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非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立
被引量:
3
1
作者
张凯
张春平
+6 位作者
戈胜强
孙春喜
程杰
伏春雨
王刚
牛星
彭军
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期270-279,共10页
【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原...
【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经0.1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,利用镍柱亲和纯化p22蛋白,并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFP-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质,利用间接免疫荧光(IFA)鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原,优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法,并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达,蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体;p22蛋白具有良好的免疫原性,小鼠血清抗体效价为1∶12800。本研究建立的ELISA方法(p22-ELISA)的最佳抗原包被浓度为0.125μg/孔,最佳待检血清稀释度为1∶800,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.384;与CSFV、PRRSV、PCV2、PRV等抗体阳性猪血清无交叉反应,说明特异性好;批内与批间变异系数均低于10%,表明重复性好。利用p22-ELISA方法检测了263份临床猪血清样品,与商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒的符合率为97.7%。【结论】本研究基于原核表达的p22截短体蛋白建立了用于检测ASFV抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为ASFV感染诊断和流行病学调查提供了技术支撑。
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关键词
非洲猪瘟病毒(ASFV)
p22蛋白
原核表达
间接ELISA
抗体
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职称材料
植物ACCase 基因的结构功能及表达调控研究
被引量:
2
2
作者
王保明
颜士华
谭晓风
《安徽农学通报》
2021年第1期17-24,共8页
乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACCase)是催化脂肪酸合成的关键和限速步骤。该文介绍了ACCase的分类及结构特征,阐述了其在脂肪合成代谢中的作用和在除草剂中的应用,分析了它的表达调控及反馈机理,揭示了ACCase基因的克隆及...
乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACCase)是催化脂肪酸合成的关键和限速步骤。该文介绍了ACCase的分类及结构特征,阐述了其在脂肪合成代谢中的作用和在除草剂中的应用,分析了它的表达调控及反馈机理,揭示了ACCase基因的克隆及表达鉴定,并展望了ACCase在植物育种中的应用前景。
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关键词
植物
ACCASE
基因
结构功能
表达调控
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职称材料
活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件优化
被引量:
2
3
作者
杜威
陈宁
《中国油脂》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第11期110-113,共4页
采用溶剂提取活性白土中的3种塑化剂(DBP、DEHP、DINP),提取液经SPE柱净化后,进气相色谱-质谱仪测定。以3种塑化剂的含量为考察指标,对活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件进行了单因素实验和正交实验优化。结果表明,活性白土中塑化...
采用溶剂提取活性白土中的3种塑化剂(DBP、DEHP、DINP),提取液经SPE柱净化后,进气相色谱-质谱仪测定。以3种塑化剂的含量为考察指标,对活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件进行了单因素实验和正交实验优化。结果表明,活性白土中塑化剂含量测定的最佳前处理条件为:甲醇饱和的正己烷溶液为提取溶剂,提取溶剂用量5 mL(活性白土1 g),提取时间3 min,提取温度20℃。在最佳前处理条件下,活性白土中3种塑化剂DEHP、DINP、DBP的含量分别为3.621、0.004、0.078 mg/kg。
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关键词
塑化剂
活性白土
气相色谱-质谱法
前处理
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职称材料
常德市丁玲公园园林树种配置调查与评价
被引量:
1
4
作者
王保明
罗琦
颜士华
《安徽农业科学》
CAS
2020年第1期111-115,134,共6页
公园是城市绿色植物的集中区,能够提供良好的生活环境和改善城市生态环境。调查了常德市丁玲公园的园林树种配置,丁玲公园主要包括纪念馆景观区、湿地景观、休闲娱乐区、民俗文化街,由47科112属92种园林植物组成。纪念馆景观区采取三色...
