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题名抗内毒素噬菌体抗体库的构建及筛选
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作者
陈鸣
陆建华
府伟灵
俞丽丽
张雪
张波
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机构
第三军医大学西南医院检验科
乌鲁木齐军区总医院麻醉科
重庆市大坪医院妇产科
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出处
《中国肿瘤生物治疗杂志》
CAS
CSCD
2001年第2期138-138,共1页
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基金
国家自然科学基金资助项目 ( 395 70 0 42 )
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文摘
目的 :构建一个鼠源性的抗内毒素单链噬菌体抗体库 ,从中筛选出对内毒素具有较高亲和力的单链抗体。方法 :从小鼠脾细胞中提取总RNA ,通过RT PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因 (VH,VL) ,用Linker将VH,VL 交联形成单链抗体可变区片段 (ScFv)。经NotⅠ ,SfiⅠ双酶切后与经同样双酶切的pCANTAB5E载体相连 ,转化入大肠杆菌TG1以构建鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库。在援救噬菌体抗体库后 ,用内毒素淘筛特异性的ScFv ,富集的噬菌体阳性克隆重新感染TG1。在 96孔板分别援救单个含特异性ScFv的TG1菌落 ,最后随机挑选出 190个菌落经ELISA检测抗内毒素ScFv。结果 :小鼠血清中抗内毒素的效价为 1∶12 80 0。提取的总RNA浓度为 12 .3 813 μg/ml,纯度较好。扩增出的VH 长约 3 4 0bp ,VL 约 3 2 0bp ,ScFv约 80 0bp。转化入TG1后有约 1.9× 10 7个菌落。淘筛一轮过后即有 3× 10 4阳性菌落长出 ,190个菌落经ELISA检测有 2个阳性克隆。结论 :成功地构建了一个库容量为 1.9× 10 7的鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库 ,并从中筛选出了 2株抗内毒素ScFv。
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关键词
噬菌体抗体库
内毒素
单链抗体
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Keywords
phage antibody library
endotoxin
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分类号
R392.11
[医药卫生—免疫学]
Q782
[生物学—分子生物学]
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