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鸭坦布苏病毒快速实时荧光RT-LAMP方法的建立及初步应用
被引量：
4
1
作者
王巧萍
粟柯衡
+4 位作者
元正菊
常志顺
张薇
张以芳
信爱国
《中国动物检疫》
CAS
2022年第5期103-109,共7页
为建立检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)的荧光逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法,根据DTMUV NS5基因保守序列设计1套特异性引物,对反应时间和温度进行优化,并评价该方法的...
为建立检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)的荧光逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法,根据DTMUV NS5基因保守序列设计1套特异性引物,对反应时间和温度进行优化,并评价该方法的特异性、敏感性、重复性和临床适用性。结果显示:建立的荧光RT-LAMP最优反应条件为65℃25 min;只特异性扩增DTMUV,而不扩增其他几种禽类病毒;最低检测限为4×10^(2)copies/μL,与qRT-PCR方法敏感性一致,是普通RT-PCR的100倍;批内和批间重复性高;应用该方法检测DTMUV不同剂量人工感染鸭肝脏样品,对接毒剂量为10^(3-7)TCID_(50)和10^(2-7)TCID_(50)组的阳性检出率均为100%,对接毒量10^(1.7)TCID_(50)组的阳性检出率为90%(9/10)。结果表明,本研究建立的荧光RT-LAMP检测方法特异性强、重复性好、敏感性高,可成为快速诊断DTMUV的方法之一。
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关键词
鸭坦布苏病毒
实时荧光
环介导等温扩增技术
NS5基因
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职称材料
鸭细小病毒实时荧光LAMP检测方法的建立与应用
被引量：
1
2
作者
王耕
田克恭
+4 位作者
张薇
许绍坤
粟柯衡
邓均华
张冲
《畜禽业》
2022年第3期6-8,共3页
鸭细小病毒(Duck parvovirus,MDPV)是细小病毒科依赖病毒属成员。为建立鸭细小病毒(MDPV)快速、便捷、准确、灵敏度高的实时荧光LAMP检测方法,针对鸭细小病毒基因组中相对保守的特异区域设计LAMP引物组,用灭活后的病毒血清样本直接扩增...
鸭细小病毒(Duck parvovirus,MDPV)是细小病毒科依赖病毒属成员。为建立鸭细小病毒(MDPV)快速、便捷、准确、灵敏度高的实时荧光LAMP检测方法,针对鸭细小病毒基因组中相对保守的特异区域设计LAMP引物组,用灭活后的病毒血清样本直接扩增,筛选出一套最优引物组并做特异性和灵敏度实验。结果表明,该引物组特异性扩增鸭细小病毒,对相似的其他病毒和衣原体检测结果为阴性;将模板10倍比例稀释后检测结果限线性范围达6个数量级,检测下限为2 copies,证明该技术方法可应用于鸭细小病毒现场快速检测。
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关键词
鸭细小病毒
LAMP
快速检测
灵敏
准确
特异
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职称材料
题名
鸭坦布苏病毒快速实时荧光RT-LAMP方法的建立及初步应用
被引量：
4
1
作者
王巧萍
粟柯衡
元正菊
常志顺
张薇
张以芳
信爱国
机构
云南
农业大学动物医学院
云南
省畜牧兽医科学院养禽与禽病研究所
云南瑞栢泰生物科技有限公司
出处
《中国动物检疫》
CAS
2022年第5期103-109,共7页
基金
国家现代农业产业技术(水禽)体系资助项目(CARS-42)
云南省廖明专家工作站项目(202105AF150077)
云南省重大科技专项(202102AE090029)。
文摘
为建立检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)的荧光逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测方法,根据DTMUV NS5基因保守序列设计1套特异性引物,对反应时间和温度进行优化,并评价该方法的特异性、敏感性、重复性和临床适用性。结果显示:建立的荧光RT-LAMP最优反应条件为65℃25 min;只特异性扩增DTMUV,而不扩增其他几种禽类病毒;最低检测限为4×10^(2)copies/μL,与qRT-PCR方法敏感性一致,是普通RT-PCR的100倍;批内和批间重复性高;应用该方法检测DTMUV不同剂量人工感染鸭肝脏样品,对接毒剂量为10^(3-7)TCID_(50)和10^(2-7)TCID_(50)组的阳性检出率均为100%,对接毒量10^(1.7)TCID_(50)组的阳性检出率为90%(9/10)。结果表明,本研究建立的荧光RT-LAMP检测方法特异性强、重复性好、敏感性高,可成为快速诊断DTMUV的方法之一。
关键词
鸭坦布苏病毒
实时荧光
环介导等温扩增技术
NS5基因
Keywords
duck Tembusu virus
real-time fluorescent
LAMP
NS5 gene
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
鸭细小病毒实时荧光LAMP检测方法的建立与应用
被引量：
1
2
作者
王耕
田克恭
张薇
许绍坤
粟柯衡
邓均华
张冲
机构
云南瑞栢泰生物科技有限公司
普莱柯
生物
工程股份
有限公司
昆明海关技术中心
出处
《畜禽业》
2022年第3期6-8,共3页
基金
云南省田克恭专家工作站(2019IC062)。
文摘
鸭细小病毒(Duck parvovirus,MDPV)是细小病毒科依赖病毒属成员。为建立鸭细小病毒(MDPV)快速、便捷、准确、灵敏度高的实时荧光LAMP检测方法,针对鸭细小病毒基因组中相对保守的特异区域设计LAMP引物组,用灭活后的病毒血清样本直接扩增,筛选出一套最优引物组并做特异性和灵敏度实验。结果表明,该引物组特异性扩增鸭细小病毒,对相似的其他病毒和衣原体检测结果为阴性;将模板10倍比例稀释后检测结果限线性范围达6个数量级,检测下限为2 copies,证明该技术方法可应用于鸭细小病毒现场快速检测。
关键词
鸭细小病毒
LAMP
快速检测
灵敏
准确
特异
分类号
S85 [农业科学—兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭坦布苏病毒快速实时荧光RT-LAMP方法的建立及初步应用
王巧萍
粟柯衡
元正菊
常志顺
张薇
张以芳
信爱国
《中国动物检疫》
CAS
2022
4
在线阅读
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职称材料
2
鸭细小病毒实时荧光LAMP检测方法的建立与应用
王耕
田克恭
张薇
许绍坤
粟柯衡
邓均华
张冲
《畜禽业》
2022
1
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