目的:在以前的mRNA差异显示研究中我们发现原发性静脉功能不全患者的病变静脉组织中存在desmuslin基因的差异表达。本研究的目的是从基因的转录和翻译水平对此进行验证。方法:将差异显示中获得的cDNA制备成探针,并根据desmuslin mRNA序...目的:在以前的mRNA差异显示研究中我们发现原发性静脉功能不全患者的病变静脉组织中存在desmuslin基因的差异表达。本研究的目的是从基因的转录和翻译水平对此进行验证。方法:将差异显示中获得的cDNA制备成探针,并根据desmuslin mRNA序列合成特异性PCR引物,分别采用Northern b lotting和半定量RT-PCR技术检测病变静脉组织中desmuslin的表达水平。同时利用Yu jiM izuno惠赠的desmuslin特异性单克隆抗体,通过W estern b lotting和免疫组化技术检测病变静脉组织内DMN蛋白的含量。结果:在原发性下肢静脉功能不全患者的病变静脉组织中,desmuslin mRNA的表达量明显少于对照组(半定量RT-PCR:病例组0.19±0.05vs对照组0.83±0.08,P<0.01;Northern b lotting:病例组0.06±0.02vs对照组0.24±0.04,P<0.01),W estern b lotting显示其蛋白质表达量也明显少于对照组(病例组0.25±0.06vs对照组1.03±0.13,P<0.01)。免疫组化表明:DMN蛋白大量分布于正常静脉管壁血管平滑肌细胞的胞浆中,平均阳性细胞百分率为83.7%±6.2%;而病例组中信号较少且弱,平均阳性细胞百分率为21.2%±8.3%,差异显著(P<0.01)。结论:原发性下肢静脉功能不全患者的病变静脉组织中desmuslin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调,这可能与病变静脉组织的形态学改变有一定的关系。展开更多
文摘目的:在以前的mRNA差异显示研究中我们发现原发性静脉功能不全患者的病变静脉组织中存在desmuslin基因的差异表达。本研究的目的是从基因的转录和翻译水平对此进行验证。方法:将差异显示中获得的cDNA制备成探针,并根据desmuslin mRNA序列合成特异性PCR引物,分别采用Northern b lotting和半定量RT-PCR技术检测病变静脉组织中desmuslin的表达水平。同时利用Yu jiM izuno惠赠的desmuslin特异性单克隆抗体,通过W estern b lotting和免疫组化技术检测病变静脉组织内DMN蛋白的含量。结果:在原发性下肢静脉功能不全患者的病变静脉组织中,desmuslin mRNA的表达量明显少于对照组(半定量RT-PCR:病例组0.19±0.05vs对照组0.83±0.08,P<0.01;Northern b lotting:病例组0.06±0.02vs对照组0.24±0.04,P<0.01),W estern b lotting显示其蛋白质表达量也明显少于对照组(病例组0.25±0.06vs对照组1.03±0.13,P<0.01)。免疫组化表明:DMN蛋白大量分布于正常静脉管壁血管平滑肌细胞的胞浆中,平均阳性细胞百分率为83.7%±6.2%;而病例组中信号较少且弱,平均阳性细胞百分率为21.2%±8.3%,差异显著(P<0.01)。结论:原发性下肢静脉功能不全患者的病变静脉组织中desmuslin基因在转录和翻译水平均存在明显的表达下调,这可能与病变静脉组织的形态学改变有一定的关系。
