目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复心肌损伤的机制。方法于2015年3月—2016年12月,选取60只健康4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,分离BMSCs,采用流式细胞检测CD29、CD44、CD11b、干细胞抗原1(SCA-1)表达率。通过慢病毒载...目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复心肌损伤的机制。方法于2015年3月—2016年12月,选取60只健康4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,分离BMSCs,采用流式细胞检测CD29、CD44、CD11b、干细胞抗原1(SCA-1)表达率。通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4-BMSCs,并加入基因开启剂多西环素(DOX),采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染72 h后过表达GATA-4-BMSCs中GATA-4 m RNA表达水平,并以未转染为阴性对照组。建立小鼠心肌梗死模型,经尾静脉注射BMSCs(n=3)、空载体-BMSCs(n=3)、过表达GATA-4-BMSCs(n=3)500μl,并将心肌梗死未处理组(n=3)及正常小鼠(n=3)同时给予喂食含有DOX的液体作为对照1组及对照2组。通过心脏彩超检测给予干预措施72 h后心功能改善情况。选取正常小鼠正常喂养(n=3)作为对照3组。采用小动物活体成像检测心脏区域荧光强度,番茄凝集素评估心肌梗死局部心肌血管数量,免疫组化检测心肌梗死局部C-kit阳性细胞数量。结果小鼠BMSCs CD29表达率为98.0%,CD44表达率为100.0%,CD11b表达率为0.1%,SCA-1表达率为99.5%。过表达GATA-4-BMSCs组GATA-4 m RNA表达水平为(78.17±1.32),高于阴性对照组的(0.57±0.34)(t=2.576,P<0.05)。各组小鼠射血分数(EF)、环比收缩(FS)变化值比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组EF、FS改善幅度高于对照1组、对照2组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P<0.05)。各组小鼠心脏区域荧光强度、心肌血管数量、C-kit阳性细胞数量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组心脏区域荧光强度、C-kit阳性细胞数量多于对照1组、对照2组、对照3组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P<0.05),心肌血管数量多于BMSCs组和空载体-BMSCs组。结论过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强"归巢"效应、促进心肌梗死局部血管增生、有效动员C-kit阳性细胞修复心肌损伤。展开更多
文摘目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)修复心肌损伤的机制。方法于2015年3月—2016年12月,选取60只健康4周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠,分离BMSCs,采用流式细胞检测CD29、CD44、CD11b、干细胞抗原1(SCA-1)表达率。通过慢病毒载体GV308携带GATA-4转染小鼠BMSCs,构建过表达GATA-4-BMSCs,并加入基因开启剂多西环素(DOX),采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测转染72 h后过表达GATA-4-BMSCs中GATA-4 m RNA表达水平,并以未转染为阴性对照组。建立小鼠心肌梗死模型,经尾静脉注射BMSCs(n=3)、空载体-BMSCs(n=3)、过表达GATA-4-BMSCs(n=3)500μl,并将心肌梗死未处理组(n=3)及正常小鼠(n=3)同时给予喂食含有DOX的液体作为对照1组及对照2组。通过心脏彩超检测给予干预措施72 h后心功能改善情况。选取正常小鼠正常喂养(n=3)作为对照3组。采用小动物活体成像检测心脏区域荧光强度,番茄凝集素评估心肌梗死局部心肌血管数量,免疫组化检测心肌梗死局部C-kit阳性细胞数量。结果小鼠BMSCs CD29表达率为98.0%,CD44表达率为100.0%,CD11b表达率为0.1%,SCA-1表达率为99.5%。过表达GATA-4-BMSCs组GATA-4 m RNA表达水平为(78.17±1.32),高于阴性对照组的(0.57±0.34)(t=2.576,P<0.05)。各组小鼠射血分数(EF)、环比收缩(FS)变化值比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组EF、FS改善幅度高于对照1组、对照2组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P<0.05)。各组小鼠心脏区域荧光强度、心肌血管数量、C-kit阳性细胞数量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中过表达GATA-4-BMSCs组心脏区域荧光强度、C-kit阳性细胞数量多于对照1组、对照2组、对照3组、BMSCs组和空载体-BMSCs组(P<0.05),心肌血管数量多于BMSCs组和空载体-BMSCs组。结论过表达GATA-4-BMSCs可以通过增强"归巢"效应、促进心肌梗死局部血管增生、有效动员C-kit阳性细胞修复心肌损伤。
