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抗五步蛇毒ScFv噬菌体显示文库的构建及表达
被引量：
3
1
作者
尹惠琼
范泉水
+5 位作者
谭德勇
王双印
孙阳
李刚山
邱薇
余敏
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期338-340,共3页
目的 :构建抗五步蛇毒的特异性ScFv噬菌体显示文库 ,并从中筛选出阳性克隆。方法 :用五步蛇毒素免疫BALB C小鼠 ,挑选其中效价最高的 3只小鼠提取脾脏组织 ,抽提细胞总RNA ,经RT PCR分别扩增出VH、VL基因片段 ,经Linker连接成ScFv基因 (...
目的 :构建抗五步蛇毒的特异性ScFv噬菌体显示文库 ,并从中筛选出阳性克隆。方法 :用五步蛇毒素免疫BALB C小鼠 ,挑选其中效价最高的 3只小鼠提取脾脏组织 ,抽提细胞总RNA ,经RT PCR分别扩增出VH、VL基因片段 ,经Linker连接成ScFv基因 (singlechainvariablefragment) ,再把ScFv基因重组到pCANTAB 5E载体 ,转化至大肠杆菌TG1中表达 ,经辅助噬菌体 (Helperphage)M13K0 7拯救后建成噬菌体显示文库。结果 :经 4轮吸附 洗脱 富集筛选后 ,库容量达到 4× 10 8cfu L ,随机挑取 90个克隆进行ELISA检测 ,结果 16个呈阳性 ,并进行了重复验证。结论
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关键词
五步蛇
蛇毒
单链抗体
噬菌体显示文库
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职称材料
题名
抗五步蛇毒ScFv噬菌体显示文库的构建及表达
被引量：
3
1
作者
尹惠琼
范泉水
谭德勇
王双印
孙阳
李刚山
邱薇
余敏
机构
成都军区联勤部军事医学研究所
云南大学生化学院生物技术系生化室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第5期338-340,共3页
文摘
目的 :构建抗五步蛇毒的特异性ScFv噬菌体显示文库 ,并从中筛选出阳性克隆。方法 :用五步蛇毒素免疫BALB C小鼠 ,挑选其中效价最高的 3只小鼠提取脾脏组织 ,抽提细胞总RNA ,经RT PCR分别扩增出VH、VL基因片段 ,经Linker连接成ScFv基因 (singlechainvariablefragment) ,再把ScFv基因重组到pCANTAB 5E载体 ,转化至大肠杆菌TG1中表达 ,经辅助噬菌体 (Helperphage)M13K0 7拯救后建成噬菌体显示文库。结果 :经 4轮吸附 洗脱 富集筛选后 ,库容量达到 4× 10 8cfu L ,随机挑取 90个克隆进行ELISA检测 ,结果 16个呈阳性 ,并进行了重复验证。结论
关键词
五步蛇
蛇毒
单链抗体
噬菌体显示文库
Keywords
Agkistrodon acutus guenther
Venom
Single chain antibody fragment
Phage displaying library
分类号
R392.13 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗五步蛇毒ScFv噬菌体显示文库的构建及表达
尹惠琼
范泉水
谭德勇
王双印
孙阳
李刚山
邱薇
余敏
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
3
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