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p38MAPK在大鼠梗阻性肾病肾组织中的表达及可能作用 被引量:14
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作者 祝胜郎 余学清 +2 位作者 娄宁 郑勋华 李涌泉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期545-549,共5页
目的 :探讨p38MAPK在大鼠梗阻性肾病模型肾组织中的表达及其在肾脏纤维化发病机制中的作用。方法 :采用单侧输尿管结扎制造梗阻性肾病模型 ,分别于造模后 1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d、2 1d、2 8d取肾组织 ,应用免疫沉淀结合... 目的 :探讨p38MAPK在大鼠梗阻性肾病模型肾组织中的表达及其在肾脏纤维化发病机制中的作用。方法 :采用单侧输尿管结扎制造梗阻性肾病模型 ,分别于造模后 1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d、2 1d、2 8d取肾组织 ,应用免疫沉淀结合特异性底物磷酸化法测定肾组织p38MAPK活性 ,用免疫组织化学法检测磷酸化p38MAPK在肾组织中的表达 ;用免疫组织化学及原位杂交方法检测肾组织TGFβ1mRNA和蛋白水平的表达。结果 :正常对照组大鼠肾组织有一定的p38MAPK基础活性 (吸光度A值 ) (0 2 2± 0 0 6 )。UUO术后 1h ,p38MAPK即被激活(0 4 5± 0 14vs对照组 ,P <0 0 5 ) ,12h时达第一个高峰 (0 91± 0 0 7vs对照组 ,P <0 0 1) ,此后活性逐渐下降 ,3d后又进行性升高 ,7d达到第二个高峰 (0 93± 0 0 6vs对照组 ,P <0 0 1) ,此后又缓慢下降 ,2 8d降至最低水平 (0 12± 0 0 2 )。而TGFβ1的表达在UUO术后 1h、3h、6h、12h及 2 4h无明显增加 ,第 3d有明显增加 (13 5 5 %± 6 33%vs对照组 ,P <0 0 5 ) ,第 7d达高峰 (2 6 78%± 8 77%vs对照组 ,P <0 0 1) ,第 2 8d表达最少。梗阻肾肾组织p38MAPK的激活明显早于TGFβ1表达且p38MAPK早期活性水平与TGFβ1的表达水平呈正相关 ; 展开更多
关键词 尿道梗阻 P38 MAP激酶 转化生长因子β 肾纤维化
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人血清白蛋白对近端肾小管上皮细胞骨调素和CD44表达的影响 被引量:2
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作者 彭晖 余学清 +3 位作者 娄探奇 方芳 周飞宇 尹培达 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期911-914,共4页
目的研究人血清白蛋白能否刺激人近端肾小管上皮细胞产生骨调素(OPN)和CD44。方法用人血清白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞),分不同时间(0-48h)、不同浓度(0.1-10g/L)两组,以RT-PCR方法分别检测两组细胞表达的OPNmRNA,以West... 目的研究人血清白蛋白能否刺激人近端肾小管上皮细胞产生骨调素(OPN)和CD44。方法用人血清白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞),分不同时间(0-48h)、不同浓度(0.1-10g/L)两组,以RT-PCR方法分别检测两组细胞表达的OPNmRNA,以Westernblotting分别检测两组细胞表达的OPN。用免疫荧光法、激光共聚焦显微镜观察1g/L的人血清白蛋白刺激HK-2细胞24h、48h后OPN、CD44的表达。结果人血清白蛋白刺激HK-2细胞上调表达OPNmRNA和蛋白,呈时间和剂量相关性。CD44的表达与OPN同步。结论人血清白蛋白可刺激HK-2细胞表达OPN与CD44。 展开更多
关键词 骨调素 抗原 CD44 白蛋白类
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血管紧张素Ⅱ激活巨噬细胞株p38MAPK信号通路并诱导其增殖 被引量:7
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作者 娄宁 余学清 +2 位作者 祝胜郎 郑勋华 董秀清 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期416-420,共5页