公园是城市绿色植物的集中区,能够提供良好的生活环境和改善城市生态环境。调查了常德市丁玲公园的园林树种配置,丁玲公园主要包括纪念馆景观区、湿地景观、休闲娱乐区、民俗文化街,由47科112属92种园林植物组成。纪念馆景观区采取三色堇、龙柏、桂花、杜鹃等配置,红色、墨绿、浅绿色搭配,立体性、层次性、多样性分布,突出纪念性以及宁静、肃穆的氛围,以拟人化形式表达哀思之情和仰慕之意。湿地景观以水体为主,以乔草及乔灌草搭配层次分布,突出观赏性、生态性,达到生态性、功能性、艺术性、美观性的统一。休闲娱乐区中合欢、杜仲、苏铁、红花檵木、红叶石楠等规则配置,常绿、落叶搭配,季相变化丰富,突出了宜人性、生态性、趣味性和观赏性。民俗文化街以传统民居建筑群和民俗文化长廊为基础,以香樟、银杏、榉树、栀子花等植物为主,乔灌草层次分布,展示了本土文化和地方特色。
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关键词
植物配置
公园绿地
园林树种
丁玲公园
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职称材料
生物菌肥对油茶果实性状及产量的影响
被引量:
11
5
作者
彭佳俊
钟紫香
+1 位作者
李婷婷
王保明
《安徽农学通报》
2020年第20期90-94,共5页
以湖南应用技术学院和湖南省慈利县东岳乡北坪村的油茶林为研究对象,设置4处理3重复,在常规施肥基础上,每次用微生物菌剂45L/hm2兑水4500kg/hm2,分别于油茶保果期和果实膨大期灌根。结果表明:在两处油茶试验林地,施用菌肥(处理1)比施用...
以湖南应用技术学院和湖南省慈利县东岳乡北坪村的油茶林为研究对象,设置4处理3重复,在常规施肥基础上,每次用微生物菌剂45L/hm2兑水4500kg/hm2,分别于油茶保果期和果实膨大期灌根。结果表明:在两处油茶试验林地,施用菌肥(处理1)比施用基质(处理2)的单果重、果横径、果纵径、果皮厚度分别增加15.0g与13.5g、6.12mm与4.30mm、3.56mm与3.21mm、0.98mm与0.53mm,鲜籽率提高2.60%和2.27%,鲜果平均产量分别增加9.4%和9.9%;油茶果实性状和产量差异均达到极显著水平。
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关键词
油茶
生物菌肥
果实性状
产量
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职称材料
低温贮藏对沂蒙山小冬桃果实采后品质的影响
被引量:
6
6
作者
孙赏
张心梦
+6 位作者
王后超
张星
朱文莉
张文娜
刘振宁
徐蒙
戴圣杰
《中国农业文摘(农业工程)》
2023年第4期71-78,共8页
【目的】探索低温贮藏对“沂蒙山小冬桃”果实品质的影响。【方法】分别研究了其在室温(25℃)和低温(1℃)贮藏条件下果实质地、色泽、部分营养物质和抗氧化物质含量的变化情况。【结果】与对照组(室温贮藏)相比,低温贮藏果实的失水率、...
【目的】探索低温贮藏对“沂蒙山小冬桃”果实品质的影响。【方法】分别研究了其在室温(25℃)和低温(1℃)贮藏条件下果实质地、色泽、部分营养物质和抗氧化物质含量的变化情况。【结果】与对照组(室温贮藏)相比,低温贮藏果实的失水率、出汁率、可溶性固形物含量、过氧化物酶活性及可溶性蛋白含量显著降低;果实硬度、叶绿素、维生素C、可滴定酸的含量显著提高;果实细胞排列更加紧密、饱满,果肉结构完整性更好。“沂蒙山小冬桃”低温贮藏能显著推迟果实的后熟,延长贮藏期。【结论】研究明确了“沂蒙山小冬桃”果实在室温和低温贮藏过程中果实采后生理变化规律,为指导冬桃果实贮藏保鲜以及品质调控研究提供参考依据。
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关键词
低温贮藏
沂蒙山小冬桃
冬桃果实
采后品质
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职称材料
园林苗圃学课程教学改革与实践
被引量:
3
7
作者
王保明
颜士华
《安徽农学通报》
2020年第11期146-147,157,共3页
园林苗圃学是一门理论性和实践性都很强的园林专业基础课程。该文总结了当前园林苗圃学课程教学中存在的问题,在明确专业特色和人才培养目标的基础上,通过合理调整教学内容、加强实践教学、改革考核制度等措施,激发学生的学习兴趣和积极...
