血管紧张素-(1-7)/Mas受体轴通过调控NF-κB通路保护心肌细胞对抗高糖诱导的损伤 被引量：9

1

作者 梁伟杰 陈景福 +5 位作者 宋明才 莫利求 潘玩莹 李健豪 冯鉴强 张稳柱 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期267-273,共7页

目的：探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]/Mas受体轴能否通过抑制核因子-κB（NF-κB）通路对抗高糖（HG）引起的心肌细胞损伤。方法：应用细胞计数检测试剂盒（CCK-8）检测心肌细胞存活率;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相... 目的：探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]/Mas受体轴能否通过抑制核因子-κB（NF-κB）通路对抗高糖（HG）引起的心肌细胞损伤。方法：应用细胞计数检测试剂盒（CCK-8）检测心肌细胞存活率;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧（ROS）水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞的形态及数量的变化;JC-1染色法测定线粒体膜电位（MMP）;应用免疫蛋白印迹法测定NF-κB p65和cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果：应用35 mmol/L葡萄糖分别处理H9c2心肌细胞30、60、90、120和150 min均能明显增加磷酸化（p）NF-κB p65的水平,其中60 min时,表达水平增加最明显;1μmol/L Ang-（1-7）与HG共同处理心肌细胞60 min能抑制HG对p-NF-κB p65表达的上调作用;0.1-30μmol/L的Ang-（1-7）与HG分别共处理心肌细胞24 h均能抑制HG的细胞毒性,使细胞存活率增多;另一方面,1μmol/L Ang-（1-7）能抑制HG引起的细胞凋亡、氧化应激、线粒体损伤等,使凋亡细胞数量、cleaved caspase-3表达、ROS生成水平及MMP丢失减少;但是10μmol/L Ang-（1-7）/Mas受体拮抗剂A-779能明显阻断上述的Ang-（1-7）的心肌细胞保护作用;与Ang-（1-7）的作用相似,100μmol/L PDTC（NF-κB抑制剂）与HG共处理心肌细胞24 h也能显著抑制上述的HG损伤作用。结论：Ang-（1-7）/Mas受体轴可通过抑制NF-κB通路对抗HG诱导的心肌细胞损伤。 展开更多

关键词 血管紧张素-(1-7) 高血糖 MAS受体 核因子-ΚB 心肌细胞

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硫化氢通过抑制p38 MAPK保护PC12细胞对抗化学性缺氧损伤 被引量：24

2

作者 兰爱平 梅卫义 +5 位作者 孟金兰 胡芬 杨春涛 杨战利 陈培熹 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1339-1344,共6页

目的探讨硫化氢(H2S)是否通过抑制p38MAPK保护PC12细胞对抗化学性缺氧诱导的损伤。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hochest33258核染色法观察细胞凋亡的形... 目的探讨硫化氢(H2S)是否通过抑制p38MAPK保护PC12细胞对抗化学性缺氧诱导的损伤。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hochest33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照像检测细胞内的活性氧(ROS);罗丹明123(RH123)染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测p38MAPK蛋白的表达水平。结果应用600μmol·L-1CoCl2处理PC12细胞2h可使磷酸化(p)p38明显增多;在应用600μmol·L-1CoCl2处理PC12细胞前30min,应用400μmol·L-1硫氢化钠(NaHS,H2S的供体)预处理细胞不仅可明显的抑制CoCl2诱导的p-p38MAPK表达的增多,还能保护PC12细胞对抗600μmol·L-1CoCl2引起的损伤,使细胞存活率升高,凋亡细胞和胞内ROS水平明显降低,MMP丢失减小;在CoCl2损伤PC12细胞前60min应用p38抑制剂SB302580(20μmol·L-1)预处理也能产生类似NaHS预处理的细胞保护作用。结论 p38MAPK介导CoCl2引起PC12细胞的损伤作用;H2S通过抑制p38MAPK的表达及氧化应激反应保护PC12细胞对抗化学性缺氧引起的损伤作用。 展开更多

关键词 硫化氢 预处理 氯化钴 P38MAPK 活性氧 线粒体膜电位 凋亡

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JNK信号通路介导化学性缺氧对PC12细胞的损伤作用 被引量：3

