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题名重组猪干扰素α发酵纯化与抗病毒活性测定
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作者
陈红艳
施忠芬
胡媛媛
法林荣
张涛
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机构
云南农业职业技术学院
云南省昆明市晋宁区农业农村局
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出处
《青海畜牧兽医杂志》
2024年第3期10-15,共6页
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基金
云南省教育厅科学研究基金项目资金资助(2020J1322)。
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文摘
本研究根据大肠杆菌的密码子偏好性,对UniProt数据库中的猪干扰素α序列(编号:P49879)进行优化,合成了相应的基因片段,并构建了pET-28a-INF-α原核表达载体。将重组载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经过20 L发酵罐培养24 h,在OD 600为108时收获细胞。表达的猪干扰素α主要以包涵体的形式存在,经过变性、复性、镍亲和纯化与酶切等步骤,得到了无标签的猪干扰素α蛋白。SDS-PAGE电泳显示,该蛋白的分子量约为19 kDa,纯度高达95%。细胞病变抑制法测定表明,该蛋白的抗病毒活性为1.28×10^(7 )IU/mg。本研究成功获得了高纯度、高活性的猪干扰素α蛋白,为进一步推进蛋白药物在临床上的应用奠定了基础,为进一步重组蛋白工业化生产提供了理论依据。
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关键词
猪干扰素α
表达
发酵
纯化
抗病毒活性
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Keywords
Porcine interferon alpha
Expression
Fermentation
Purification
Antiviral activity
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分类号
S852.65
[农业科学—基础兽医学]
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