园林苗圃学是一门理论性和实践性都很强的园林专业基础课程。该文总结了当前园林苗圃学课程教学中存在的问题,在明确专业特色和人才培养目标的基础上,通过合理调整教学内容、加强实践教学、改革考核制度等措施,激发学生的学习兴趣和积极性,提高其实践技能。
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关键词
园林苗圃学
课程改革
实践教学
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职称材料
题名
非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立
被引量:
3
1
作者
张凯
张春平
戈胜强
孙春喜
程杰
伏春雨
王刚
牛星
彭军
机构
山东
农业
大学动物
科技
学院
山东省潍坊市动物疫病预防与控制中心
中国动物卫生与流行病学中心
临沂科技职业学院现代农业学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期270-279,共10页
基金
山东省重大科技创新工程项目(2020CXGC010801)
山东省农业良种工程项目(2021LZGC001)。
文摘
【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经0.1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,利用镍柱亲和纯化p22蛋白,并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFP-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质,利用间接免疫荧光(IFA)鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原,优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法,并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达,蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体;p22蛋白具有良好的免疫原性,小鼠血清抗体效价为1∶12800。本研究建立的ELISA方法(p22-ELISA)的最佳抗原包被浓度为0.125μg/孔,最佳待检血清稀释度为1∶800,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.384;与CSFV、PRRSV、PCV2、PRV等抗体阳性猪血清无交叉反应,说明特异性好;批内与批间变异系数均低于10%,表明重复性好。利用p22-ELISA方法检测了263份临床猪血清样品,与商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒的符合率为97.7%。【结论】本研究基于原核表达的p22截短体蛋白建立了用于检测ASFV抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为ASFV感染诊断和流行病学调查提供了技术支撑。
关键词
非洲猪瘟病毒(ASFV)
p22蛋白
原核表达
间接ELISA
抗体
Keywords
African swine fever virus(ASFV)
p22 protein
prokaryotic expression
indirect ELISA
antibody
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
植物ACCase 基因的结构功能及表达调控研究
被引量:
2
2
作者
王保明
颜士华
谭晓风
机构
湖南应用技术
学院
农林
科技
学院
临沂科技职业学院现代农业学院
中南林业
科技
大学经济林培育与利用湖南省高校“
出处
《安徽农学通报》
2021年第1期17-24,共8页
基金
湖南省教育厅重点项目(编号:19A360)
湖南省高等学校“双一流”学科建设项目(应用特色学科)(湘教通[2018]469)。
文摘
乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACCase)是催化脂肪酸合成的关键和限速步骤。该文介绍了ACCase的分类及结构特征,阐述了其在脂肪合成代谢中的作用和在除草剂中的应用,分析了它的表达调控及反馈机理,揭示了ACCase基因的克隆及表达鉴定,并展望了ACCase在植物育种中的应用前景。
关键词
植物
ACCASE
基因
结构功能
表达调控
Keywords
Plant
ACCase
Gene
Structural function
Expressing regulation
分类号
S364.3 [农业科学—作物栽培与耕作技术]
