红三七炮制工艺优化及其补血活性研究 被引量：1

1

作者 段嫏环 李起慧 +2 位作者 吕冬 汪勇 崔秀明 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期48-54,共7页

目的优化红三七炮制工艺,并评价其补血活性。方法在单因素试验基础上,以蒸制温度、蒸制时间、烘干温度、烘干时间为影响因素,三七皂苷R1,人参皂苷Rg_(1)、Rb_(1)、Rk_(3)、Rh_(4),20(R)-人参皂苷Rg_(3)总含量为评价指标,Box-Behnken响... 目的优化红三七炮制工艺,并评价其补血活性。方法在单因素试验基础上,以蒸制温度、蒸制时间、烘干温度、烘干时间为影响因素,三七皂苷R1,人参皂苷Rg_(1)、Rb_(1)、Rk_(3)、Rh_(4),20(R)-人参皂苷Rg_(3)总含量为评价指标,Box-Behnken响应面法优化炮制工艺。建立乙酰苯肼(APH)-环磷酰胺(CTX)联合诱导的小鼠贫血模型,比较红三七、熟三七补血活性差异。结果最佳条件为蒸制温度130℃,蒸制时间4 h,烘干温度60℃,烘干时间48 h,总皂苷含量为8.326%,RSD为0.087%。药理活性表明,不同炮制工艺对三七补血活性有影响,红三七的补血活性优于熟三七。结论该方法稳定可行,可用于红三七的规范生产。 展开更多

关键词 红三七 炮制工艺 Box-Behnken响应面法 产地趁鲜加工 补血活性

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三七病程相关蛋白基因PnPR1的表达特性以及功能分析 被引量：7

2

作者 张应鹏 陈虹均 +4 位作者 郑锂蕾 王自娥 崔秀明 葛锋 刘迪秋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2000-2007,共8页

该实验采用定量逆转录PCR(Quantitative reverse transcription-PCR)方法分析三七[Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen]病程相关蛋白(pathogensis related protein,PR)基因PnPR1的表达谱,并构建PnPR1的植物超表达载体,通过根癌农杆菌介导... 该实验采用定量逆转录PCR(Quantitative reverse transcription-PCR)方法分析三七[Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen]病程相关蛋白(pathogensis related protein,PR)基因PnPR1的表达谱,并构建PnPR1的植物超表达载体,通过根癌农杆菌介导转入烟草(Nicotiana tabacum)中过量表达。结果表明:(1)外源茉莉酸甲酯预处理三七根部,能显著提高茄腐镰刀菌(Fusarium solani)侵染过程中PnPR1基因的表达量。(2)4种信号分子茉莉酸甲酯、水杨酸、过氧化氢和乙烯利处理均能够不同程度地提高PnPR1基因在三七根中的表达水平,但3种信号分子抑制剂处理三七根部后PnPR1的表达量下调。(3)PnPR1在T_(2)代转基因烟草中稳定表达,并且转基因烟草株系对茄腐镰刀菌的抗性显著提高。研究认为,PnPR1基因在转录水平上响应茄腐镰刀菌的侵染,并受茉莉酸甲酯等信号分子的诱导,在烟草中过表达PnPR1基因可增强对茄腐镰刀菌的抗性,表明PnPR1是三七应对根腐病菌防卫反应中的抗病基因。 展开更多

关键词 三七 病程相关蛋白 过表达 抗性 茄腐镰刀菌

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R2R3-MYB转录因子PnMYB1调控三七皂苷生物合成 被引量：5

3

作者 雷君 陈勤 +4 位作者 邓兵 张金渝 刘迪秋 崔秀明 葛锋 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期74-83,共10页

