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非洲猪瘟病毒p22蛋白表达、多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立 被引量:3
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作者 张凯 张春平 +6 位作者 戈胜强 孙春喜 程杰 伏春雨 王刚 牛星 彭军 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期270-279,共10页
【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原... 【目的】试验旨在表达与纯化非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的结构蛋白p22,将其作为包被抗原建立ASFV抗体的间接ELISA检测方法,用于诊断非洲猪瘟。【方法】将ASFV p22编码基因KP177R的截短体(24―145位氨基酸)克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,将重组质粒pET-32a-p22转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经0.1 mmol/L IPTG诱导表达5 h,利用镍柱亲和纯化p22蛋白,并进行Western blotting鉴定。利用p22蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清,并以含p22全长基因的真核表达质粒pCAGGS-EGFP-fp22转染HEK293T细胞为抗原基质,利用间接免疫荧光(IFA)鉴定抗血清的反应性。以重组p22蛋白为包被抗原,优化最佳抗原包被浓度、待检血清稀释度、封闭条件、抗原抗体反应时间、酶标二抗工作浓度等参数,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法,并对临床猪血清样品进行检测。【结果】ASFV p22截短蛋白在大肠杆菌中高水平表达,蛋白产量为0.85 mg/100 g菌体;p22蛋白具有良好的免疫原性,小鼠血清抗体效价为1∶12800。本研究建立的ELISA方法(p22-ELISA)的最佳抗原包被浓度为0.125μg/孔,最佳待检血清稀释度为1∶800,最佳酶标二抗稀释度为1∶10000;阴阳性临界值为0.384;与CSFV、PRRSV、PCV2、PRV等抗体阳性猪血清无交叉反应,说明特异性好;批内与批间变异系数均低于10%,表明重复性好。利用p22-ELISA方法检测了263份临床猪血清样品,与商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒的符合率为97.7%。【结论】本研究基于原核表达的p22截短体蛋白建立了用于检测ASFV抗体的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为ASFV感染诊断和流行病学调查提供了技术支撑。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) p22蛋白 原核表达 间接ELISA 抗体
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活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件优化 被引量:1
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作者 杜威 陈宁 《中国油脂》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期110-113,共4页
采用溶剂提取活性白土中的3种塑化剂(DBP、DEHP、DINP),提取液经SPE柱净化后,进气相色谱-质谱仪测定。以3种塑化剂的含量为考察指标,对活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件进行了单因素实验和正交实验优化。结果表明,活性白土中塑化... 采用溶剂提取活性白土中的3种塑化剂(DBP、DEHP、DINP),提取液经SPE柱净化后,进气相色谱-质谱仪测定。以3种塑化剂的含量为考察指标,对活性白土中塑化剂含量测定的前处理条件进行了单因素实验和正交实验优化。结果表明,活性白土中塑化剂含量测定的最佳前处理条件为:甲醇饱和的正己烷溶液为提取溶剂,提取溶剂用量5 mL(活性白土1 g),提取时间3 min,提取温度20℃。在最佳前处理条件下,活性白土中3种塑化剂DEHP、DINP、DBP的含量分别为3.621、0.004、0.078 mg/kg。 展开更多
关键词 塑化剂 活性白土 气相色谱-质谱法 前处理
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常德市丁玲公园园林树种配置调查与评价 被引量:1
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作者 王保明 罗琦 颜士华 《安徽农业科学》 CAS 2020年第1期111-115,134,共6页
公园是城市绿色植物的集中区,能够提供良好的生活环境和改善城市生态环境。调查了常德市丁玲公园的园林树种配置,丁玲公园主要包括纪念馆景观区、湿地景观、休闲娱乐区、民俗文化街,由47科112属92种园林植物组成。纪念馆景观区采取三色... 公园是城市绿色植物的集中区,能够提供良好的生活环境和改善城市生态环境。调查了常德市丁玲公园的园林树种配置,丁玲公园主要包括纪念馆景观区、湿地景观、休闲娱乐区、民俗文化街,由47科112属92种园林植物组成。纪念馆景观区采取三色堇、龙柏、桂花、杜鹃等配置,红色、墨绿、浅绿色搭配,立体性、层次性、多样性分布,突出纪念性以及宁静、肃穆的氛围,以拟人化形式表达哀思之情和仰慕之意。湿地景观以水体为主,以乔草及乔灌草搭配层次分布,突出观赏性、生态性,达到生态性、功能性、艺术性、美观性的统一。休闲娱乐区中合欢、杜仲、苏铁、红花檵木、红叶石楠等规则配置,常绿、落叶搭配,季相变化丰富,突出了宜人性、生态性、趣味性和观赏性。民俗文化街以传统民居建筑群和民俗文化长廊为基础,以香樟、银杏、榉树、栀子花等植物为主,乔灌草层次分布,展示了本土文化和地方特色。 展开更多
关键词 植物配置 公园绿地 园林树种 丁玲公园
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加强网购餐饮食品卫生安全风险管理措施分析 被引量:2
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作者 董笑含 解媛媛 《食品安全导刊》 2020年第35期28-29,共2页
随着信息时代的发展,人们的日常生活变得更加方便快捷,人们的衣食住行方式发生了天翻地覆的变化,本文将针对加强网购餐饮食品卫生安全风险管理的措施进行分析,提高外卖餐饮的卫生程度,切实保障人们的身体健康。随着人们生活节奏的加快,... 随着信息时代的发展,人们的日常生活变得更加方便快捷,人们的衣食住行方式发生了天翻地覆的变化,本文将针对加强网购餐饮食品卫生安全风险管理的措施进行分析,提高外卖餐饮的卫生程度,切实保障人们的身体健康。随着人们生活节奏的加快,越来越多的人选择通过网上订购餐饮的形式省去自己做饭的时间,网络订购餐饮能够极大地便利人们的生活,并且为人们节省了大量的时间. 展开更多
关键词 食品卫生安全 网上订购 网购 风险管理措施 餐饮 信息时代 网络订购 管理的措施
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高职环保专业教学和教学管理的现状 被引量:1
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作者 王慧 《新课程教学(电子版)》 2022年第16期182-184,共3页
伴随生态危机的不断加剧和人们自我意识的增强,高职环保专业教学备受国家关注。在高职院校教育中,加大环保法制宣传及环保教学的重视力度,对更好地建立人与自然的和谐关系以及促进社会经济可持续发展均起到了至关重要的作用。本文围绕... 伴随生态危机的不断加剧和人们自我意识的增强,高职环保专业教学备受国家关注。在高职院校教育中,加大环保法制宣传及环保教学的重视力度,对更好地建立人与自然的和谐关系以及促进社会经济可持续发展均起到了至关重要的作用。本文围绕高职环保专业教学和教学管理的现状进行了探讨,旨在提升高职环保教学成效,仅供大家参考。 展开更多
关键词 高职院校 环保专业 管理现状
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