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职称材料
题名
活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件优化
被引量:
2
3
作者
杜威
陈宁
机构
临沂科技职业学院现代农业学院
山东金胜粮油食品有限公司
出处
《中国油脂》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第11期110-113,共4页
文摘
采用溶剂提取活性白土中的3种塑化剂(DBP、DEHP、DINP),提取液经SPE柱净化后,进气相色谱-质谱仪测定。以3种塑化剂的含量为考察指标,对活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件进行了单因素实验和正交实验优化。结果表明,活性白土中塑化剂含量测定的最佳前处理条件为:甲醇饱和的正己烷溶液为提取溶剂,提取溶剂用量5 mL(活性白土1 g),提取时间3 min,提取温度20℃。在最佳前处理条件下,活性白土中3种塑化剂DEHP、DINP、DBP的含量分别为3.621、0.004、0.078 mg/kg。
关键词
塑化剂
活性白土
气相色谱-质谱法
前处理
Keywords
plasticizer
activated clay
gas chromatography-mass spectrometry
pretreatment
分类号
TS224.6 [轻工技术与工程—粮食、油脂及植物蛋白工程]
TS225.19 [轻工技术与工程—粮食、油脂及植物蛋白工程]
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职称材料
题名
常德市丁玲公园园林树种配置调查与评价
被引量:
1
4
作者
王保明
罗琦
颜士华
机构
湖南应用技术
学院
农林
科技
学院
临沂科技职业学院现代农业学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
2020年第1期111-115,134,共6页
基金
2017年湖南省普通高等学校教学改革研究项目(632)
湖南省高等学校“双一流”学科建设项目(应用特色学科)(湘教通[2018]469)
文摘
公园是城市绿色植物的集中区,能够提供良好的生活环境和改善城市生态环境。调查了常德市丁玲公园的园林树种配置,丁玲公园主要包括纪念馆景观区、湿地景观、休闲娱乐区、民俗文化街,由47科112属92种园林植物组成。纪念馆景观区采取三色堇、龙柏、桂花、杜鹃等配置,红色、墨绿、浅绿色搭配,立体性、层次性、多样性分布,突出纪念性以及宁静、肃穆的氛围,以拟人化形式表达哀思之情和仰慕之意。湿地景观以水体为主,以乔草及乔灌草搭配层次分布,突出观赏性、生态性,达到生态性、功能性、艺术性、美观性的统一。休闲娱乐区中合欢、杜仲、苏铁、红花檵木、红叶石楠等规则配置,常绿、落叶搭配,季相变化丰富,突出了宜人性、生态性、趣味性和观赏性。民俗文化街以传统民居建筑群和民俗文化长廊为基础,以香樟、银杏、榉树、栀子花等植物为主,乔灌草层次分布,展示了本土文化和地方特色。
关键词
植物配置
公园绿地
园林树种
丁玲公园
Keywords
Plant configuration
Park green space
Garden tree species
Dingling Park
分类号
S688 [农业科学—观赏园艺]
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职称材料
题名
生物菌肥对油茶果实性状及产量的影响
被引量:
11
5
作者
彭佳俊
钟紫香
李婷婷
王保明
机构
湖南应用技术
学院
农林
科技
学院
临沂科技职业学院现代农业学院
出处
《安徽农学通报》
2020年第20期90-94,共5页
基金
国家级大学生创新创业训练计划平台项目(201813809002)
湖南省教育厅重点项目(编号:19A360)。
文摘
以湖南应用技术学院和湖南省慈利县东岳乡北坪村的油茶林为研究对象,设置4处理3重复,在常规施肥基础上,每次用微生物菌剂45L/hm2兑水4500kg/hm2,分别于油茶保果期和果实膨大期灌根。结果表明:在两处油茶试验林地,施用菌肥(处理1)比施用基质(处理2)的单果重、果横径、果纵径、果皮厚度分别增加15.0g与13.5g、6.12mm与4.30mm、3.56mm与3.21mm、0.98mm与0.53mm,鲜籽率提高2.60%和2.27%,鲜果平均产量分别增加9.4%和9.9%;油茶果实性状和产量差异均达到极显著水平。
关键词
油茶
生物菌肥
果实性状
产量
Keywords
Camellia oleifera
Biological bacterial fertilizer
Fruit features
Yield
分类号
S794.4 [农业科学—林木遗传育种]
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职称材料
