4月12日已有30个省份共121起疫情,对养猪业造成了严重的损失。为了提高从业人员对非洲猪瘟的认识,增强预防和防控能力,本文从非洲猪瘟的病原学、流行病学、诊断方法和防控措施与挑战四个方面进行了概述。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 流行状况 诊断 防控措施

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非洲猪瘟检测方法研究进展 被引量：2

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作者 陈画菡 朱君海 +3 位作者 高飞 简伟俊 黄丽红 亓文宝 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期91-100,共10页

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。ASF疫情的暴发,严重威胁全球生猪养殖业安全,给全球造成巨大的经济损失。目前尚未开发出安全有效的ASF疫苗,因此,及时、准确的ASF实验室诊断成为疫情... 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触性传染病。ASF疫情的暴发,严重威胁全球生猪养殖业安全,给全球造成巨大的经济损失。目前尚未开发出安全有效的ASF疫苗,因此,及时、准确的ASF实验室诊断成为疫情防控的重要手段。ASF现有检测方法包括血清学检测、聚合酶链式反应(PCR)、等温扩增技术和规律成簇的间隔短回文重复序列及其相关系统(CRISPR/Cas)等,其中,血清学检测、PCR检测和CRISPR/Cas都需要专业人员和设备,而等温扩增技术受限于单一类型的检测样品,且灵敏度较低,因此ASF现有检测方法无法同时达到灵敏度高,又快速、简便、可用于现场检测的要求。相较之下,ASF新型检测方法可以达到便捷、高效、省时省力以及可以在现场实现快速检测的优势,其中,生物传感器无需专业人员操作,人工智能(AI)可减少人员成本,并可用于疫情的早期监测,基于磁珠的技术无需复杂的设备,微流体技术可实现高通量快速检测,磁流体装置可解决核酸污染的问题。随着科技的进步,基于免疫层析试纸条和各类传感器的ASF新型检测方法将蓬勃发展。本文总结了ASF现有检测方法,并综述了近5年ASF新型检测方法的发展情况,以期对ASF疫情的科学防控提供参考。 展开更多

关键词 非洲猪瘟 新型检测方法 生物传感器 人工智能 微流体技术 磁流体装置

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J亚群禽白血病病毒血液核酸筛查技术的建立 被引量：2

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作者 董欣怡 李锦群 +2 位作者 陈钦玺 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1115-1126,共12页

为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood q... 为缩短J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)检测周期,进一步加快禽白血病净化进程,本研究结合SYBR GreenⅠqPCR和混样检测,建立了一种适用于低ALV-J流行率场景下的快速筛检ALV-J的血液核酸筛查技术(ALV-J blood quantitative polymerase chain reaction,ALV-J-B-qPCR)。根据GenBank中ALV-J pol及env基因序列,设计ALV-J的特异性引物,并优化反应条件,建立了ALV-J SYBR GreenⅠqPCR检测方法。以ALV-J病毒分离为阳性的鸡抗凝血为实验材料,分别制备抗凝血DNA、血细胞DNA、外周血淋巴细胞DNA、外周血淋巴细胞cDNA和血浆cDNA 5类血液检测模板进行ALV-J的PCR检测,筛选最佳检测模板;进一步比较蒸馏水破裂红细胞法提取混合血液DNA的混样方法,血液混样总体积为200μL的混样方法,血液混样总体积为10μL的混样方法共3种混样方法的检测准确性,筛选最佳混样方法。综合上述qPCR方法、检测模板与混样方法,成功建立了ALV-J-B-qPCR。运用ALV-J-B-qPCR分别进行预期流行率为1%~2%、4%~5%场景下的模拟筛查试验,并与病毒分离法比较。qPCR方法的特异性、灵敏性和重复性试验显示,该方法仅特异性扩增ALV-J,对标准质粒的最低检测限度为1×10^(2)copies·μL^(-1),批内与批间变异系数均<1%。对90份临床送检血液样品的检测结果显示,该qPCR方法对ALV-J的检出率(15.6%)高于p27抗原ELISA和普通PCR的检出率(12.2%)。检测模板筛选试验中,抗凝血DNA最符合检测准确度高、操作复杂度和成本低的要求,为最佳检测模板。混样方法摸索试验中,混样总体积为10μL(混样规模<12份)的混样方法检测准确性最高,为最佳混样方法。在样本数为400份,预期流行率为4%~5%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为6.25%,比病毒分离法高2.00%;在样本数为400份,预期流行率为1%~2%场景的模拟筛查中,ALV-J-B-qPCR检出率为2.25%,比病毒分离法高0.75%。本研究建立的ALV-J-B-qPCR技术具有灵敏性高、检测快速和节约成本的优势,为种禽场加快ALV净化进程提供了新的思路和方法。 展开更多