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活巨噬细胞p38MAPK信号通路的模式变化及其对巨噬细胞株增殖的影响。方法:用Westernblot测定细胞p38MAPK磷酸化表达;用细胞免疫组化观察细胞p38MAPK激活后核移位;用MTT法观察细胞增殖。结果:AngⅡ(1μmol... 目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)激活巨噬细胞p38MAPK信号通路的模式变化及其对巨噬细胞株增殖的影响。方法:用Westernblot测定细胞p38MAPK磷酸化表达;用细胞免疫组化观察细胞p38MAPK激活后核移位;用MTT法观察细胞增殖。结果:AngⅡ(1μmol/L)可诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化表达,15-30分钟达到高峰,随时间呈峰形变化。AngⅡ呈剂量依赖性诱导RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化。p38MAPK特异性抑制剂SB202190可显著抑制RAW264.7细胞p38MAPK磷酸化,并呈剂量依赖性。AngⅡ可诱导RAW264.7细胞增殖,SB202190可显著抑制AngⅡ诱导的RAW264.7细胞增殖。结论:AngⅡ可激活RAW264.7巨噬细胞株p38MAPK信号通路,并通过p38MAPK信号通路调控RAW264.7细胞增殖。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ p3S丝裂原活化蛋白激酶 巨噬细胞 肾纤维化
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清道夫受体AⅠ/Ⅱ对小鼠脂质代谢的影响 被引量:7
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作者 王文健 余学清 +3 位作者 李晓艳 郑勋华 夏敏 凌文华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1090-1093,共4页
目的 :鉴定清道夫受体AⅠ /Ⅱ (SR -AⅠ /Ⅱ )基因敲除小鼠 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除对小鼠脂质代谢的影响。方法 :应用SR -AⅠ /ⅡcDNA基因部分序列作探针 ,用Southernblot方法检测SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除小鼠及其同系对照小鼠靶基因敲... 目的 :鉴定清道夫受体AⅠ /Ⅱ (SR -AⅠ /Ⅱ )基因敲除小鼠 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除对小鼠脂质代谢的影响。方法 :应用SR -AⅠ /ⅡcDNA基因部分序列作探针 ,用Southernblot方法检测SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除小鼠及其同系对照小鼠靶基因敲除结果 ,用生化分析仪检测血脂、载脂蛋白和血肌酐 ,观察SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除和未敲除小鼠分别在普通饮食和高脂饮食情况下脂质代谢的改变情况。结果 :SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后小鼠的低密度脂蛋白 (LDL)、体重较正常对照小鼠明显增高 (P <0 0 5 ) ,出现了脂质代谢严重失衡 ,在高脂饮食情况下这种失衡更为明显 ,体重、LDL的升高幅度均大于对照组 (P <0 0 1)。结论 :SR -AⅠ /Ⅱ参与对组织和循环中的LDL的摄取和清除 ,有利于保持机体脂质代谢的正常调节。小鼠SR -AⅠ /Ⅱ基因敲除后脂质代谢发生了明显紊乱 ,机体对脂质代谢的调节功能减弱。 展开更多
关键词 清道夫受体AⅠ/Ⅱ 脂质代谢 基因 小鼠
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尿IgG亚类的分离纯化和鉴定 被引量:1
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作者 梁伟 陈伟英 +4 位作者 余学清 方芳 彭晖 李晓艳 董秀清 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2078-2080,共3页
