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一种海洋来源蜡样芽孢杆菌α-半乳糖苷酶基因的克隆表达及功能鉴定
被引量：
2
1
作者
江超峰
李悝悝
+2 位作者
李唐
车佳
尹恒
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期44-50,共7页
为获得高效的α-半乳糖苷酶并了解其功能,采用基因工程技术,从鹿角菜中筛选获得的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus中克隆得到一个新的α-半乳糖苷酶基因(BcgalA),并在Escherichia coli BL21(DE3)中成功进行了重组表达。结果表明:BcgalA基...
为获得高效的α-半乳糖苷酶并了解其功能,采用基因工程技术,从鹿角菜中筛选获得的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus中克隆得到一个新的α-半乳糖苷酶基因(BcgalA),并在Escherichia coli BL21(DE3)中成功进行了重组表达。结果表明:BcgalA基因序列编码441个氨基酸,预测的BcGalA蛋白相对分子质量约为50380,生物信息学分析显示,该酶属于GH4家族;酶活试验表明,在37℃、pH 8.0条件下该酶水解4-硝基苯基-α-D-吡喃半乳糖苷(pNP-α-Gal)、棉子糖的比活力分别为(1.498±0.034)、(0.261±0.012)U/mg,但对半乳甘露聚糖无水解活性。研究表明,本研究中克隆表达的BcGalA是一种属于GH4中仅对低分子量底物起作用的α-半乳糖苷酶,为探究GH4α-半乳糖苷酶的结构与功能关系提供了样本。
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关键词
蜡样芽孢杆菌
Α-半乳糖苷酶
GH4
克隆表达
催化机制
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职称材料
曲霉来源果胶裂解酶PnlF的克隆表达及酶学性质分析
被引量：
1
2
作者
宋晓慧
李悝悝
+2 位作者
赵秒
李唐
尹恒
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期25-32,共8页
果胶裂解酶是一类通过β-消除机制降解果胶的多糖裂解酶,对果胶的利用具有重要意义。该研究利用真核表达载体,克隆表达了来自曲霉属Aspergillus costaricensis的酸性果胶裂解酶PnlF,经过亲和层析和凝胶过滤层析对该酶的发酵液进行了分...
果胶裂解酶是一类通过β-消除机制降解果胶的多糖裂解酶,对果胶的利用具有重要意义。该研究利用真核表达载体,克隆表达了来自曲霉属Aspergillus costaricensis的酸性果胶裂解酶PnlF,经过亲和层析和凝胶过滤层析对该酶的发酵液进行了分离纯化,并对其酶学性质和降解果胶的产物进行了系统性研究。该研究成功实现了PnlF在毕赤酵母中的分泌表达,粗酶活力达到526 U/mg。PnlF的最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0;其酶活力在20~30℃及pH 5~6内稳定。Ca^(2+)和Mg^(2+)可以大幅度提高PnlF的活力;而Ag+和Cu^(2+)则会严重抑制其活力;此外SDS、TritonX-100、苯甲磺酰氟等化学试剂对该酶活性的抑制作用较强。
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关键词
果胶裂解酶
重组表达
分离纯化
酶学性质
产物分析
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职称材料
题名
一种海洋来源蜡样芽孢杆菌α-半乳糖苷酶基因的克隆表达及功能鉴定
被引量：
2
1
作者
江超峰
李悝悝
李唐
车佳
尹恒
机构
中科院大连化学物理研究所辽宁省碳水化合物重点实验室
中国科学院大学
化学
科学学院
大连
海洋大学食品科学与工程学院
出处
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期44-50,共7页
基金
国家重点研发计划项目(2017YFD0200902)
国家自然科学基金(31770847)
中国科学院重点部署项目(KFZD-SW-113)。
文摘
为获得高效的α-半乳糖苷酶并了解其功能,采用基因工程技术,从鹿角菜中筛选获得的蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus中克隆得到一个新的α-半乳糖苷酶基因(BcgalA),并在Escherichia coli BL21(DE3)中成功进行了重组表达。结果表明:BcgalA基因序列编码441个氨基酸,预测的BcGalA蛋白相对分子质量约为50380,生物信息学分析显示,该酶属于GH4家族;酶活试验表明,在37℃、pH 8.0条件下该酶水解4-硝基苯基-α-D-吡喃半乳糖苷(pNP-α-Gal)、棉子糖的比活力分别为(1.498±0.034)、(0.261±0.012)U/mg,但对半乳甘露聚糖无水解活性。研究表明,本研究中克隆表达的BcGalA是一种属于GH4中仅对低分子量底物起作用的α-半乳糖苷酶,为探究GH4α-半乳糖苷酶的结构与功能关系提供了样本。
关键词
蜡样芽孢杆菌
Α-半乳糖苷酶
GH4
克隆表达
催化机制
Keywords
Bacillus cereus
α-galactosidase
GH4
clone and expression
catalytic mechanism
分类号
Q556.2 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
曲霉来源果胶裂解酶PnlF的克隆表达及酶学性质分析
被引量：
1
2
作者
宋晓慧
李悝悝
赵秒
李唐
尹恒
机构
大连
工业大学纺织与材料工程学院
中科院大连化学物理研究所辽宁省碳水化合物重点实验室
大连
市糖类农用制剂工程
研究
中心
出处
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第1期25-32,共8页
基金
大连市科技创新基金计划重点学科重大课题项目(2020JJ25CY017)
陕西省重点研发计划项目(2020ZDLNY07-03)。
文摘
果胶裂解酶是一类通过β-消除机制降解果胶的多糖裂解酶,对果胶的利用具有重要意义。该研究利用真核表达载体,克隆表达了来自曲霉属Aspergillus costaricensis的酸性果胶裂解酶PnlF,经过亲和层析和凝胶过滤层析对该酶的发酵液进行了分离纯化,并对其酶学性质和降解果胶的产物进行了系统性研究。该研究成功实现了PnlF在毕赤酵母中的分泌表达,粗酶活力达到526 U/mg。PnlF的最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0;其酶活力在20~30℃及pH 5~6内稳定。Ca^(2+)和Mg^(2+)可以大幅度提高PnlF的活力;而Ag+和Cu^(2+)则会严重抑制其活力;此外SDS、TritonX-100、苯甲磺酰氟等化学试剂对该酶活性的抑制作用较强。
关键词
果胶裂解酶
重组表达
分离纯化
酶学性质
产物分析
Keywords
pectin lyase
recombinant expression
purification
enzymatic properties
product analysis
分类号
TS201.25 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种海洋来源蜡样芽孢杆菌α-半乳糖苷酶基因的克隆表达及功能鉴定
江超峰
李悝悝
李唐
车佳
尹恒
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
在线阅读
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职称材料
2
曲霉来源果胶裂解酶PnlF的克隆表达及酶学性质分析
宋晓慧
李悝悝
赵秒
李唐
尹恒
《食品与发酵工业》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
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职称材料
已选择
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参考文献
引证文献
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