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长柄链格孢四个二甲酰亚胺类杀菌剂胁迫差异表达基因的克隆与序列分析
1
作者
罗义勇
刘卫红
+3 位作者
柳陈坚
毕薇
张克勤
杨金奎
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期213-222,共10页
为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异...
为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异表达基因,即AlATP7、AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88,应用DNA walking技术对它们两侧的未知序列进行克隆。DNA测序和Blast搜索表明,AlATP7基因开放阅读框为712 bp,含4个外显子和3个内含子,编码169个氨基酸;AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88基因未克隆到全长序列,5′末端还有200-300 bp才到达翻译起始密码子ATG;在这些DNA序列中,AlCIT1基因长1 214 bp,含1个内含子,编码386个氨基酸;AlGLUT基因长1 308 bp,含1个内含子,编码417个氨基酸;AlHSP88基因长2 087bp,含2个内含子,编码628个氨基酸。与其他丝状真菌的氨基酸序列同源性比对发现,AlATP7和线粒体ATP合酶D亚基、Al-CIT1和柠檬酸合成酶、AlGLUT和主要易化子超家族(MFS)类型葡萄糖转运子、AlHSP88和热休克蛋白HSP88分别具有很高的同源性。同时,还对4个DCFs胁迫差异表达基因的系统发育进行分析。基于这些蛋白功能的文献报道和前期的研究,推测A.longipes存在着一种新的DCFs抗性机制:A.longipes利用MFS类型葡萄糖转运子将DCFs排除到细胞外解毒,线粒体ATP合酶和柠檬酸合成酶参与能量供给,而热休克蛋白AlHSP88可能在该机制中促进一些重要蛋白的正确折叠和修复过程中发挥重要作用。
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关键词
长柄链格孢
线粒体
ATP合酶D亚基
柠檬酸合成酶
主要易化子超家族类型葡萄糖转运子
热休克蛋白HSP88
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职称材料
题名
长柄链格孢四个二甲酰亚胺类杀菌剂胁迫差异表达基因的克隆与序列分析
1
作者
罗义勇
刘卫红
柳陈坚
毕薇
张克勤
杨金奎
机构
昆明理工
大学
生命科学与技术学院
云南大学生物资源保护与利用国家重点实验室培育基地和教育部微生物资源重点实验室
云南
平正环保科技有限公司
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期213-222,共10页
基金
云南省应用基础研究自筹经费项目(2010ZC056)
昆明理工大学人才科研启动基金资助项目(14118250)
云南省中青年学术和技术带头人后备人才资助项目(2009CI052)
文摘
为了阐明烟草赤星病病原真菌长柄链格孢Alternaria longipes对二甲酰亚胺类杀菌剂(DCFs)抗性的分子机理,前期克隆了16个DCFs胁迫差异表达基因的部分cDNA片段。为了利用基因敲除技术进一步分析这些差异表达基因的功能,本研究选取4个差异表达基因,即AlATP7、AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88,应用DNA walking技术对它们两侧的未知序列进行克隆。DNA测序和Blast搜索表明,AlATP7基因开放阅读框为712 bp,含4个外显子和3个内含子,编码169个氨基酸;AlCIT1、AlGLUT和AlHSP88基因未克隆到全长序列,5′末端还有200-300 bp才到达翻译起始密码子ATG;在这些DNA序列中,AlCIT1基因长1 214 bp,含1个内含子,编码386个氨基酸;AlGLUT基因长1 308 bp,含1个内含子,编码417个氨基酸;AlHSP88基因长2 087bp,含2个内含子,编码628个氨基酸。与其他丝状真菌的氨基酸序列同源性比对发现,AlATP7和线粒体ATP合酶D亚基、Al-CIT1和柠檬酸合成酶、AlGLUT和主要易化子超家族(MFS)类型葡萄糖转运子、AlHSP88和热休克蛋白HSP88分别具有很高的同源性。同时,还对4个DCFs胁迫差异表达基因的系统发育进行分析。基于这些蛋白功能的文献报道和前期的研究,推测A.longipes存在着一种新的DCFs抗性机制:A.longipes利用MFS类型葡萄糖转运子将DCFs排除到细胞外解毒,线粒体ATP合酶和柠檬酸合成酶参与能量供给,而热休克蛋白AlHSP88可能在该机制中促进一些重要蛋白的正确折叠和修复过程中发挥重要作用。
关键词
长柄链格孢
线粒体
ATP合酶D亚基
柠檬酸合成酶
主要易化子超家族类型葡萄糖转运子
热休克蛋白HSP88
Keywords
Alternaria longipes Mitochondrial ATPase D subunit Citrate synthase Major facilitator superfamily type glucose transporter Heat shock protein HSP88
分类号
S432.44 [农业科学—植物病理学]
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出处
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1
长柄链格孢四个二甲酰亚胺类杀菌剂胁迫差异表达基因的克隆与序列分析
罗义勇
刘卫红
柳陈坚
毕薇
张克勤
杨金奎
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
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