关键词 J亚群禽白血病病毒 实时荧光定量PCR 混样检测 筛查技术

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H9N2亚型禽流感病毒感染鸡呼吸道应答模式研究 被引量：2

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作者 池周颖 李天旭 +6 位作者 吴亚鑫 瞿孝云 李思婕 孙敏华 张建峰 廖明 杜寿文 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3970-3979,共10页

【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡... 【目的】通过建立H9N2亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡上呼吸道炎症模型,探索其感染鸡上呼吸道引起的炎症反应。【方法】将H9N2亚型AIV流行毒株GD10142,按照100μL/只(108 EID 50/100μL)的剂量通过滴鼻点眼方法感染SPF鸡,并在感染后观察鸡的临床特征,采集感染后0、1、3、5、7、9 d的咽拭子和血清样品;感染后5和9 d剖检观察鸡的呼吸道和肺脏病理变化,收集气管灌洗液、气管和肺脏组织;通过实时荧光定量PCR检测咽拭子、气管灌洗液、气管和肺脏组织中的病毒载量;应用ELISA方法检测感染后血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG的变化规律,通过血清中和试验分析血清中和抗体的活性;通过ELISA方法检测血清和气管灌洗液中炎症相关细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和核转录因子κB(NF-κB)的水平。【结果】H9N2亚型AIV感染后鸡没有出现典型的临床特征,但感染后1~5 d在咽拭子中可检测到病毒核酸,且感染3 d后病毒载量最高,感染5 d后检测不到病毒核酸;感染5 d时,在气管灌洗液、气管和肺脏检测到病毒核酸,其中前两者载量高于肺脏;血清总IgG和H9N2亚型AIV特异性IgG在感染后3 d增多,感染后5~9 d维持较高水平,且具有较强的病毒中和活性;血清IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB也在感染后3 d开始呈上升趋势;但气管灌洗液中IL-6、IL-10、IL-1β、TNF-α和NF-κB含量很低,且感染前后无明显变化。【结论】本研究成功建立了H9N2亚型AIV感染鸡呼吸道模型,确定上呼吸道是H9N2亚型AIV主要感染和增殖部位,H9N2亚型AIV感染诱导机体产生促炎和抑炎细胞因子,可能是感染动物维持免疫稳态的重要因素。本研究为深入探索H9N2亚型AIV的致病机制和宿主防御机制奠定了基础。 展开更多

关键词 H9N2亚型禽流感病毒 呼吸道感染 免疫应答 模型评价

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与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析

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作者 梁灿新 郑小雪 +3 位作者 舒雪利 周婉怡 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1127-1136,共10页

本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus,FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。 展开更多

关键词 黄羽肉鸡 鸡内皮血管瘤 K亚群禽白血病病毒 遗传进化分析

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广东某种鸡场鸡白痢沙门菌的分离鉴定及耐药性、毒力基因检测

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作者 周迪 魏科 +1 位作者 段千禧 曹伟胜 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5033-5042,共10页