3

作者 兰爱平 莫利求 +6 位作者 郑东诞 胡芬 郭润民 沈宁 郭瑞鲜 冯鉴强 陈培熹 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期62-66,共5页

目的探讨C-Jun蛋白氨基末端激酶(C-Jun N-termi-nal kinase,JNK)通路在化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)对PC12细胞损伤中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞以建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞... 目的探讨C-Jun蛋白氨基末端激酶(C-Jun N-termi-nal kinase,JNK)通路在化学性缺氧模拟剂氯化钴(CoCl2)对PC12细胞损伤中的作用。方法应用化学性低氧模拟剂氯化钴(CoCl2)处理PC12细胞以建立化学性缺氧损伤模型。应用CCK-8比色法检测细胞存活率;Hoechst33258核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;JC-1染色荧光显微镜照像检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测JNK蛋白的表达水平。结果 600μmol.L-1CoCl2作用PC12细胞不同时间(12～48 h)后,可时间依赖性地抑制PC12细胞的存活率;600μmol.L-1的CoCl2处理PC12细胞48 h时,可引起细胞出现核固缩等典型的凋亡特征;CoCl2能明显的降低PC12细胞的MMP;CoCl2能诱导JNK的磷酸化,特异性的JNK阻断剂SP600125可抑制CoCl2对PC12细胞的上述损伤作用。结论 CoCl2可引起PC12细胞损伤,此作用可能与其诱导JNK磷酸化有关。 展开更多

关键词 CoCl2 C-Jun蛋白氨基末端激酶 线粒体膜电位 凋亡 SP600125 PC12细胞

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胞外信号调节激酶1/2通路在阿霉素引起的心肌细胞损伤中的作用 被引量：2

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作者 张莉莉 赖东平 +5 位作者 王秀玉 郑东诞 郭润民 沈宁 陈培熹 冯鉴强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期961-966,共6页

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)通路在阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的心肌细胞损伤中的作用。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立细胞损伤的体外模型,在DOX处理前应用ERK 1/2抑制剂PD98059抑制ERK 1/2的活化;检测细胞存活率、ERK ... 目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)通路在阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的心肌细胞损伤中的作用。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立细胞损伤的体外模型,在DOX处理前应用ERK 1/2抑制剂PD98059抑制ERK 1/2的活化;检测细胞存活率、ERK 1/2的活化、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)以及胱硫醚γ-裂解酶(CSE,为内源性硫化氢的合成酶)的表达。结果 5μmol·L-1DOX处理H9c2心肌细胞1～6 h,呈时间依赖性地促进ERK1/2的活化;5μmol·L-1DOX对心肌细胞具有明显的损伤作用,表现为细胞存活率下降、ROS水平升高、MMP丢失及CSE表达降低;在DOX处理H9c2心肌细胞前30min,应用ERK1/2抑制剂10μmol·L-1PD-98059预处理能明显拮抗DOX对心肌细胞的损伤作用,使ROS水平降低,细胞存活率MMP和CSE表达水平均升高。结论 ERK1/2通路参与DOX对H9c2心肌细胞的损伤作用。 展开更多

关键词 阿霉素 心肌毒性 H9C2心肌细胞 氧自由基 线粒体膜电位 胞外信号调节激酶1/2

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硫化氢通过抑制坏死性凋亡对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤 被引量：15

5

作者 梁伟杰 何洁仪 +6 位作者 张稳柱 余盛龙 陈君 宋明才 陈景福 郑东诞 廖新学 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期385-391,共7页

目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)能否通过调控坏死性凋亡(necroptosis)对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤。方法:应用Western blot法检测心肌细胞内能反映坏死性凋亡的RIP3蛋白和cleaved caspase-3蛋白的水平;细胞计数盒测定... 目的:探讨硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)能否通过调控坏死性凋亡(necroptosis)对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤。方法:应用Western blot法检测心肌细胞内能反映坏死性凋亡的RIP3蛋白和cleaved caspase-3蛋白的水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法测定凋亡细胞的数量。结果:应用HG(35 mmol/L葡萄糖)处理H9c2心肌细胞3 h、6 h、9 h、12 h和24 h均能明显地上调RIP3蛋白的表达水平,其中24 h时RIP3蛋白水平增加最明显。400μmol/L硫氢化钠(Na HS;为H_2S的供体)预处理或坏死性凋亡的特异性阻断剂necrostatin-1(Nec-1;100μmol/L)共处理心肌细胞均能明显地抑制HG对RIP3蛋白表达的上调作用。此外,Na HS预处理或Nec-1共处理心肌细胞均显著地抑制HG引起的心肌细胞损伤,使细胞存活率升高,ROS生成及MMP丢失减少。另一方面,400μmol/L Na HS预处理心肌细胞能使凋亡细胞数量及cleaved caspase-3表达明显减少。结论:H_2S可通过抑制坏死性凋亡保护心肌细胞,对抗高糖引起的损伤。 展开更多