题名
低温贮藏对沂蒙山小冬桃果实采后品质的影响
被引量:
6
6
作者
孙赏
张心梦
王后超
张星
朱文莉
张文娜
刘振宁
徐蒙
戴圣杰
机构
临沂
大学农林科学
学院
浙江大学山东(
临沂
)
现代农业
研究院
临沂科技职业学院现代农业学院
出处
《中国农业文摘(农业工程)》
2023年第4期71-78,共8页
基金
山东省高等学校大学生创新创业训练计划项目(X202110452098)
浙大山东农研院服务地方经济发展项目(ZDNY-2020-FWLY02002)
+2 种基金
山东省自然科学基金项目(ZR2019PC016)
山东省高等学校青创科技计划创新团队(2021KJ055)
山东省现代农业产业技术体系创新团队(SDAIT-06-08)。
文摘
【目的】探索低温贮藏对“沂蒙山小冬桃”果实品质的影响。【方法】分别研究了其在室温(25℃)和低温(1℃)贮藏条件下果实质地、色泽、部分营养物质和抗氧化物质含量的变化情况。【结果】与对照组(室温贮藏)相比,低温贮藏果实的失水率、出汁率、可溶性固形物含量、过氧化物酶活性及可溶性蛋白含量显著降低;果实硬度、叶绿素、维生素C、可滴定酸的含量显著提高;果实细胞排列更加紧密、饱满,果肉结构完整性更好。“沂蒙山小冬桃”低温贮藏能显著推迟果实的后熟,延长贮藏期。【结论】研究明确了“沂蒙山小冬桃”果实在室温和低温贮藏过程中果实采后生理变化规律,为指导冬桃果实贮藏保鲜以及品质调控研究提供参考依据。
关键词
低温贮藏
沂蒙山小冬桃
冬桃果实
采后品质
分类号
S662.1 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
园林苗圃学课程教学改革与实践
被引量:
3
7
作者
王保明
颜士华
机构
湖南应用技术
学院
农林
科技
学院
临沂科技职业学院现代农业学院
出处
《安徽农学通报》
2020年第11期146-147,157,共3页
基金
2017年湖南省普通高等学校教学改革研究项目(632)
湖南省高等学校“双一流”学科建设项目(应用特色学科)(湘教通[2018]469)。
文摘
园林苗圃学是一门理论性和实践性都很强的园林专业基础课程。该文总结了当前园林苗圃学课程教学中存在的问题,在明确专业特色和人才培养目标的基础上,通过合理调整教学内容、加强实践教学、改革考核制度等措施,激发学生的学习兴趣和积极性,提高其实践技能。
关键词
园林苗圃学
课程改革
实践教学
Keywords
Nursery and landscape science
Curriculum reform
Practice teaching
分类号
G642.0 [文化科学—高等教育学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立
张凯
张春平
戈胜强
孙春喜
程杰
伏春雨
王刚
牛星
彭军
《中国畜牧兽医》
CAS
CSCD
北大核心
2023
3
在线阅读
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职称材料
2
植物ACCase 基因的结构功能及表达调控研究
王保明
颜士华
谭晓风
《安徽农学通报》
2021
2
在线阅读
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职称材料
3
活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件优化
杜威
陈宁
《中国油脂》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
在线阅读
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职称材料
4
常德市丁玲公园园林树种配置调查与评价
王保明
罗琦
颜士华
《安徽农业科学》
CAS
2020
1
在线阅读
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职称材料
5
生物菌肥对油茶果实性状及产量的影响
彭佳俊
钟紫香
李婷婷
王保明
《安徽农学通报》
2020
11
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职称材料
6
低温贮藏对沂蒙山小冬桃果实采后品质的影响
孙赏
张心梦
王后超
张星
朱文莉
张文娜
刘振宁
徐蒙
戴圣杰
《中国农业文摘(农业工程)》
2023
6
在线阅读
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职称材料
7
园林苗圃学课程教学改革与实践
王保明
颜士华
《安徽农学通报》
2020
3
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职称材料
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