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5-aza-dc和TSA对广西陆川猪体细胞核移植的影响 被引量:3
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作者 秦小娥 王猛 +2 位作者 宋雪梅 卢晟盛 卢克焕 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期2372-2375,共4页
为探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc、去乙酰基转移酶抑制剂TSA对广西陆川猪体细胞核移植效率的影响,用5-aza-dc、TSA处理供体细胞和重构胚。结果显示,5-Aza-dc联合TSA处理供体细胞、重构胚以及连续处理供体细胞和重构胚,桑椹胚率均显著高... 为探讨甲基转移酶抑制剂5-aza-dc、去乙酰基转移酶抑制剂TSA对广西陆川猪体细胞核移植效率的影响,用5-aza-dc、TSA处理供体细胞和重构胚。结果显示,5-Aza-dc联合TSA处理供体细胞、重构胚以及连续处理供体细胞和重构胚,桑椹胚率均显著高于对照组(P<0.05),但各组间囊胚率差异不显著。说明5-aza-dc联合TSA处理供体细胞和克隆胚能提高猪克隆胚的发育能力,尽管差异不显著。 展开更多
关键词 体细胞核移植 卵母细胞 5-AZA-DC TSA
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广西巴马小型猪体细胞核移植体系的建立 被引量:3
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作者 王献伟 卢晟盛 卢克焕 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期2376-2381,共6页
通过建立广西巴马小型猪体细胞核移植培养体系,为后续转基因克隆猪生产及其相关研究提供最佳条件。试验探讨了盲吸法对猪卵母细胞的去核效率;利用分离到的广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,探讨6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)... 通过建立广西巴马小型猪体细胞核移植培养体系,为后续转基因克隆猪生产及其相关研究提供最佳条件。试验探讨了盲吸法对猪卵母细胞的去核效率;利用分离到的广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,探讨6-二甲氨基嘌呤(6-DMAP)和细胞松弛素B(CB)对其后续胚胎发育的影响;利用分离到的广西巴马小型猪腹部成纤维作供体,探讨其对核移植胚胎的发育效率。结果表明:猪卵母细胞盲吸法去核的效率为73.75%;广西巴马小型猪附睾成纤维细胞作供体构建重构胚胎,6-DMAP和CB对其后续胚胎发育没有显著差异(分裂率和囊胚率分别为:89.89%and 6.74%vs.82.95%and 5.68%,P>0.05);腹部成纤维细胞作供体,重构胚胎的融合率、分裂率和囊胚率分别为55.40%、67.53%和6.49%。采用盲吸法可以对体外成熟猪卵母细胞成功去核,广西巴马小型猪腹部成纤维细胞和附睾成纤维细胞均可作供体成功构建体细胞核移植胚胎,并可以发育到囊胚。 展开更多
关键词 广西巴马小型猪 体细胞核 移植
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小鼠精子激活力减弱模型制备技术的初步研究
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作者 苗聪秀 燕志光 +6 位作者 杨红梅 龙慧 柴蔚然 梁红星 于莎 匡延平 吕祁峰 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期621-626,共6页
【目的】:人类辅助生殖技术中,低受精率的发生机理及辅助激活提高受精率的安全性尚不清楚,缺乏激活力减弱的精子模型是其中一个主要研究障碍。本研究拟探索减弱小鼠精子激活力的新技术。【方法】首先,分别对精子进行化学破膜、机械脱尾... 【目的】:人类辅助生殖技术中,低受精率的发生机理及辅助激活提高受精率的安全性尚不清楚,缺乏激活力减弱的精子模型是其中一个主要研究障碍。本研究拟探索减弱小鼠精子激活力的新技术。【方法】首先,分别对精子进行化学破膜、机械脱尾及其联合操作于37℃孵育12 h,比较各操作对显微授精后的受精率的影响;然后进一步结合时间因素,观察处理时间与精子激活力减弱程度的联系。同时,对操作后的胚胎早期发育的影响也进行了相应观察。【结果】①化学破膜法与机械脱尾法对精子破膜并温育后,均能有效降低精子受精率;②相对于正常的精子,对小鼠精子进行吹打机械脱尾,37℃下温育2、4、8、12 h后,受精率和卵裂率均出现程度逐步增加的显著降低(P<0.01);③与对照相比,以吹打机械脱尾并37℃下温育后的精子进行显微授精后,其受精卵的囊胚率和孵出率也显著降低(P<0.001)。【结论】将小鼠精子机械脱尾并在37℃下温育,精子激活力随温育时间增加而显著降低,同时其胚胎发育能力下降。本研究初步探索了程度可控的降低精子受精激活力的新技术,其安全性及导致精子激活力下降的机制尚需进一步研究。 展开更多