关键词 坏死性凋亡 硫化氢 高糖 心肌细胞

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ATP敏感性钾通道在硫化氢抑制高糖引起的心肌细胞损伤中的作用 被引量：9

6

作者 梁伟杰 陈景福 +6 位作者 张稳柱 莫利求 郑东诞 宋明才 潘玩莹 冯鉴强 廖新学 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期785-790,共6页

目的：研究ATP敏感性钾通道（ KATP通道）在硫化氢（ H2 S）抑制高糖引起心肌损伤中的作用。方法：应用Western blot 法检测心肌细胞KATP通道蛋白的表达水平；CCK-8试剂盒测定心肌细胞存活率；Hoechst 33258染色测定凋亡细胞数量的变化... 目的：研究ATP敏感性钾通道（ KATP通道）在硫化氢（ H2 S）抑制高糖引起心肌损伤中的作用。方法：应用Western blot 法检测心肌细胞KATP通道蛋白的表达水平；CCK-8试剂盒测定心肌细胞存活率；Hoechst 33258染色测定凋亡细胞数量的变化；JC-1染色法测定线粒体膜电位（ MMP ）。结果：应用高糖（35 mmol／L葡萄糖）处理H9c2细胞1～24 h，其中6 h、9 h、12 h和24 h均能明显下调KATP通道蛋白的水平，12 h和24 h KATP水平降至最低。在HG处理心肌细胞12 h前，应用400μmol／L硫氢化钠（ NaHS，为H2 S的供体）预处理30 min明显抑制高糖对KATP通道蛋白表达的下调作用。100μmol／L线粒体KATP通道开放剂二氮嗪和50μmol／L非选择性KATP通道开放剂吡拉地尔（ Pin）及NaHS预处理均显著抑制高糖引起的心肌细胞损伤，使细胞存活率升高，凋亡细胞数量及MMP丢失减少。相反，100μmol／L线粒体KATP通道阻断剂5-羟基癸酸和1 mmol／L非选择性KATP通道阻断剂格列本脲均能明显阻断上述NaHS的心肌细胞保护作用。结论：KATP通道介导了H2 S对高糖引起的心肌细胞损伤的抑制作用。 展开更多

关键词 ATP敏感性钾通道 硫化氢 心肌细胞

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外源性硫化氢通过调控瘦素/瘦素受体通路抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤 被引量：4

7

作者 吴冬波 陈景福 +3 位作者 许庆 林佳琼 廖静秋 吴文 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1055-1061,共7页

目的探讨外源性硫化氢（H2S）能否通过调控瘦素/瘦素受体（LEPR）通路抑制高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤。方法 CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相检测凋亡细胞的形态学和数量改变;双氯荧光素（DCFH... 目的探讨外源性硫化氢（H2S）能否通过调控瘦素/瘦素受体（LEPR）通路抑制高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤。方法 CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相检测凋亡细胞的形态学和数量改变;双氯荧光素（DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位（MMP）水平;Western blotting法测定瘦素及瘦素受体蛋白的表达水平。结果应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 324 h可以明显上调瘦素、瘦素受体的表达水平,在高糖处理9 h时瘦素、瘦素受体的表达水平达到峰值;在高糖处理HUVECs前,400μmol/L硫氢化钠（NaHS,为H2S的供体）预处理30 min能明显抑制高糖对瘦素及瘦素受体表达的上调作用;400μmol/L NaHS预处理HUVECs 30 min、50 ng/m L瘦素拮抗剂（LA）预处理HUVECs 1 h均可明显抑制高糖引起的HUVECs损伤,使细胞存活率升高,细胞凋亡数量减少,胞内活性氧（ROS）堆积及MMP降低（P<0.01）。结论外源性H2S通过抑制瘦素/瘦素受体通路对抗高糖引起的HUVECs损伤。 展开更多

