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霍山石斛糖蛋白的提取方法优选及抗氧化活性分析
被引量：
8
1
作者
邓辉
崔绍进
+3 位作者
朱富成
韩邦兴
陈乃东
陈乃富
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期107-111,共5页
以道地药材——霍山石斛鲜茎为试验材料,分别按提取蛋白的盐溶液浸法和提取多糖的水提醇沉法,在4℃条件下提取糖蛋白,考察比对其提取效果,以及不同糖蛋白组分的抗氧化活性。由两种方法获得的提取液分别经硫酸铵分级沉淀和乙醇分级沉淀,...
以道地药材——霍山石斛鲜茎为试验材料,分别按提取蛋白的盐溶液浸法和提取多糖的水提醇沉法,在4℃条件下提取糖蛋白,考察比对其提取效果,以及不同糖蛋白组分的抗氧化活性。由两种方法获得的提取液分别经硫酸铵分级沉淀和乙醇分级沉淀,获得6组糖蛋白提取液,经SDS-PAGE电泳,蛋白染色和糖染色确定提取效果。结果表明:盐溶液浸提法获得的糖蛋白谱带在浓度、数量和分子量范围上都显著高于水提醇沉法。体外抗氧化试验表明,谱带多态性较高的糖蛋白提取液具有较高的清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力。实验进一步通过单因素和正交试验确定了盐溶液浸提霍山石斛糖蛋白的最佳条件:NaCl溶液浓度0.3 mol/L、液料比16∶1、提取时间12 h。在此条件下,粗糖蛋白得率(12.56±0.35)%。
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关键词
霍山石斛
糖蛋白
提取方法
抗氧化活性
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职称材料
Ⅱ型葡萄糖异构酶N端随机卷曲序列的嫁接效应
2
作者
邓辉
王广林
+1 位作者
陈乃东
陈乃富
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期953-961,共9页
木糖/葡萄糖异构酶(xylose/glucose isomerase,XIase/GIase)是果葡糖浆生产的关键用酶,也是重要的模式酶,其组成域的结构和功能一直是研究的热点。本研究采用重叠PCR技术将源自超嗜热菌Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus的Ⅱ型...
木糖/葡萄糖异构酶(xylose/glucose isomerase,XIase/GIase)是果葡糖浆生产的关键用酶,也是重要的模式酶,其组成域的结构和功能一直是研究的热点。本研究采用重叠PCR技术将源自超嗜热菌Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus的Ⅱ型葡萄糖异构酶(TTGIase)N端31个氨基酸序列融合到嗜热菌Thermobifida fusca的I型葡萄糖异构酶(TFGIase)的N端,构建了融合蛋白NTFGIase。发酵实验结果显示,在相同培养和诱导条件下,N-TFGIase菌体单位浓度产酶量比TFGIase高出约40%;酶学检测结果显示,N-TFGIase比酶活较TFGIase高出26%,最适温度较TFGIase高出5℃,75℃下的半衰期较TFGIase延长30%,最适p H较TFGIase降低1.0。序列分析表明,TTGIase N端序列的mRNA二级结构不形成有阻碍的颈环结构,提高了融合蛋白的表达效率;其含有的31个氨基酸残基的疏水性指数均小于0,利于融合蛋白的初始折叠和包装;其含有的酸性氨基酸残基比例约为碱性氨基酸残基比例的两倍,减小了酸性介质环境对融合蛋白分子表面的影响。实验结果提示,将来自超嗜热菌的Ⅱ型XIase/GIase的N端随机卷曲序列融合到I型XIase/GIase N端,能够提高后者的热稳定性、酸稳定性和表达效率等酶学性质,与我们的预测结果相一致,这为酶的分子改造和生产应用提供了参考。
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关键词
融合蛋白
Ⅱ型木糖/葡萄糖异构酶N端序列
嫁接效应
序列分析
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职称材料
题名
霍山石斛糖蛋白的提取方法优选及抗氧化活性分析
被引量：
8
1
作者
邓辉
崔绍进
朱富成
韩邦兴
陈乃东
陈乃富
机构
皖西学院生物与制药工程学院
中科院云计算中心公共安全研究院
安徽省中药资源保护与持续利用工程实验室
安徽省石斛产业化开发协同创新
中心
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第2期107-111,共5页
基金
国家自然科学基金(81573536)
安徽省科技厅自然科学基金(1808085MH307)
+3 种基金
安徽省杰出青年科学基金项目(1808085J17)
