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骨髓间充质干细胞通过上调EPO表达减轻缺氧损伤引起的PC12细胞凋亡 被引量:6
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作者 莫世静 童秀珍 +1 位作者 钟茜 邓宇斌 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期62-69,共8页
目的:观察骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞缺氧损伤及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:将PC12细胞分为以下几组:空白对照组、CoCl2处理组、BM-MSCs-siCTL+CoCl2处理组和BM-MSCs-siEPO+CoCl2处理组。应用MTT... 目的:观察骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞缺氧损伤及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:将PC12细胞分为以下几组:空白对照组、CoCl2处理组、BM-MSCs-siCTL+CoCl2处理组和BM-MSCs-siEPO+CoCl2处理组。应用MTT、流式细胞术(FCM)及Hoechst 33258染色法检测BM-MSCs对CoCl2诱导的细胞活性下降及凋亡的影响。采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blotting检测BM-MSCs的促红细胞生成素(EPO)表达情况。同时通过RT-PCR法检测PC12细胞的Bcl-2与Bax表达情况。此外应用分光光度法检测caspase-9和-3活性。结果:MTT结果显示BM-MSCs共培养能够提高PC12细胞活力,0.6 mmol/L CoCl2单独处理组24 h和48 h细胞存活率仅为(43.0±6.4)%和(33.8±5.7)%,1∶15细胞比BM-MSCs共培养24 h和48 h后细胞存活率明显上升,分别为(77.9±3.8)%和(75.2±9.7)%(P<0.01)。RT-PCR和Western blotting显示0.6mmol/L CoCl2处理24 h和48 h明显诱导BM-MSCs的EPO表达上调,而EPO siRNA可完全抑制BM-MSCs的EPO表达(P<0.01)。FCM及Hoechst 33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,BM-MSCs-siCTL与PC12细胞共培养可有效抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡,而EPO siRNA可明显阻断BM-MSCs的抗细胞凋亡作用(P<0.01)。RT-PCR结果显示BM-MSCs共培养组PC12细胞的Bcl-2表达较CoCl2处理组明显升高,而Bax表达较CoCl2处理组明显降低;EPO siRNA明显抑制BM-MSCs介导的Bcl-2表达升高和Bax表达降低(P<0.01)。分光光度法结果显示BM-MSCs-siCTL共培养组的caspase-9和-3活性较CoCl2处理组明显降低,而BM-MSCs-siEPO共培养组的caspase-9和-3活性较BM-MSCs-siCTL共培养组明显增加(P<0.01)。结论:BM-MSCs共培养能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与其上调EPO的表达有关。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 促红细胞生成素 PC12细胞 细胞凋亡
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人骨髓间质干细胞诱导成骨分化蛋白质的鉴定及生物信息学分析 被引量:1
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作者 张爱霞 余伟华 +2 位作者 王涛 马保锋 徐彩霞 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期275-279,共5页
目的:通过蛋白质组学和生物信息学技术建立人骨髓间质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h MSCs)诱导成骨分化蛋白表达谱,为进一步阐明h MSCs的成骨分化机制提供基础资料。方法:收集h MSCs诱导成骨分化的全蛋白,应用双... 目的:通过蛋白质组学和生物信息学技术建立人骨髓间质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,h MSCs)诱导成骨分化蛋白表达谱,为进一步阐明h MSCs的成骨分化机制提供基础资料。方法:收集h MSCs诱导成骨分化的全蛋白,应用双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)技术和图像分析软件进行蛋白质点的识别和检测,选择清晰表达的蛋白质点,应用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectromety,MALDI-TOF-MS)和生物信息学方法进行蛋白质的鉴定和分析。结果:通过MALDI-TOF-MS和生物信息学鉴定了77种蛋白质;建立了h MSCs诱导成骨分化蛋白质表达谱;利用Gene Ontology对这些蛋白按分子功能和生物学途径进行了归类。结论:成功建立了h MSCs诱导成骨分化蛋白质表达谱;为进一步阐明h MSCs成骨分化的分子机制提供了基础资料,为进一步构建h MSCs诱导成骨分化蛋白质表达数据库奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 骨髓间质干细胞 蛋白质组学 成骨分化 质谱鉴定 生物信息学
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