关键词 硫化氢 瘦素 瘦素受体 高糖 人脐静脉内皮细胞

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ATP敏感性钾通道的开放通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症 被引量：5

8

作者 梁伟杰 陈美姬 +6 位作者 何洁仪 黄惠敏 余盛龙 陈君 陈景福 宋明才 廖新学 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1153-1160,共8页

目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞... 目的:探讨开放ATP敏感性钾通道(K_(ATP)通道)能否抑制Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路对抗高糖(HG)引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症。方法:应用Western blot测定TLR4和NF-κB p65的蛋白水平;应用ELISA法检测细胞培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定心肌细胞存活率;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(MMP);双氯荧光素染色荧光显微镜照相法测定细胞内活性氧簇(ROS)水平;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相法检测凋亡细胞数量。结果:H9c2心肌细胞经HG(35 mmol/L葡萄糖)处理24 h,胞内TLR4和磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)的蛋白水平明显增加,100μmol/L K_(ATP)通道开放剂二氮嗪(DZ)预处理30 min可抑制HG对TLR4和p-NF-κB p65蛋白水平的上调作用;此外,30μmol/L TAK-242(TLR4抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h也可减轻HG对p-NF-κB p65的上调作用。另一方面,100μmol/L DZ预处理有明确的心肌保护作用,可抑制HG引起的细胞毒性、炎症反应、线粒体损伤、氧化应激和细胞凋亡,使细胞存活率升高,并减少IL-1β和TNF-α分泌水平、MMP丢失、ROS生成及凋亡细胞数量;而30μmol/L TAK-242或100μmol/L PDTC(NF-κB抑制剂)共处理心肌细胞24 h也可发挥和DZ相类似的作用,能抑制HG引起的上述损伤和炎症反应。结论:开放K_(ATP)通道可通过抑制TLR4/NF-κB通路对抗HG引起的H9c2肌细胞损伤和炎症。 展开更多

关键词 ATP敏感性钾通道 Toll样受体4 核因子-κB 高糖 心肌细胞 损伤 炎症

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ATP敏感性钾通道-Akt通路在硫化氢对抗高糖损伤H9c2心肌细胞中的作用 被引量：2

9

作者 梁伟杰 陈景福 +5 位作者 何洁仪 宋明才 余盛龙 张稳柱 郑东诞 廖新学 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期530-536,共7页

目的研究ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive K+channel,KATP通道)-Akt通路在外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用Western blot法检测心肌细胞Akt蛋白的表达水平;细胞计数盒测定心肌细胞... 目的研究ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive K+channel,KATP通道)-Akt通路在外源性硫化氢(hydrogen sulfide,H_2S)对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用Western blot法检测心肌细胞Akt蛋白的表达水平;细胞计数盒测定心肌细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相测定凋亡细胞数量的变化;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;JC-1染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。结果应用高糖(35 mmol·L^(-1),HG)处理H9c2心肌细胞0~24 h,其中3 h起磷酸化(p)-Akt蛋白表达水平开始明显下降,24 h p-Akt表达水平降至最低。在HG处理心肌细胞24 h前,应用50μmol·L^(-1)KATP通道开放剂吡拉地尔(pinacidil,Pin)和400μmol·L^(-1)硫氢化钠(NaHS,为H_2S的供体)预处理30 min均能明显地抑制HG对p-Akt表达的下调作用。应用1mmol·L^(-1)K_(ATP)通道阻断剂格列本脲(glibenclamide,Gli)预处理心肌细胞能阻断NaHS对HG下调p-Akt表达水平的抑制作用。此外,30μmol·L^(-1)Akt的抑制剂LY294002能明显阻断NaHS对抗HG损伤心肌细胞的保护作用,表现为细胞存活率和MMP降低,凋亡细胞数量、ROS生成增多。结论 K_(ATP)通道-Akt通路介导H_2S对抗高糖引起的心肌细胞损伤的保护作用。 展开更多

关键词 ATP敏感性钾通道 AKT通路 硫化氢 高血糖 损伤 心肌细胞

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坏死性凋亡和p38MAPK通路的相互作用介导高糖引起的H9c2心肌细胞损伤 被引量：2

