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miR-30c-5p对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及其机制
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作者 赵斌 杨金叶 +8 位作者 李支尧 毕城伟 杨李波 施致裕 李心 张建朋 施远龙 杨勇 张国颖 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1632-1643,共12页
目的:探讨微小RNA(miR)-30c-5p对人前列腺癌细胞(LNCap)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:LNCap细胞根据转染质粒不同分为LNCap组(无转染质粒)、miR-30c-5p mimic组(转染miR-30c-5p mimic)、mimic NC组(转染miR-30c-5p ... 目的:探讨微小RNA(miR)-30c-5p对人前列腺癌细胞(LNCap)增殖、迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的机制。方法:LNCap细胞根据转染质粒不同分为LNCap组(无转染质粒)、miR-30c-5p mimic组(转染miR-30c-5p mimic)、mimic NC组(转染miR-30c-5p mimic NC)、sh-DNA损伤诱导转录因子4(DDIT4)组(转染sh-DDIT4)、sh-NC组(转染sh-DDIT4 NC)、miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-NC组(共转染miR-30c-5p mimic和pc DNA3.1-DDIT4空载质粒)和miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组(共转染miR-30c-5pmimic和pc-DNA3.1-DDIT4过表达质粒),RWPE-1细胞正常培养。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞中miR-30c-5p和DDIT4mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中DDIT4蛋白表达水平,CCK-8法检测各组LNCap细胞增殖率,Transwell小室实验检测各组LNCap细胞侵袭细胞数,划痕实验检测各组LNCap细胞划痕愈合率,双荧光素酶报告基因实验验证miR-30c-5p与DDIT4的靶向关系。体内裸鼠成瘤实验,18只雄性BALB/c裸鼠随机分为空白组、agomiR-NC组(转染agomiR-30c-5p NC)和agomiR-30c-5p组(转染agomiR-30c-5p),每组6只。agomiR-NC组和agomiR-30c-5p组裸鼠皮下注射LNCap细胞,空白组裸鼠注射等量生理盐水,检测各组小鼠肿瘤体积。HE染色观察各组小鼠前列腺癌组织形态表现,RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测各组小鼠前列腺癌组织中miR-30c-5p和DDIT4 mRNA表达水平及DDIT4蛋白荧光强度。结果:体外前列腺癌细胞实验,与人正常前列腺上皮RWPE-1细胞比较,前列腺癌LNCap细胞中miR-30c-5p表达水平明显降低(P<0.01),DDIT4 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);转染48 h后,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞中miR-30c-5p表达水平明显升高(P<0.01)。与LNCap组和sh-NC组比较,sh-DDIT4组LNCap细胞中DDIT4 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞中miR-30c-5p表达水平明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞中DDIT4 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);与miR-30c-5pmimic组和miR-30c-5pmimic+pcDNA3.1NC组比较,miR-30c-5pmimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞中DDIT4蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。CCK-8法检测,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞增殖率明显降低(P<0.01);与LNCap组和sh-NC组比较,sh-DDIT4组LNCap细胞增殖率明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5pmimic+pcDNA3.1NC组比较,miR-30c-5pmimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞增殖率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与LNCap组和sh-NC组比较,sh-DDIT4组LNCap细胞侵袭细胞数明显减少(P<0.01);与miR-30c-5pmimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组LNCap细胞侵袭细胞数明显增加(P<0.01)。划痕实验检测,与LNCap组和mimic NC组比较,miR-30c-5p mimic组LNCap细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01);与LNCap组和sh-NC组比较,sh-DDIT4组细胞划痕愈合率明显降低(P<0.01);与miR-30c-5p mimic组和miR-30c-5p mimic+pcDNA3.1 NC组比较,miR-30c-5p mimic+pc-DNA3.1-DDIT4组细胞划痕愈合率明显升高(P<0.01)。双荧光素酶实验检测,与共转染WT-DDIT4和mimic NC的LNCap细胞比较,共转染WT-DDIT4和miR-30c-5p mimic的LNCap细胞中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。体内裸鼠成瘤实验,细胞注射后第3、6、9、12和15天,与空白组和agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组裸鼠肿瘤体积明显减小(P<0.05)。HE染色观察,空白组和agomiR-NC组小鼠前列腺癌组织中细胞核增大,核仁突出且畸形;agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织部分区域细胞排列整齐,细胞核恢复正常形态。RT-qPCR法和免疫荧光染色法检测,与agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织中miR-30c-5p表达水平明显升高(P<0.01);与空白组和agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织中DDIT4 mRNA表达水平明显降低(P<0.01);DDIT4蛋白主要在细胞质表达,与空白组和agomiR-NC组比较,agomiR-30c-5p组小鼠前列腺癌组织中DDIT4蛋白荧光强度明显降低(P<0.01)。结论:miR-30c-5p在前列腺癌LNCap细胞中表达水平明显降低,其可通过靶向下调DDIT4抑制前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,从而参与前列腺癌的发生发展。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 微小RNA-30c-5p DNA损伤诱导转录因子4 细胞增殖 细胞迁移
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