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版纳微型猪近交系不育和可育公猪CRISP2基因全长编码区序列克隆及睾丸差异表达分析
被引量：
3
1
作者
陈园园
潘伟荣
+4 位作者
霍金龙
王淑燕
王配
查星琴
曾养志
《云南农业大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期698-705,共8页
CRISP2作为弱精子症发生的重要候选基因,为深入研究CRISP2与精子活力的关系及其在体内的调节与功能提供基础资料,本研究以版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪为试验动物,通过RT-PCR方法扩增得到CRISP2基因全长编码区序列,不育和可育...
CRISP2作为弱精子症发生的重要候选基因,为深入研究CRISP2与精子活力的关系及其在体内的调节与功能提供基础资料,本研究以版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪为试验动物,通过RT-PCR方法扩增得到CRISP2基因全长编码区序列,不育和可育公猪序列无差异,提交Gen Bank数据库,获得登录号为"KP780059"。生物信息学分析显示,该基因编码244个氨基酸,蛋白分子量为27.05 ku,等电点为6.76。蛋白质结构分析得出,CRISP2存在2个保守域,无跨膜结构,存在信号肽及1个亮氨酸富集的核输出信号,N端、C端均疏水;亚细胞定位显示该蛋白分泌到细胞周质的概率为94.1%。系统进化分析表明,猪与牛、绵羊的亲缘关系较近。同时,利用荧光定量PCR法确定了CRISP2 mRNA在BMI不育及可育公猪14个组织中的表达量,发现其在睾丸中特异表达,CRISP2基因在不育公猪睾丸中的表达量明显低于可育公猪,两组之间的表达量有显著的统计学差异(P<0.05),表明CRISP2表达的减少可能导致精子活力下降。本研究为进一步研究猪CRISP2基因在精子发生方面的作用奠定研究基础。
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关键词
猪
CRISP2
精子发生
生物信息学
组织表达
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职称材料
版纳微型猪近交系生长激素基因克隆及原核表达研究
被引量：
1
2
作者
王淑燕
霍金龙
+2 位作者
王配
潘伟荣
曾养志
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1669-1676,共8页
本研究旨在获得版纳微型猪近交系(BMI)生长激素基因编码区序列,揭示其原核表达规律。采用RT-PCR方法从版纳微型猪近交系(BMI)脑垂体中克隆生长激素(GH)基因,并将其连接到pMD 18-T载体进行测序和生物信息学分析。克隆得到的GH基因cDNA序...
本研究旨在获得版纳微型猪近交系(BMI)生长激素基因编码区序列,揭示其原核表达规律。采用RT-PCR方法从版纳微型猪近交系(BMI)脑垂体中克隆生长激素(GH)基因,并将其连接到pMD 18-T载体进行测序和生物信息学分析。克隆得到的GH基因cDNA序列长690bp,其中CDS长651bp,编码216个氨基酸,前26个氨基酸为信号肽序列。多猪种GH氨基酸序列比对表明其在各猪种中高度保守,版纳微型猪近交系的GH氨基酸序列与五指山猪和宁香猪的相似性均为100%,与藏猪、香猪、大乌猪、太湖猪、成华猪、内江猪、荣昌猪、长白猪、约克夏的相似性均为99%,与雅南猪、杜洛克的相似性均为98%。扩增GH成熟肽区编码序列,定向克隆至表达载体pET-32a(+),转化入大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达蛋白。SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,重组质粒在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为40.6ku。以上结果为进一步探究GH基因对BMI矮小性状的影响奠定了基础。
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关键词
版纳微型猪近交系
生长激素
矮小性状
原核表达
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职称材料
猪孤雌激活早期胚胎线粒体分布及mtDNA拷贝数变化的研究
被引量：
2
3
作者
成文敏
魏红江
+3 位作者
潘伟荣
信吉阁
黄言
曾养志
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第1期127-131,共5页
本研究通过线粒体分子探针标记技术检测孤雌激活早期胚胎线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测mtDNA拷贝数的变化,揭示早期胚胎发育过程中线粒体分布、mtDNA拷贝数变化趋势。结果表明,成熟卵母细胞电激活后,由2-细胞胚胎开始,...