旨在明确PnMYB1转录因子对三七皂苷生物合成具有调控作用。利用RACE技术获得PnMYB1基因全长,对PnMYB1进行系统发育树分析;构建PnMYB1植物过表达载体并侵染三七细胞,检测转基因三七细胞中人参皂苷R1、Rg1、Re、Rb1和Rd的含量;将PnMYB1与... 旨在明确PnMYB1转录因子对三七皂苷生物合成具有调控作用。利用RACE技术获得PnMYB1基因全长,对PnMYB1进行系统发育树分析;构建PnMYB1植物过表达载体并侵染三七细胞,检测转基因三七细胞中人参皂苷R1、Rg1、Re、Rb1和Rd的含量;将PnMYB1与鲨烯合酶(PnSS)、鲨烯环氧化酶(PnSE)、达玛烯二醇合成酶(PnDS)和环阿屯醇合成酶(PnCAS)等参与三七皂苷生物合成途径的关键酶的基因启动子共转染烟草叶片,进行瞬时表达分析,利用GUS表达系统验证PnMYB1转录因子能否与三七皂苷生物合成关键酶基因的启动子相互作用。结果显示,PnMYB1转录因子属于R2R3-MYB家族;在过表达PnMYB1的三七细胞中,五种重要三萜皂苷在转基因细胞中均有不同程度的增加,进一步分析证明PnMYB1转录因子通过激活PnSE和PnDS的启动子,促使PnSE和PnDS的表达水平显著升高,进而实现对三七皂苷生物合成的调控。PnMYB1转录因子可以同时调控三七皂苷生物合成途径中两个关键酶基因的表达,从而影响三七皂苷的生物合成。 展开更多

关键词 三七 皂苷 转录因子 三萜类化合物

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三七根腐病菌尖孢镰刀菌的Real-time PCR检测方法 被引量：8

4

作者 李欣 崔秀明 +3 位作者 刘迪秋 孙恬 郭爱玲 陈军 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第S01期324-330,共7页

为了建立一种准确、快速检测三七根腐病病原真菌尖孢镰刀菌的实时荧光定量PCR方法,基于尖孢镰刀菌脂肪酸ω-羟化酶基因设计了实时荧光定量PCR的特异性引物对Fo-QF和Fo-QR,制备了该基因的重组质粒标准品,建立了尖孢镰刀菌的SYBR GreenⅠ... 为了建立一种准确、快速检测三七根腐病病原真菌尖孢镰刀菌的实时荧光定量PCR方法,基于尖孢镰刀菌脂肪酸ω-羟化酶基因设计了实时荧光定量PCR的特异性引物对Fo-QF和Fo-QR,制备了该基因的重组质粒标准品,建立了尖孢镰刀菌的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。从三七种植区采集到14个具有根腐病、黑斑病典型症状的三七病株及三七种植土壤样品,并提取了这些样品的总DNA,运用本研究建立的荧光定量PCR方法进行了检测。结果显示,本研究建立的实时荧光定量PCR检测方法特异性强,脂肪酸ω-羟化酶基因只以尖孢镰刀菌DNA为模板扩增出特异的PCR产物。此外,该方法灵敏度高,检测模板浓度可低至0.35 pg/μL。构建的荧光定量PCR标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线的吸收峰单一,扩增效率好。利用该定量检测体系,能从几种不同的三七病株中快速检测出携带尖孢镰刀菌的根腐病病株,从而达到准确诊断的目的。本方法不仅能明确三七种植土壤以及三七病株中尖孢镰刀菌数量的动态变化,并且可以为三七土壤处理、根腐病的早期诊断和动态监测以及带病三七种子、种苗的快速分子检测提供技术支持。 展开更多

关键词 三七根腐病 尖孢镰刀菌 分子检测 实时荧光定量PCR 快速检测

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三七多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的功能分析 被引量：3

5

作者 关瑞攀 白智伟 +3 位作者 王倩 唐笔锋 崔秀明 刘迪秋 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期65-71,共7页

多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是植物抗病防御系统的重要组成部分。在前期研究中,从三七中分离得到一个编码PGIP蛋白的基因PnPGIP,PnPGIP在转录水平响应三七根腐病菌茄腐镰刀菌的侵染。为深入分析PnPGIP的功能,构建PnPGIP的原核表达载... 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)是植物抗病防御系统的重要组成部分。在前期研究中,从三七中分离得到一个编码PGIP蛋白的基因PnPGIP,PnPGIP在转录水平响应三七根腐病菌茄腐镰刀菌的侵染。为深入分析PnPGIP的功能,构建PnPGIP的原核表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行大量表达,纯化获得PnPGIP的重组蛋白,并进行体外平板抑菌试验;构建PnPGIP的植物超表达载体,通过根癌农杆菌介导产生了PnPGIP转基因烟草,分析T2转基因烟草离体叶片对茄腐镰刀菌的抗性。PnPGIP原核重组蛋白对茄腐镰刀菌、胶孢炭疽菌、核盘菌和轮枝状镰刀菌的菌丝生长具有很强的抑制作用,并且随着蛋白量的增加,抑制活性也逐渐增强。q RT-PCR分析结果显示,PnPGIP在T2转基因烟草中大量表达。此外,与野生型烟草相比,转基因烟草对茄腐镰刀菌的抗性显著增强。PnPGIP是三七中参与茄腐镰刀菌防御反应的重要抗病基因。 展开更多