2017安徽高校优秀青年人才支持计划项目(gxyq2017057)
皖西学院自然科学基金(WXZR201616
WXZR201816)
文摘
以道地药材——霍山石斛鲜茎为试验材料,分别按提取蛋白的盐溶液浸法和提取多糖的水提醇沉法,在4℃条件下提取糖蛋白,考察比对其提取效果,以及不同糖蛋白组分的抗氧化活性。由两种方法获得的提取液分别经硫酸铵分级沉淀和乙醇分级沉淀,获得6组糖蛋白提取液,经SDS-PAGE电泳,蛋白染色和糖染色确定提取效果。结果表明:盐溶液浸提法获得的糖蛋白谱带在浓度、数量和分子量范围上都显著高于水提醇沉法。体外抗氧化试验表明,谱带多态性较高的糖蛋白提取液具有较高的清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力。实验进一步通过单因素和正交试验确定了盐溶液浸提霍山石斛糖蛋白的最佳条件:NaCl溶液浓度0.3 mol/L、液料比16∶1、提取时间12 h。在此条件下,粗糖蛋白得率(12.56±0.35)%。
关键词
霍山石斛
糖蛋白
提取方法
抗氧化活性
Keywords
Dendrobium huoshanense
glycoprotein
extraction method
antioxidant activity
分类号
Q513.2 [生物学—生物化学]
R285 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
Ⅱ型葡萄糖异构酶N端随机卷曲序列的嫁接效应
2
作者
邓辉
王广林
陈乃东
陈乃富
机构
皖西学院生物与制药工程学院
中科院云计算中心公共安全研究院
六安市蛋白质分离与纯化
研究
中心
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第8期953-961,共9页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划
No.2012AA021500)
+2 种基金
国家自然科学基金(No.81274021
No.81573536)
皖西学院校级自然科学基金(No.WXZR201616)资助~~
文摘
木糖/葡萄糖异构酶(xylose/glucose isomerase,XIase/GIase)是果葡糖浆生产的关键用酶,也是重要的模式酶,其组成域的结构和功能一直是研究的热点。本研究采用重叠PCR技术将源自超嗜热菌Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus的Ⅱ型葡萄糖异构酶(TTGIase)N端31个氨基酸序列融合到嗜热菌Thermobifida fusca的I型葡萄糖异构酶(TFGIase)的N端,构建了融合蛋白NTFGIase。发酵实验结果显示,在相同培养和诱导条件下,N-TFGIase菌体单位浓度产酶量比TFGIase高出约40%;酶学检测结果显示,N-TFGIase比酶活较TFGIase高出26%,最适温度较TFGIase高出5℃,75℃下的半衰期较TFGIase延长30%,最适p H较TFGIase降低1.0。序列分析表明,TTGIase N端序列的mRNA二级结构不形成有阻碍的颈环结构,提高了融合蛋白的表达效率;其含有的31个氨基酸残基的疏水性指数均小于0,利于融合蛋白的初始折叠和包装;其含有的酸性氨基酸残基比例约为碱性氨基酸残基比例的两倍,减小了酸性介质环境对融合蛋白分子表面的影响。实验结果提示,将来自超嗜热菌的Ⅱ型XIase/GIase的N端随机卷曲序列融合到I型XIase/GIase N端,能够提高后者的热稳定性、酸稳定性和表达效率等酶学性质,与我们的预测结果相一致,这为酶的分子改造和生产应用提供了参考。
关键词
融合蛋白
Ⅱ型木糖/葡萄糖异构酶N端序列
嫁接效应
序列分析
Keywords
fusion protein
N-terminal sequence of classⅡxylose/glucose isomerase
grafting effects
sequence analysis
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
霍山石斛糖蛋白的提取方法优选及抗氧化活性分析
邓辉
崔绍进
朱富成
韩邦兴
陈乃东
陈乃富
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
8
在线阅读
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职称材料
2
Ⅱ型葡萄糖异构酶N端随机卷曲序列的嫁接效应
邓辉
王广林
陈乃东
陈乃富
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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职称材料
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