目的:建立一种简便快捷的分离纯化肾病患者尿IgG亚类的方法。方法:收集的肾病患者24h尿液经硫酸铵盐析、DEAE-cellu lose离子交换层析和葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析等3步分离纯化,即可得到IgG1、IgG2、IgG3、IgG44种亚类,最后用W estern... 目的:建立一种简便快捷的分离纯化肾病患者尿IgG亚类的方法。方法:收集的肾病患者24h尿液经硫酸铵盐析、DEAE-cellu lose离子交换层析和葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析等3步分离纯化,即可得到IgG1、IgG2、IgG3、IgG44种亚类,最后用W estern b lotting和SDS-PAGE电泳的方法鉴定样品及其纯度。结果:SPA亲和层析洗脱曲线显示有4个独立的洗脱峰,W estern b lotting和SDS-PAGE方法鉴定表明提纯的样品为高纯度的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。结论:本方法通过3步即可一次性将样品中的4种不同的IgG亚类全部分离纯化,且纯度高,简便快捷,效果良好。 展开更多
关键词 IGG亚类 分离和提纯 葡萄球菌蛋白质A 色谱法 亲和
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TGF-β1显著上调其信号蛋白Smad2在腹膜间皮细胞中的表达 被引量:1
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作者 杨琼琼 余学清 +2 位作者 段文娟 李晓燕 黄锋先 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1790-1793,共4页
目的 :探讨Smad2信号蛋白在腹膜间皮细胞中的表达及转化生长因子 - β1(TGF - β1)对其表达的影响。方法 :大鼠腹膜间皮细胞分别培养于不同浓度TGF - β1培养液 (0、1 2 5、2 5、10 μg/L)中 ,用RT -PCR和免疫组化的方法检测不同时间 (... 目的 :探讨Smad2信号蛋白在腹膜间皮细胞中的表达及转化生长因子 - β1(TGF - β1)对其表达的影响。方法 :大鼠腹膜间皮细胞分别培养于不同浓度TGF - β1培养液 (0、1 2 5、2 5、10 μg/L)中 ,用RT -PCR和免疫组化的方法检测不同时间 (0、5、15、30、6 0、12 0min)Smad2表达的水平和Smad2细胞内定位变化。结果 :Smad2mRNA的表达在TGF - β1刺激后 5min开始升高 ,呈时间依赖性 ,在 30min达到高峰 ,而后逐渐减弱 ,在 12 0min降至接近正常水平 ;Smad2mRNA表达也呈浓度依赖性 ,随TGF - β1浓度的增高而表达增强。磷酸化Smad2蛋白的表达和核内聚集也与mRNA表达一致 ,呈时间和浓度依赖性。Smad2在TGF - β1刺激下从胞浆转位至核内聚集 ,并在 30min达高峰。结论 :腹膜间皮细胞内存在Smad2的表达。TGF - β1可刺激Smad2表达上调和活化 ,转位至核内发挥作用 。 展开更多
关键词 腹膜间皮细胞 转化生长因子Β SMAD2
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Defensin α1对大鼠系膜细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 张益民 叶任高 +4 位作者 李幼姬 李晓艳 王昌云 余学清 董秀清 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1796-1800,共5页
目的:探讨defensin α1对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株1097增殖的影响以及可能的机制。方法:利用MTT掺入观察不同浓度的基因重组人类defensin α1在不同作用时间对系膜细胞增殖的影响,选择能够刺激系膜细胞生长的浓度及作用时间给予U... 目的:探讨defensin α1对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株1097增殖的影响以及可能的机制。方法:利用MTT掺入观察不同浓度的基因重组人类defensin α1在不同作用时间对系膜细胞增殖的影响,选择能够刺激系膜细胞生长的浓度及作用时间给予U0126预孵育,观察能否阻断defensin α1促系膜细胞增殖作用,使用Western blotting了解defensin α1对系膜细胞ERK1/2磷酸化及Ⅳ型胶原合成的影响。结果:Defensin α1在3-20mg/L范围内对系膜细胞具有促生长作用,12h达到峰值(P<0.01)。当浓度大于20mg/L时可抑制系膜细胞的生长,浓度在15-25μmol/L U0126可以阻断defensin α1对系膜细胞的促生长作用。浓度为3mg/L defensin α1刺激5min后可使ERK1/2磷酸化明显增加,作用12h后系膜细胞的IV胶原蛋白表达高于对照组并持续到48h(P<0.01)。结论:一定浓度的defensin α1可以促进系膜细胞的增殖和细胞外基质的合成,这种促增殖作用可能是通过MAPK途径实现的。 展开更多
关键词 防御素类 肾小球系膜细胞 细胞增殖
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