关键词 三七 PGIP 抗性 茄腐镰刀菌 功能验证

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三七HPLC指纹图谱及5种成分测定 被引量：16

6

作者 李宁 高小惠 +5 位作者 王子幼 龚云麒 刘军锋 杨兆祥 崔秀明 王峥涛 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1232-1237,共6页

目的 建立三七HPLC指纹图谱,并测定5种成分的含有量.方法 三七70%甲醇提取物的分析采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.5 mL/min;柱温25℃;检测波长203 nm.结果 15批样品指纹图... 目的 建立三七HPLC指纹图谱,并测定5种成分的含有量.方法 三七70%甲醇提取物的分析采用Waters XBridge C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量1.5 mL/min;柱温25℃;检测波长203 nm.结果 15批样品指纹图谱中有5个共有峰,相似度均大于0.99.三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd分别在0.000 76~0.567 64(r=0.9999)、0.002 69~2.017 43 (r=0.9998)、0.000 38~0.283 82 (r=1.000 0)、0.002 83~2.12483 (r=0.999 8)、0.000 78~0.582 98 mg/mL (r=0.999 8)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为101.78%、97.22%、102.14%、98.96%、101.73%,RSD分别为1.58%、1.31%、2.17%、1.55%、1.80%.结论 该方法简便、快速、准确,可用于三七的质量控制. 展开更多

关键词 三七 指纹图谱 三七皂苷R1 人参皂苷RG1 人参皂苷RE 人参皂苷RB1 人参皂苷RD HPLC

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基于功效成分−药效评价的三七新型饮片质量分析 被引量：1

7

作者 吕冬 肖素芸 +3 位作者 罗才琴 李起慧 曲媛 崔秀明 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期638-647,共10页

【目的】通过考察干燥方式引起的成分及药效差异,研究新型饮片鲜三七快干粉、冻干三七粉与传统饮片三七热风干燥粉的质量及生物学效应,寻找内在成分的潜在药效活性,为新型三七饮片开发提供科学依据。【方法】采用高效液相色谱法(HPLC)... 【目的】通过考察干燥方式引起的成分及药效差异,研究新型饮片鲜三七快干粉、冻干三七粉与传统饮片三七热风干燥粉的质量及生物学效应,寻找内在成分的潜在药效活性,为新型三七饮片开发提供科学依据。【方法】采用高效液相色谱法(HPLC)和紫外分光光度法等分析3种干燥饮片单体皂苷、总多糖、总黄酮、总酚和总蛋白含量;通过建立相关药效模型研究3种不同干燥饮片的药理功效差异,对其结果进行成分—药效相关性分析,根据预测结果进行药效验证试验。【结果】与热风干燥粉相比,鲜三七快干粉人参皂苷Rg_(1)和Rb_(1)、总多糖以及总酚含量分别提高4.02%、4.48%、278.40%和29.33%;冻干三七粉Rg_(1)和Rb_(1)、5种皂苷之和、总多糖以及总蛋白含量分别提高16.33%、12.17%、10.03%、49.76%和22.85%。经成分—药效相关性分析发现:镇痛扭体次数与总多糖含量显著负相关(P<0.05);凝血酶原时间(PT)与Rg_(1)含量极显著正相关(P<0.01)、与Rb1含量显著正相关(P<0.05);凝血酶时间(TT)与人参皂苷Re含量显著正相关(P<0.05);镇痛潜伏时间与Rg_(1)含量极显著正相关(P<0.01)、与总蛋白含量显著正相关(P<0.05)。药效验证试验表明:总多糖与总蛋白具有抗凝和镇痛活性。【结论】冻干三七粉与鲜三七快干粉的成分和药效均有所提高,三七总多糖和总蛋白具有抗凝和镇痛功效,Rg_(1)、Re和Rg_(1)以及Rb_(1)分别在镇痛活性、延长TT和延长PT中起主导作用。 展开更多

关键词 冻干三七粉 鲜三七快干粉 热风干燥粉 功效成分 药效评价

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三七内切-β-1,4-葡聚糖酶基因PnCel1的表达及功能分析

8

作者 苏琳琳 王瀚林 +2 位作者 甘昆发 陈晓华 刘迪秋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期732-741,共10页