关键词 精子激活力 卵胞浆内单精子显微注射 卵子激活 受精率 小鼠
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一种非Piezo依赖的高卵子存活率小鼠显微授精技术 被引量:4
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作者 苗聪秀 燕志光 +4 位作者 杨红梅 梁红星 于莎 匡延平 吕祁峰 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1020-1023,共4页
目的对已建立的非Piezo依赖的小鼠显微授精技术作进一步改良,以获得更高的卵子存活率。方法将卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术中对卵子深吸持后直接深穿刺(一步法非Piezo-ICSI组)的步骤分成两步进行(两步法非Piezo-ICSI组):先浅吸持... 目的对已建立的非Piezo依赖的小鼠显微授精技术作进一步改良,以获得更高的卵子存活率。方法将卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)技术中对卵子深吸持后直接深穿刺(一步法非Piezo-ICSI组)的步骤分成两步进行(两步法非Piezo-ICSI组):先浅吸持后浅穿刺,再进一步深吸持后深穿刺;另以孤雌激活发育的卵子作为卵子质量对照组。比较两步法非Piezo-ICSI组与一步法非Piezo-ICSI组卵子的存活率、原核出现率和卵裂率。结果两步法非Piezo-ICSI组的卵子存活率(92.2%)显著高于一步法非Piezo-ICSI组(83.7%)(P<0.01);而原核出现率和卵裂率与一步法非Piezo-ICSI组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论小鼠卵子胞膜在被新型持卵管深吸持时的变形造成了部分卵子胞膜变脆,两步法吸持穿刺在深吸持前进行了穿刺,避免了脆性敏感时的穿刺,有利于卵子存活。 展开更多
关键词 卵胞浆内单精子显微注射 卵子 卵胞膜 穿刺 存活率 小鼠
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TSA和VPA处理对食蟹猴-猪异种体细胞核移植胚胎早期发育的影响 被引量:3
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作者 秦祖兴 黄高波 +3 位作者 罗军 宁淑芳 卢晟盛 卢克焕 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期342-347,共6页
食蟹猴-猪异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,iSCNT)研究旨在由iSCNT胚胎建立具有与人类相似遗传背景的胚胎干细胞(ESCs),作为医学和基础科学研究的实验材料。文章探讨了两种组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(HDACi)T... 食蟹猴-猪异种体细胞核移植(Interspecies somatic cell nuclear transfer,iSCNT)研究旨在由iSCNT胚胎建立具有与人类相似遗传背景的胚胎干细胞(ESCs),作为医学和基础科学研究的实验材料。文章探讨了两种组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(HDACi)Trichostatin A(TSA)和Valproic acid(VPA)处理浓度、时间与培养液(PZM-3和HECM-10)组合对食蟹猴-猪iSCNT胚胎早期发育的影响。结果表明,在PZM-3中添加10 nmol/L TSA处理48 h组的囊胚率显著高于对照组(22.78%vs 9.86%,P<0.05)。但是,不管在PZM-3或是HECM-10中,添加2~10mmol/L VPA处理均不能提高iSCNT胚胎早期发育能力。文章证明了TSA处理可以提高食蟹猴-猪iSCNT胚胎早期发育能力。 展开更多
关键词 组蛋白脱乙酰化酶抑制剂(HDACi) 食蟹猴 异种核移植 胚胎发育
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水牛Tle6基因表达模式分析及其多克隆抗体制备 被引量:2