【目的】了解某种鸡场鸡白痢沙门菌感染情况,并对其耐药性及毒力基因情况进行分析,旨在为鸡白痢防控提供依据。【方法】试验采集疑似患鸡白痢的病鸡肝脏病料进行沙门菌的分离培养,利用特异性引物通过PCR扩增对分离株进行菌种鉴别。使用... 【目的】了解某种鸡场鸡白痢沙门菌感染情况,并对其耐药性及毒力基因情况进行分析,旨在为鸡白痢防控提供依据。【方法】试验采集疑似患鸡白痢的病鸡肝脏病料进行沙门菌的分离培养,利用特异性引物通过PCR扩增对分离株进行菌种鉴别。使用多位点序列分型(MLST)技术获得其分子分型,利用琼脂稀释法测定分离株的最小抑菌浓度;运用二代基因测序技术分析分离株的耐药性与毒力基因特征。【结果】本研究共分离获得5株鸡白痢沙门菌分离株,分别命名为SPNH05-1~SPNH05-5。MLST分型结果显示,5株分离株均为ST92型。药敏试验结果显示,分离株均为多重耐药,共存在2种耐药谱:氨苄西林+萘啶酸+磺胺异噁唑和氨苄西林+萘啶酸+磺胺异噁唑+多黏菌素B。对分离株SPNH05-1、SPNH05-2进行二代基因测序,结果显示,2株分离株存在β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类、磺胺类、多肽类等28种耐药基因,存在151种毒力基因,主要与沙门菌黏附、三型分泌系统、应激、毒素等有关。【结论】本研究结果表明该种鸡场存在多重耐药鸡白痢沙门菌感染,分离株携带多种耐药和毒力基因,试验结果为该种鸡场鸡白痢净化提供参考。 展开更多

关键词 鸡白痢沙门菌 分离鉴定 耐药性 毒力基因

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MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制解析

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作者 贾玉生 李易霖 +2 位作者 马露露 廖明 代曼曼 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3132-3142,共11页

MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽... MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽。利用晶体初筛试剂盒在体外培育肽和MHCⅠ的二元复合物晶体,并利用COOT、CCP4和PYMOL等软件对该晶体结构进行解析和分析。在这项研究中,作者发现二个与BF2*0201稳定结合的ALV-J CTL表位FVDFANRLI和SALQAFREV。得到一个优质晶体BF2*0201-SALQAFREV(SV9),其生长条件为1.0 mol·L^(-1)丁二酸(pH 7.0),0.1 mol·L^(-1)HEPES(pH 7.0),1%聚乙二醇单甲醚2000。解析高分辨率(1.72A)的BF2*0201-SV9复合物结构后发现BF2*0201抗原结合槽整体呈现弱负电性。保守的残基多位于抗原结合槽的两端,特异性氨基酸赋予BF2*0201中等大小的抗原结合槽。B、C和F口袋起着较重要的锚定作用,口袋残基和水分子与抗原多肽形成氢键作用,将其固定在抗原结合槽中。SV9表位构象中突出的P4-Gln和P7-Arg残基的构象特征表明该位点有被特异性TCR潜在识别的特性。BF2*0201-SV9复合物晶体结构特征有助于阐明B2单倍型MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位的机制,有助于解释B2单倍型鸡对ALV存在抗性的原因,为抗病育种工作奠定理论基础。 展开更多

关键词 MHC BF2*0201 ALV-J 递呈机制 晶体结构

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鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究 被引量：6

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作者 何静 张盼盼 +6 位作者 孙敏华 康银峰 谢鹏 向斌 韩翡 谭阳通 任涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期18-22,共5页

【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具... 【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素(Chicken interferon alpha,Ch IFN-α)与鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)基因构建Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因并克隆入p ET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDSPAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)及新城疫病毒(NDV)增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白相对分子质量约为38 000,蛋白经纯化后纯度在90%以上.r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和NDV的活性明显高于单一r Ch IFN-α、r Ch IL-18蛋白的抗病毒活性. 展开更多

关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素18 融合PCR 抗病毒活性

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青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌荧光定量RQ-PCR检测方法的建立 被引量：6

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作者 赵静 张红见 +2 位作者 马梅琴 廖明 陈刚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第10期18-20,24,共4页

参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100～1×1010拷贝。对... 参照GenBank中已发表的多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT-1的保守序列设计1对引物,建立了牦牛多杀性巴氏杆菌实时荧光定量RQ-PCR检测方法。获得的标准曲线相关系数R值为0.9998,标准曲线的线性范围达到1.0×100～1×1010拷贝。对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌和伤寒沙门菌等非巴氏杆菌进行检测,结果均为阴性。结果表明,本研究建立的荧光定量RQ-PCR方法敏感性高,特异性强,为青藏高原牦牛多杀性巴氏杆菌病的早期诊断及分子流行病学调查提供了一种新的快速检测方法。 展开更多

关键词 牦牛 多杀性巴氏杆菌 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量RQ-PCR

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