内切-β-1,4-葡聚糖酶(endo-1,4-β-glucanases,EGases)广泛参与植物细胞壁的编辑,在组织伸长、果实成熟和脱落等过程中起重要作用。该研究采用RT-PCR方法,从三七(Panax notoginseng)中克隆了1个EGases基因(PnCel1),并对其进行表达和功... 内切-β-1,4-葡聚糖酶(endo-1,4-β-glucanases,EGases)广泛参与植物细胞壁的编辑,在组织伸长、果实成熟和脱落等过程中起重要作用。该研究采用RT-PCR方法,从三七(Panax notoginseng)中克隆了1个EGases基因(PnCel1),并对其进行表达和功能分析。结果显示:(1)外源茉莉酸甲酯、水杨酸、赤霉素、脱落酸和乙烯利处理显著诱导PnCel1的表达,而根腐病菌茄腐镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)以及交链格孢(Alternaria alternata)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)侵染三七后显著抑制PnCel1的表达。(2)亚细胞定位分析表明,PnCel1-GFP融合蛋白定位于洋葱表皮细胞的细胞壁中。(3)采用染色体步移技术克隆出PnCel1的启动子序列[(-1)~(-828)bp],进而成功构建PnCel1启动子驱动的β-葡萄糖醛酸酶植物表达载体(pBI121-PPnCel1-GUS)并转入烟草(Nicotiana tabacum L.),经PCR筛选鉴定获得阳性转基因烟草7株。(4)GUS活性检测结果表明,5种植物激素能诱导PnCel1的启动子活性,但茄腐镰刀菌等4种病原菌侵染明显降低了PnCel1启动子的转录活性,且PnCel1启动子受三七WRKY转录因子PnWRKY5/9/12/15/27的负调控。(5)PnCel1过表达转基因烟草与野生型烟草相比,对茄腐镰刀菌的易感性增加,木质素含量降低,表明PnCel1可能参与改变细胞壁的结构。研究表明,植物激素能上调三七根中PnCel1的表达,而病原菌侵染降低了PnCel1的表达水平,并抑制PPnCel1的活性,推测三七PnCel1可能通过改变细胞壁结构而增加三七对根腐病菌的易感性。 展开更多

关键词 三七 茄腐镰刀菌 内切-β-1 4-葡聚糖酶 易感性

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基于自适应模糊PID的风速控制系统设计 被引量：7

9

作者 伞红军 陈浩 +3 位作者 陈明方 张道义 刘金鑫 臧家秀 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期153-158,共6页

针对传统PID风速调控响应速度慢、调节效率低的问题,设计了一种自适应模糊PID控制策略,用于风机的恒风速调控。所设计的控制系统由数据采集、模糊推理、指令执行以及数据反馈四部分组成。通过搭建的试验平台,对传统PID控制方法及自适应... 针对传统PID风速调控响应速度慢、调节效率低的问题,设计了一种自适应模糊PID控制策略,用于风机的恒风速调控。所设计的控制系统由数据采集、模糊推理、指令执行以及数据反馈四部分组成。通过搭建的试验平台,对传统PID控制方法及自适应模糊PID控制方法进行了对比。实验结果表明:自适应模糊PID控制系统的风速调节速度快、效率高,调节效果优于传统PID。 展开更多

关键词 模糊PID 模糊推理 风机 风速调控

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RNAi介导珠子参PjCAS基因沉默对皂苷合成的影响 被引量：3

10

作者 江敏 姜森 +3 位作者 曲媛 崔秀明 刘迪秋 葛锋 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1816-1823,共8页