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作者 梁伟杰 何洁仪 +6 位作者 陈君 余盛龙 张稳柱 宋明才 陈景福 冯鉴强 廖新学 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1138-1144,共7页

目的研究坏死性凋亡(necroptosis,Nec)和p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的相互作用在高糖引起H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用细胞计数盒检测心肌细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检... 目的研究坏死性凋亡(necroptosis,Nec)和p38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路的相互作用在高糖引起H9c2心肌细胞损伤中的作用。方法应用细胞计数盒检测心肌细胞存活率;双氯荧光素染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);蛋白质免疫印迹法测定RIP3蛋白(反映Nec的指标)和p38MAPK蛋白的表达水平。结果高糖(35 mmol·L^(-1)葡萄糖,HG)作用H9c2心肌细胞24 h可引起明显的细胞损伤,表现为细胞存活率降低,ROS生成及MMP丢失增多;应用100μmol·L^(-1)necrostatin-1(Nec-1,Nec特异性抑制剂)和HG共处理心肌细胞24 h或3μmol·L^(-1)SB203580(p38MAPK抑制剂)预处理心肌细胞60 min,再予HG作用24 h可减轻高糖引起的上述损伤。此外,HG作用心肌细胞1、3、6、9、12、24、36和48 h均能明显增加RIP3蛋白的表达水平,其中24 h时表达水平增加最明显。应用100μmol·L^(-1)Nec-1共处理或3μmol·L^(-1)SB203580预处理心肌细胞均能明显地抑制HG对RIP3蛋白表达的上调作用。另一方面,应用100μmol·L^(-1)Nec-1共处理心肌细胞能阻断HG对磷酸化(p)-p38MAPK表达的上调作用。结论 Nec和p38 MAPK通路的相互作用介导高糖引起H9c2心肌细胞损伤。 展开更多

关键词 坏死性凋亡 P38丝裂原激活蛋白激酶 相互作用 高糖 心肌细胞 损伤

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硫化氢通过抑制p38MAPK通路和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9C2心肌细胞损伤和炎症

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作者 梁伟杰 陈美姬 +5 位作者 何洁仪 陈景福 郑东诞 李健豪 张稳柱 廖新学 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期649-656,共8页

【目的】探讨外源性硫化氢(H2S)能否通过抑制p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)通路和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9C2心肌细胞损伤和炎症。【方法】采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测心肌细胞的存活率;ELISA法检测细胞培养液中白... 【目的】探讨外源性硫化氢(H2S)能否通过抑制p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)通路和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的H9C2心肌细胞损伤和炎症。【方法】采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测心肌细胞的存活率;ELISA法检测细胞培养液中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)测定p38MAPK和RIP3蛋白(反映坏死性凋亡的指标)的蛋白水平;双氯荧光素染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧(ROS)水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位(MMP)。【结果】H9C2心肌细胞经35 mmol/L葡萄糖(高糖,HG)作用24 h,胞内RIP3的蛋白水平明显增加,应用3μmol/L SB203580(p38 MAPK抑制剂)预处理心肌细胞60 min能明显地抑制HG对RIP3蛋白水平的上调作用;另一方面,HG可上调磷酸化(p)p38 MAPK的蛋白水平,应用100μmol/L necrostatin-1(Nec-1,坏死性凋亡的特异性抑制剂)共处理心肌细胞24 h能阻断HG对p-p38 MAPK蛋白水平的上调作用;而400μmol/L Na HS(为H2S的供体)预处理心肌细胞30 min能同时抑制HG对RIP3和p-p38 MAPK蛋白水平的上调作用。此外,400μmol/L Na HS、3μmol/L SB203580预处理或100μmol/L Nec-1共处理心肌细胞均可抑制HG引起的心肌细胞毒性、氧化应激、线粒体损伤和炎症反应,使细胞存活率升高,ROS生成、MMP丢失及IL-1β和TNF-ɑ的分泌水平减少。【结论】抑制p38 MAPK通路和坏死性凋亡的相互作用可能是外源性H2S对抗高糖引起的H9c2心肌细胞损伤和炎症的重要作用机制之一。 展开更多

关键词 硫化氢 P38丝裂原激活蛋白激酶 坏死性凋亡 相互作用 高糖 心肌细胞

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