本研究通过线粒体分子探针标记技术检测孤雌激活早期胚胎线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测mtDNA拷贝数的变化,揭示早期胚胎发育过程中线粒体分布、mtDNA拷贝数变化趋势。结果表明,成熟卵母细胞电激活后,由2-细胞胚胎开始,卵裂球内线粒体分布均匀且密集,每个细胞均有分布,卵裂球之外的空隙未见线粒体分布,直到囊胚形成,线粒体均有分布。孤雌激活4-细胞胚胎mtDNA拷贝数显著高于8-细胞胚胎mtDNA拷贝数(907210.77±145520.77,186224.33±103308.00,P<0.05),但显著低于2-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚的mtDNA拷贝数(1563422.54±224666.51、1697626.25±176999.53和1752301.29±101146.64,P<0.05)。孤雌激活扩张囊胚mtDNA拷贝数最高,为2812545.67±156819.31,显著高于其他发育时期胚胎的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,孤雌激活早期胚胎发育进程中线粒体分布及mtDNA拷贝数会发生变化。
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关键词
猪卵母细胞
孤雌激活
线粒体分布
mtDNA拷贝数
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职称材料
题名
版纳微型猪近交系不育和可育公猪CRISP2基因全长编码区序列克隆及睾丸差异表达分析
被引量：
3
1
作者
陈园园
潘伟荣
霍金龙
王淑燕
王配
查星琴
曾养志
机构
云南农业大学
动物
科学技术
学院
出处
《云南农业大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期698-705,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31460580,31160439)
云南省教育厅科学研究基金项目(2014Y212)
文摘
CRISP2作为弱精子症发生的重要候选基因,为深入研究CRISP2与精子活力的关系及其在体内的调节与功能提供基础资料,本研究以版纳微型猪近交系(BMI)不育和可育公猪为试验动物,通过RT-PCR方法扩增得到CRISP2基因全长编码区序列,不育和可育公猪序列无差异,提交Gen Bank数据库,获得登录号为"KP780059"。生物信息学分析显示,该基因编码244个氨基酸,蛋白分子量为27.05 ku,等电点为6.76。蛋白质结构分析得出,CRISP2存在2个保守域,无跨膜结构,存在信号肽及1个亮氨酸富集的核输出信号,N端、C端均疏水;亚细胞定位显示该蛋白分泌到细胞周质的概率为94.1%。系统进化分析表明,猪与牛、绵羊的亲缘关系较近。同时,利用荧光定量PCR法确定了CRISP2 mRNA在BMI不育及可育公猪14个组织中的表达量,发现其在睾丸中特异表达,CRISP2基因在不育公猪睾丸中的表达量明显低于可育公猪,两组之间的表达量有显著的统计学差异(P<0.05),表明CRISP2表达的减少可能导致精子活力下降。本研究为进一步研究猪CRISP2基因在精子发生方面的作用奠定研究基础。
关键词
猪
CRISP2
精子发生
生物信息学
组织表达
Keywords
pig
CRISP2
spermatogenesis
bioinformatics
tissue expression
分类号
S828.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
版纳微型猪近交系生长激素基因克隆及原核表达研究
被引量：
1
2
作者
王淑燕
霍金龙
王配
潘伟荣
曾养志
机构
云南农业大学动物科学技术学院云南省版纳微型猪近交系重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第10期1669-1676,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31160439)
神农大学生科技创新行动基金
文摘
本研究旨在获得版纳微型猪近交系(BMI)生长激素基因编码区序列,揭示其原核表达规律。采用RT-PCR方法从版纳微型猪近交系(BMI)脑垂体中克隆生长激素(GH)基因,并将其连接到pMD 18-T载体进行测序和生物信息学分析。克隆得到的GH基因cDNA序列长690bp,其中CDS长651bp,编码216个氨基酸,前26个氨基酸为信号肽序列。多猪种GH氨基酸序列比对表明其在各猪种中高度保守,版纳微型猪近交系的GH氨基酸序列与五指山猪和宁香猪的相似性均为100%,与藏猪、香猪、大乌猪、太湖猪、成华猪、内江猪、荣昌猪、长白猪、约克夏的相似性均为99%,与雅南猪、杜洛克的相似性均为98%。扩增GH成熟肽区编码序列,定向克隆至表达载体pET-32a(+),转化入大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达蛋白。SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,重组质粒在大肠杆菌中获得了高效表达,融合蛋白以包涵体形式存在,分子质量约为40.6ku。以上结果为进一步探究GH基因对BMI矮小性状的影响奠定了基础。
关键词
版纳微型猪近交系
生长激素
矮小性状
原核表达
Keywords
Banna Mini-pig Inbred Line （BMI）
growth hormone （GH）
dwarfism
prokaryotic expression
分类号
S828 [农业科学—畜牧学]
S813.3 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
猪孤雌激活早期胚胎线粒体分布及mtDNA拷贝数变化的研究
被引量：
2
3
作者
成文敏
魏红江
潘伟荣
信吉阁
黄言
曾养志
机构
云南农业大学
动物
科学技术
学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012年第1期127-131,共5页
基金
国家自然科学基金项目(30800785)
云南省教育厅科学研究基金重点项目(0920042)
文摘
本研究通过线粒体分子探针标记技术检测孤雌激活早期胚胎线粒体的分布变化,运用实时荧光定量PCR技术检测mtDNA拷贝数的变化,揭示早期胚胎发育过程中线粒体分布、mtDNA拷贝数变化趋势。结果表明,成熟卵母细胞电激活后,由2-细胞胚胎开始,卵裂球内线粒体分布均匀且密集,每个细胞均有分布,卵裂球之外的空隙未见线粒体分布,直到囊胚形成,线粒体均有分布。孤雌激活4-细胞胚胎mtDNA拷贝数显著高于8-细胞胚胎mtDNA拷贝数(907210.77±145520.77,186224.33±103308.00,P<0.05),但显著低于2-细胞胚胎、桑椹胚、囊胚的mtDNA拷贝数(1563422.54±224666.51、1697626.25±176999.53和1752301.29±101146.64,P<0.05)。孤雌激活扩张囊胚mtDNA拷贝数最高,为2812545.67±156819.31,显著高于其他发育时期胚胎的mtDNA拷贝数(P<0.05)。由此可见,孤雌激活早期胚胎发育进程中线粒体分布及mtDNA拷贝数会发生变化。
关键词
猪卵母细胞
孤雌激活
线粒体分布
mtDNA拷贝数
Keywords
porcine oocyte
parthenogenetic ~ mitochondrial distribution
mtDNA copy number
分类号
S814 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
版纳微型猪近交系不育和可育公猪CRISP2基因全长编码区序列克隆及睾丸差异表达分析
陈园园
潘伟荣
霍金龙
王淑燕
王配
查星琴
曾养志
《云南农业大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
版纳微型猪近交系生长激素基因克隆及原核表达研究
王淑燕
霍金龙
王配
潘伟荣
曾养志
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
猪孤雌激活早期胚胎线粒体分布及mtDNA拷贝数变化的研究
成文敏
魏红江
潘伟荣
信吉阁
黄言
曾养志
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2012
2
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职称材料
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