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基于RNA-seq技术对重度子痫前期孕妇胎盘组织差异性表达circRNA的研究 被引量:3
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作者 周芝熠 李晓娟 +1 位作者 蒋国庆 钱源 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第5期804-807,共4页
研究环状RNA在重度子痫前期患者胎盘组织与正常胎盘组织中表达的差异性。选取重度子痫前期(sPE)患者、正常妊娠孕妇的胎盘组织各3例,应用高通量测序技术检测两组样本中环状RNA的表达情况,使用miRanda软件对筛选出的环状RNA进行miRNA靶... 研究环状RNA在重度子痫前期患者胎盘组织与正常胎盘组织中表达的差异性。选取重度子痫前期(sPE)患者、正常妊娠孕妇的胎盘组织各3例,应用高通量测序技术检测两组样本中环状RNA的表达情况,使用miRanda软件对筛选出的环状RNA进行miRNA靶基因预测。有3007个环状RNA在实验组与对照组中均有表达,其中差异表达的环状RNA共有89个,包含44个上调基因和45个下调基因。多数筛选出的差异表达环状RNA具有has-let-7、miR-100、miR-101、miR-103家族成员的结合位点。研究表明胎盘组织中环状RNA的表达失调可能参与了sPE的发生发展过程。 展开更多
关键词 环状RNA 高通量测序技术 重度子痫前期 胎盘 差异表达
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ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力 被引量:3
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作者 何建萍 李晓娟 +4 位作者 吕梦欣 王珏 唐健 罗胜军 钱源 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1720-1725,共6页
目的探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化(EMT)过程的影响。方法将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westen boltting(WB)实... 目的探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化(EMT)过程的影响。方法将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westen boltting(WB)实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过WB实验检测各组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白:Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果ALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著(P<0.05);shALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著(P<0.05)。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。 展开更多
关键词 ALKBH同源蛋白5 子痫前期 上皮-间质转化 细胞迁移 细胞侵袭
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HOTAIR过表达慢病毒载体的构建及稳定细胞株的建立 被引量:3
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作者 李晓娟 王珏 +2 位作者 何建萍 吕梦欣 钱源 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第5期683-687,共5页
目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过... 目的构建稳定过表达HOTAIR的人滋养细胞HTR-8/SVneo细胞系,并验证HOTAIR的表达。方法利用PCR技术扩增HOTAIR基因全长序列,并将其克隆入LV5载体中,构建LV5-HOTAIR载体,重组质粒经双酶切鉴定及测序验证成功后,转染人胚肾细胞293T,包装过表达病毒颗粒,制备并浓缩慢病毒颗粒。将构建好的过表达HOTAIR慢病毒载体感染HTR-8/SVneo细胞,采用嘌呤霉素筛选出HOTAIR稳定表达的细胞系,荧光显微镜观察绿色荧光表达;qRT-PCR验证HOTAIR表达。结果重组质粒酶切得到的条带与预期相符,过表达HOTAIR慢病毒载体中序列与目标序列一致。荧光显微镜下过表达HOTAIR组细胞有绿色荧光表达;qRT-PCR结果表明过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR表达是Control组的206.3倍(P<0.05),是NC组的232.8倍(P<0.05)。结论成功建立稳定过表达HOTAIR的HTR-8/SVneo细胞,且过表达HOTAIR的HTR-8/Svneo稳定细胞株中HOTAIR mRNA表达水平明显升高。 展开更多
关键词 HOTAIR 慢病毒载体 HTR-8/Svneo 子痫前期
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维生素D通过下调miR-21的表达促进人胎盘滋养细胞的迁移和侵袭 被引量:10
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作者 周芝熠 李晓娟 +2 位作者 蒋国庆 王珏 钱源 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期437-442,共6页
目的探讨维生素D对microRNA-21表达的调控作用以及对人胎盘滋养细胞迁移、侵袭能力的影响。方法不同剂量维生素D刺激HTR-8/SVneo细胞24、48、72 h后,RT-qPCR检测microRNA-21表达情况;将miR-21 mimic、miR-21 mimic-nc、miR-21 inhibitor... 目的探讨维生素D对microRNA-21表达的调控作用以及对人胎盘滋养细胞迁移、侵袭能力的影响。方法不同剂量维生素D刺激HTR-8/SVneo细胞24、48、72 h后,RT-qPCR检测microRNA-21表达情况;将miR-21 mimic、miR-21 mimic-nc、miR-21 inhibitor和miR-21 inhibitor-nc分别转染至HTR-8/SVneo细胞,或将miR-21 mimic、miR-21 inhibitor联合维生素D共同刺激细胞,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,western blot检测E-cadherin、Fibronectin、MMP9的蛋白表达水平。结果维生素D刺激HTR-8/SVneo细胞后抑制了micoRNA-21的表达,且抑制作用呈浓度-时间依赖性增强。单独转染miR-21 mimic抑制HTR-8/SVneo细胞的迁移、侵袭能力,E-cadherin表达水平增加,Fibronectin、MMP9表达水平降低;联合维生素D共同刺激细胞则可以减弱该作用。单独转染miR-21 inhibitor促进了HTR-8/SVneo细胞的迁移、侵袭能力,E-cadherin表达水平降低,Fibronectin、MMP9表达水平增加;联合维生素D共同作用与单细胞独转染miR-21 inhibitor相比,细胞迁移、侵袭能力以及蛋白水平无明显改变。结论维生素D可能通过下调microRNA-21的表达来影响子痫前期发生发展。 展开更多
关键词 维生素D MIR-21 HTR-8/SVneo 迁移 人胎盘滋养细胞
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