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题名一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法
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作者
郭果
李赛超
王丽
刘璐
卢燎勋
黄蓉
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机构
新乡医学院医学检验学院
临床检验诊断学河南省研究生创新实践基地
河南省免疫与靶向药物重点实验室河南省分子诊断与医学检验技术协同创新中心
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出处
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2018年第8期101-107,共7页
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基金
国家自然科学基金(81501342)
新乡医学院博士科研启动费(505129)
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文摘
目的建立一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法。方法构建针对小鼠Vav1基因的特异性打靶载体,利用脂质体转染法转染B16小鼠黑色素瘤细胞,使用流式细胞仪对GFP阳性单细胞进行分选,对得到的GFP阳性单克隆细胞使用直接裂解法获取基因组DNA,将其用于荧光PCR,产物通过毛细管电泳和分析后即可快速获知其基因型。结果使用以上方法在短时间内得到了大量GFP阳性单克隆细胞,从中随机挑选16个,通过荧光PCR检测其基因型,结果表明敲除效率为87.5%;通过测序对部分荧光PCR结果进行验证,发现其基因型结果完全正确。结论将CRISPR/Cas9基因编辑系统、流式细胞仪单克隆分选、荧光PCR和大批量DNA样本处理技术结合,可以短时间内在B16小鼠黑色素瘤细胞中获得大量Vav1基因敲除稳定单克隆细胞。
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关键词
CRISPR/Cas9
基因敲除
Vav1基因
流式细胞仪分选
荧光PCR
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Keywords
CRISPR/Cas9
gene knockout
Vavl gene
flow cytometry sorting
fluorescence PCR
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分类号
R-33
[医药卫生]
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