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应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk(L)核移位机制
被引量：
5
1
作者
王磊
胡英
+1 位作者
宋新明
汪建平
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期614-618,639,共6页
【目的】通过研究Syk(L)在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制,探讨Syk(L)抑制乳腺癌的可能性机制。【方法】采用细胞胞核、胞浆分离技术和Westernblot的方法,检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布。构建绿色荧...
【目的】通过研究Syk(L)在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制,探讨Syk(L)抑制乳腺癌的可能性机制。【方法】采用细胞胞核、胞浆分离技术和Westernblot的方法,检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布。构建绿色荧光蛋白(GFP)和Syk(L)核移位相关功能域融合蛋白质粒,转染入Cos7细胞内,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的分布。【结果】BT474细胞的细胞浆中可检测到Syk(S)和Syk(L)的表达,细胞核中只检测到Syk(L)的表达。在Cos7细胞中,GFP与Syk(L)的缺失域(deletiondomain,DEL域)融合蛋白均匀分布于细胞内,GFP与Syk(L)的IDB域融合蛋白聚集于细胞核中;将DEL域上的294K、300K、及305K突变域非碱性氨基酸后构建成GFP-IDB(L)-M,突变的融合蛋白则失去核聚集现象。【结论】在乳腺癌细胞中,Syk(L)可从细胞胞浆移位到细胞核内。Syk(L)的IDB域具有完整的核移位功能,能将融合的胞浆蛋白GFP转移到细胞核内;DEL域的碱性氨基酸具有核定位信号功能。Syk(L)在乳腺癌细胞中的抑癌功能与其核移位有关。
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关键词
长脾脏酪氨酸激酶
绿色荧光蛋白
核移位
乳腺癌
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职称材料
抑癌基因Syk(L)在乳腺癌中具有转录抑制因子功能
2
作者
宋新明
王磊
+1 位作者
胡英
汪建平
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期2235-2238,共4页
目的:研究移位到细胞核内抑癌基因Syk(L)在乳腺癌中的生物学功能,探讨Syk(L)抑制乳腺癌发展的可能机制。方法:将Syk(L)、失去激酶活性的Syk(L)以及Syk(L)各个功能域按正确读框插入到含有Gal4基因DNA结合功能域(Gal4-DBD)的pFA载体中,并...
目的:研究移位到细胞核内抑癌基因Syk(L)在乳腺癌中的生物学功能,探讨Syk(L)抑制乳腺癌发展的可能机制。方法:将Syk(L)、失去激酶活性的Syk(L)以及Syk(L)各个功能域按正确读框插入到含有Gal4基因DNA结合功能域(Gal4-DBD)的pFA载体中,并在HEK293细胞中表达;利用Gal4荧光素酶报告基因的方法检测在乳腺癌细胞中Syk(L)、失去激酶活性的Syk(L)以及Syk(L)各个功能域对基因转录的影响。结果:在乳腺癌细胞MB231和MB435中,与Gal4-DBD结合的Syk(L)可以下调启动子上含有Gal4结合位点的萤光素酶基因的表达,这种调节与Syk(L)的激酶活性无关,是通过Syk(L)的SH2功能域和KD功能域完成的。结论:在乳腺癌中,Syk(L)具有转录抑制功能,该功能与Syk(L)的激酶活性无关,是通过Syk(L)的SH2功能域和激酶功能域实现的。Syk(L)在乳腺癌中的抑癌作用可能与其转录抑制功能有关。
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关键词
Syk(L)
蛋白质酪氨酸激酶
转录抑制因子
乳腺肿瘤
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职称材料
题名
应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk(L)核移位机制
被引量：
5
1
作者
王磊
胡英
宋新明
汪建平
机构
中山大学附属第一医院结直肠肛门外科
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期614-618,639,共6页
基金
教育部博士点基金资助项目(No.20020558050)
文摘
【目的】通过研究Syk(L)在乳腺癌细胞亚细胞器中的分布和移位机制,探讨Syk(L)抑制乳腺癌的可能性机制。【方法】采用细胞胞核、胞浆分离技术和Westernblot的方法,检测乳腺癌细胞系BT474中两种Syk蛋白异构体在细胞内的分布。构建绿色荧光蛋白(GFP)和Syk(L)核移位相关功能域融合蛋白质粒,转染入Cos7细胞内,荧光显微镜下观察融合蛋白在细胞内的分布。【结果】BT474细胞的细胞浆中可检测到Syk(S)和Syk(L)的表达,细胞核中只检测到Syk(L)的表达。在Cos7细胞中,GFP与Syk(L)的缺失域(deletiondomain,DEL域)融合蛋白均匀分布于细胞内,GFP与Syk(L)的IDB域融合蛋白聚集于细胞核中;将DEL域上的294K、300K、及305K突变域非碱性氨基酸后构建成GFP-IDB(L)-M,突变的融合蛋白则失去核聚集现象。【结论】在乳腺癌细胞中,Syk(L)可从细胞胞浆移位到细胞核内。Syk(L)的IDB域具有完整的核移位功能,能将融合的胞浆蛋白GFP转移到细胞核内;DEL域的碱性氨基酸具有核定位信号功能。Syk(L)在乳腺癌细胞中的抑癌功能与其核移位有关。
关键词
长脾脏酪氨酸激酶
绿色荧光蛋白
核移位
乳腺癌
Keywords
Syk（L）
GFP
nuclear translocation
breast cancer
分类号
R730.2 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
抑癌基因Syk(L)在乳腺癌中具有转录抑制因子功能
2
作者
宋新明
王磊
胡英
汪建平
机构
中山大学附属第一医院结直肠肛门外科
中山大学
附属
第一
医院
特诊内科
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期2235-2238,共4页
基金
教育部博士点基金资助项目(No.20020558050)
文摘
目的:研究移位到细胞核内抑癌基因Syk(L)在乳腺癌中的生物学功能,探讨Syk(L)抑制乳腺癌发展的可能机制。方法:将Syk(L)、失去激酶活性的Syk(L)以及Syk(L)各个功能域按正确读框插入到含有Gal4基因DNA结合功能域(Gal4-DBD)的pFA载体中,并在HEK293细胞中表达;利用Gal4荧光素酶报告基因的方法检测在乳腺癌细胞中Syk(L)、失去激酶活性的Syk(L)以及Syk(L)各个功能域对基因转录的影响。结果:在乳腺癌细胞MB231和MB435中,与Gal4-DBD结合的Syk(L)可以下调启动子上含有Gal4结合位点的萤光素酶基因的表达,这种调节与Syk(L)的激酶活性无关,是通过Syk(L)的SH2功能域和KD功能域完成的。结论:在乳腺癌中,Syk(L)具有转录抑制功能,该功能与Syk(L)的激酶活性无关,是通过Syk(L)的SH2功能域和激酶功能域实现的。Syk(L)在乳腺癌中的抑癌作用可能与其转录抑制功能有关。
关键词
Syk(L)
蛋白质酪氨酸激酶
转录抑制因子
乳腺肿瘤
Keywords
Syk（L）
Protein- tyrosine kinase
Transcriptional repressor
Breast neoplasms
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用GFP质粒构建及转染技术探讨Syk(L)核移位机制
王磊
胡英
宋新明
汪建平
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2006
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
抑癌基因Syk(L)在乳腺癌中具有转录抑制因子功能
宋新明
王磊
胡英
汪建平
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
0
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