该研究利用Gateway技术构建珠子参环阿屯醇合成酶基因(Panax japonicus cycloartenol synthase,PjCAS)的RNAi表达载体,利用农杆菌介导转化在珠子参细胞中成功实现了PjCAS的RNA干扰;采用实时荧光定量PCR分析珠子参皂苷生物合成途径中关... 该研究利用Gateway技术构建珠子参环阿屯醇合成酶基因(Panax japonicus cycloartenol synthase,PjCAS)的RNAi表达载体,利用农杆菌介导转化在珠子参细胞中成功实现了PjCAS的RNA干扰;采用实时荧光定量PCR分析珠子参皂苷生物合成途径中关键酶基因的表达情况,同时检测转基因细胞中皂苷和植物甾醇含量的变化,探讨PjCAS基因对珠子参皂苷合成的调控作用。结果表明:(1)成功获得PjCAS基因的RNAi片段,并成功构建了PjCAS基因RNAi载体pHellsgate-PjCAS。(2)经农杆菌遗传转化,获得6株实现PjCAS基因RNA干扰的转基因阳性细胞系。(3)与普通细胞系相比,转基因细胞系中PjCAS基因的表达量大约下降了85%,同时与珠子参皂苷合成直接相关的关键酶基因PjDS、PjAS表达量最高分别上调了90%和150%。(4)转基因细胞系中6种单体皂苷的含量均显著高于对照组,其中达玛烷型单体皂苷Re、Rb1、Rd和齐墩果烷型单体皂苷R0、IV、IVa的平均含量比普通珠子参细胞系分别提高了28%、49%、40%、36%、59%、50%。说明珠子参皂苷含量的变化受PjCAS基因的间接调控。(5)6株转基因细胞系中植物甾醇含量较对照显著降低了53%~73%。研究发现,沉默PjCAS基因可促进珠子参皂苷合成的关键酶基因PjDS、PjAS显著上调表达,并提高转PjCAS基因细胞系中单体皂苷的含量,从而促进了珠子参皂苷合成量的显著增加,证明通过抑制植物甾醇合成通路关键基因PjCAS的表达可以有效降低植物甾醇合成支路的代谢通量,使更多的代谢流朝着珠子参皂苷合成方向流动,最终促进了珠子参皂苷的生物合成。 展开更多

关键词 珠子参 环阿屯醇合成酶 三萜皂苷 RNA干扰

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PjFPS和Pjβ-AS双基因协同作用对珠子参皂苷生物合成的影响 被引量：1

11

作者 陈勤 刘美佳 +3 位作者 刘迪秋 曲媛 崔秀明 葛锋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期428-436,共9页

法尼基焦磷酸合酶(PjFPS)和β-香树脂醇合酶(Pjβ-AS)是珠子参皂苷(Panax japonicus saponins,PJS)生物合成途径中可能的关键酶。通过在珠子参(P.japonicus)细胞中同时过表达PjFPS和Pjβ-AS基因,探讨PjFPS和Pjβ-AS对PJS生物合成的协同... 法尼基焦磷酸合酶(PjFPS)和β-香树脂醇合酶(Pjβ-AS)是珠子参皂苷(Panax japonicus saponins,PJS)生物合成途径中可能的关键酶。通过在珠子参(P.japonicus)细胞中同时过表达PjFPS和Pjβ-AS基因,探讨PjFPS和Pjβ-AS对PJS生物合成的协同作用。结果表明,PjFPS和Pjβ-AS是PJS生物合成途径中的关键酶基因,对珠子参皂苷的生物合成具有调节作用。过表达PjFPS和Pjβ-AS的细胞系中,PJS合成途径相关的多个关键酶基因的表达水平有不同程度的提高,且PJS的含量最高为普通细胞系的2.4倍。虽然单独过表达PjFPS也可增加PJS的合成,但双基因(PjFPS和Pjβ-AS)协同调控PJS合成的效果更好。 展开更多

关键词 三萜皂苷 生物合成 珠子参 法尼基焦磷酸合酶 β-香树脂醇合酶

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基于封闭矢量法和D-H法的四足机器人逆运动学分析 被引量：14

12

作者 李鹏飞 伞红军 +1 位作者 陈久朋 张道义 《科学技术与工程》 北大核心 2019年第4期161-165,共5页

为提高四足机器人的运动速度和仿生程度,设计一种新型的具有柔性腰的四足机器人,提出该柔性腰具有三个自由度,对该新型四足机器人进行自由度分析,并用螺旋理论来分析腰部的运动原理和验证自由度。运用封闭矢量法和DenavitHartenberg(D-H... 为提高四足机器人的运动速度和仿生程度,设计一种新型的具有柔性腰的四足机器人,提出该柔性腰具有三个自由度,对该新型四足机器人进行自由度分析,并用螺旋理论来分析腰部的运动原理和验证自由度。运用封闭矢量法和DenavitHartenberg(D-H)连杆坐标描述法求得柔性腰和单腿逆运动学分析,并用算例证明该算法的正确性。结果表明该算法计算和逻辑简单,便于理解和掌握。研究为该新型具有柔性腰的四足机器人的工作空间、速度、加速度、机构优化和系统控制等的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 柔性腰 自由度 封闭矢量法 D-H法

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