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作者 陈东荣 黄星晨 +3 位作者 张俊俊 杨维菡 张明 付强 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1692-1700,共9页
【目的】明确水牛Tle6基因表达组织特异性及其在卵母细胞和早期胚胎中的表达模式,并通过构建原核表达载体诱导表达融合蛋白及免疫小鼠制备TLE6多克隆抗体,为进一步揭示Tle6基因在水牛生殖发育中的作用机制提供理论依据。【方法】采用RT-... 【目的】明确水牛Tle6基因表达组织特异性及其在卵母细胞和早期胚胎中的表达模式,并通过构建原核表达载体诱导表达融合蛋白及免疫小鼠制备TLE6多克隆抗体,为进一步揭示Tle6基因在水牛生殖发育中的作用机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR扩增水牛Tle6基因编码区(CDS)序列,经生物信息学分析后,分别以半定量PCR和实时荧光定量PCR检测分析水牛Tle6基因表达组织特异性及其在卵母细胞和早期胚胎中的表达模式。构建重组原核表达载体,以IPTG诱导表达的融合蛋白免疫小鼠制备TLE6多克隆抗体,再利用TLE6多克隆抗体检验TLE6蛋白在水牛不同组织及卵母细胞和早期胚胎中的表达情况。【结果】水牛Tle6基因CDS序列全长1731 bp,编码576个氨基酸残基,其编码蛋白分子量为64.09 kD,理论等电点(pI)为5.69,属于亲水性蛋白。Tle6基因仅在水牛的卵母细胞中特异性表达。重组原核表达载体pET-32a-Tle6转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导6 h,融合蛋白TLE6的表达量最高,且以可溶性蛋白和包涵体2种形式进行表达;以纯化的融合蛋白TLE6免疫小鼠成功制备获得TLE6多克隆抗体,其抗体效价为1∶64000,能与融合蛋白TLE6及水牛卵母细胞发生特异性反应,即具有很强的特异性。【结论】Tle6基因仅在水牛卵母细胞中特异性表达,而在其他组织中未见表达。不同于其他MEGs的表达模式,Tle6基因在水牛卵母细胞及胚胎早期发育过程中呈特异性持续表达,可能在水牛卵母细胞成熟及附植前的胚胎发育过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 水牛 Tle6基因 卵母细胞 胚胎 多克隆抗体 母源效应基因
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Roscovitine同期化供核细胞对猴—猪异种核移植胚胎发育的影响
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作者 许常龙 秦祖兴 +8 位作者 梁明明 胡林林 罗茜 崔静辉 罗军 左二伟 许惠艳 卢晟盛 卢克焕 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1722-1726,共5页
【目的】探讨Roscovitine同期化供核细胞对食蟹猴—猪异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为提高灵长类的核移植效率奠定基础。【方法】活体采集4岁雄性食蟹猴的耳组织,经组织块培养获得纯化的食蟹猴耳成纤维细胞,细胞经固定、染色后... 【目的】探讨Roscovitine同期化供核细胞对食蟹猴—猪异种体细胞核移植胚胎体外发育的影响,为提高灵长类的核移植效率奠定基础。【方法】活体采集4岁雄性食蟹猴的耳组织,经组织块培养获得纯化的食蟹猴耳成纤维细胞,细胞经固定、染色后用流式细胞仪分析细胞周期分布。以不同同期化方法处理的食蟹猴耳纤维细胞为供体细胞,以体外成熟、去核的猪卵母细胞为受体细胞,利用电融合法构建食蟹猴—猪异种核移植胚胎,观察异种核移植重构胚胎的体外发育情况。【结果】以15μmol/L Roscovitine处理食蟹猴耳成纤维细胞24、48、72 h获得的G0/G1期细胞比率分别为76.51%、89.69%和90.49%,其中处理48和72 h的G0/G1期细胞比率显著高于对照组(P<0.05)。血清饥饿、接触抑制72 h同期化获得的G0/G1期细胞比率分别为91.12%和90.46%。Roscovitine同期化处理食蟹猴耳成纤维细胞48 h可有效提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率(15.05%),显著高于血清饥饿同期化处理和接触抑制同期化处理的效果(P<0.05)。【结论】Roscovitine可有效同期化食蟹猴耳成纤维细胞在G0/G1期,最终提高食蟹猴—猪异种核移植重构胚胎的囊胚形成率。 展开更多
关键词 食蟹猴 异种核移植 细胞周期 同期化 胚胎发育
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