-
题名番茄环纹斑点病毒Gn蛋白的原核表达及多抗血清制备
被引量：2
- 1
-
-
作者
郑宽瑜
尚卫娜
张洁
郑雪
董家红
-
机构
云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所云南省农业生物技术重点实验室农业部西南作物基因资源与种质创新重点实验室
浙江大学生命科学研究院
-
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第9期179-183,共5页
-
基金
国家自然科学基金项目(31660508
31371919
31060237)
-
文摘
通过生物信息学预测,番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,TZSV)Gn蛋白为跨膜蛋白,有3个跨膜结构域,抗原表位预测发现非跨膜区包含有较高的抗原指数区域,因此选择Gn蛋白的非跨膜区进行原核表达及多抗血清制备。用特异性引物,通过RT-PCR从感染TZSV的番茄中扩增出部分Gn基因片段,将获得的片段构建到原核表达载体pET-30a中,获得原核表达载体pET-30a-Gn,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析显示,高效诱导表达了40 kD融合蛋白。用回收纯化的融合蛋白免疫家兔,获得多抗血清。间接ELISA测定多抗血清的效价为1/16 384。利用制备好的抗血清对感染TZSV的病样进行Western blotting检测,能检测到特异性条带。结果表明该抗血清特异性良好,可用于TZSV Gn相关的免疫反应实验。
-
关键词
番茄环纹斑点病毒
Gn蛋白
原核表达
抗血清
-
Keywords
tomato zonate spot virus
Gn protein
prokaryotic expression
antiserum
-
分类号
S432.41
[农业科学—植物病理学]
-
