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人PC-3细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定
被引量：
3
1
作者
张波
范新兰
+2 位作者
林天歆
许可慰
黄健
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期878-883,共6页
【目的】从人前列腺癌PC-3细胞系中分离、富集并鉴定前列腺癌干细胞。【方法】采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养PC-3细胞系,通过传代更新、诱导分化、交替在含血清/无血清培养液中培养等方法鉴定PC-3悬浮成球细胞具有强增...
【目的】从人前列腺癌PC-3细胞系中分离、富集并鉴定前列腺癌干细胞。【方法】采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养PC-3细胞系,通过传代更新、诱导分化、交替在含血清/无血清培养液中培养等方法鉴定PC-3悬浮成球细胞具有强增殖性、自我更新和分化潜能等肿瘤干细胞特性。以PC-3悬浮成球细胞为实验组,常规在含血清培养液(SSM)中单层贴壁培养的PC-3细胞为对照组,采用流式细胞术检测两种细胞中CD44+CD133+细胞及侧群(SP)细胞比例。【结果】PC-3成球细胞可以在SFM中生存并形成悬浮细胞球,悬浮培养第5天时开始可以观察到典型的悬浮细胞球形成,第10天时细胞球形成效率约为(2.6±1.0)%,较第5天时明显增多(P<0.05)。PC-3悬浮成球细胞具有自我更新和分化能力,在体外可以连续、稳定传代,在SFM中滴加血清后可以分化,交替培养于SSM和SFM中可以实现与贴壁细胞之间的相互转化。PC-3悬浮成球细胞中CD44+CD133+细胞比率为13.94%,SP细胞含量为3.1%,均显著高于常规培养的PC-3贴壁细胞(分别为0.77%和0.0%,P<0.05)。【结论】PC-3悬浮成球细胞具有肿瘤干细胞特性,采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从PC-3细胞系中简便、高效地富集前列腺癌干细胞。
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关键词
PC-3
前列腺癌
悬浮培养
聚球法
肿瘤干细胞
富集
鉴定
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职称材料
反义封闭PKARⅠβ基因表达对双龙接骨丸含药血清体外促成骨细胞增殖作用的影响
被引量：
3
2
作者
孙奋勇
潘秋辉
洪岸
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第12期2316-2319,共4页
目的进一步明确cAMP依赖的磷酸激酶Ⅰ型调节亚基β(PKARⅠβ)在双龙接骨丸含药血清促进体外培养成骨细胞增殖过程中的作用。方法构建表达PKARⅠβ基因反义序列的重组子pcDNA-antiPKARⅠβ,脂质体法转导成骨细胞HFOB119,MTT法检测其增殖...
目的进一步明确cAMP依赖的磷酸激酶Ⅰ型调节亚基β(PKARⅠβ)在双龙接骨丸含药血清促进体外培养成骨细胞增殖过程中的作用。方法构建表达PKARⅠβ基因反义序列的重组子pcDNA-antiPKARⅠβ,脂质体法转导成骨细胞HFOB119,MTT法检测其增殖状况。结果高剂量含药血清处理的反义基因封闭组中,HFOB1.19的增殖能力与空白血清对照组无显著差异(P>005)。结论双龙接骨丸含药血清的体外促成骨细胞增殖作用与PKARⅠβ基因的表达密切相关。
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关键词
双龙接骨丸
成骨细胞
基因表达
核酸
反义
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职称材料
翻译起始区二级结构对荧光素酶基因在COS-7细胞中表达效率的影响
3
作者
孙奋勇
潘秋辉
洪岸
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期299-303,共5页
在荧光素酶基因起始密码子ATG下游插入4种串连重复的密码子(6×ATT ,3×ATT ,6×GCC与3×GCC) ,得到具有不同二级结构的翻译起始区(translationinitiationregion ,TIR) ,以研究TIR二级结构对该基因在COS 7细胞中表达的...
在荧光素酶基因起始密码子ATG下游插入4种串连重复的密码子(6×ATT ,3×ATT ,6×GCC与3×GCC) ,得到具有不同二级结构的翻译起始区(translationinitiationregion ,TIR) ,以研究TIR二级结构对该基因在COS 7细胞中表达的影响.Northern印迹结果显示,4种重组子mRNA的转录水平没有显著差异,而Western印迹与酶活性检测表明,与野生型结构相比,6×ATT与3×ATT能显著提高荧光素酶的表达量与活性,而6×GCC结构的表达量明显下降.使用计算机辅助分析软件,扫描上述TIR结构发现,TIR稳定性或二级结构复杂度是导致上述表达差异的主要原因.
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关键词
翻译起始区
荧光素酶
二级结构
表达
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职称材料
题名
人PC-3细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定
被引量：
3
1
作者
张波
范新兰
林天歆
许可慰
黄健
机构
中山大学
附属
孙逸仙纪念医院
泌尿外科
中山大学附属孙逸仙纪念医院医学研究中心
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第6期878-883,共6页
基金
国家自然科学基金(30500507
30672092)
+3 种基金
广东省自然科学基金重点项目(6104605)
广东省自然科学基金(5001758
07117366)
教育部博士点基金(20060558027)
文摘
【目的】从人前列腺癌PC-3细胞系中分离、富集并鉴定前列腺癌干细胞。【方法】采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养PC-3细胞系,通过传代更新、诱导分化、交替在含血清/无血清培养液中培养等方法鉴定PC-3悬浮成球细胞具有强增殖性、自我更新和分化潜能等肿瘤干细胞特性。以PC-3悬浮成球细胞为实验组,常规在含血清培养液(SSM)中单层贴壁培养的PC-3细胞为对照组,采用流式细胞术检测两种细胞中CD44+CD133+细胞及侧群(SP)细胞比例。【结果】PC-3成球细胞可以在SFM中生存并形成悬浮细胞球,悬浮培养第5天时开始可以观察到典型的悬浮细胞球形成,第10天时细胞球形成效率约为(2.6±1.0)%,较第5天时明显增多(P<0.05)。PC-3悬浮成球细胞具有自我更新和分化能力,在体外可以连续、稳定传代,在SFM中滴加血清后可以分化,交替培养于SSM和SFM中可以实现与贴壁细胞之间的相互转化。PC-3悬浮成球细胞中CD44+CD133+细胞比率为13.94%,SP细胞含量为3.1%,均显著高于常规培养的PC-3贴壁细胞(分别为0.77%和0.0%,P<0.05)。【结论】PC-3悬浮成球细胞具有肿瘤干细胞特性,采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从PC-3细胞系中简便、高效地富集前列腺癌干细胞。
关键词
PC-3
前列腺癌
悬浮培养
聚球法
肿瘤干细胞
富集
鉴定
Keywords
PC-3
prostate cancer
suspension culture
sphere-forming
cancer stem cells
enrichment
identification
分类号
R737.25 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
反义封闭PKARⅠβ基因表达对双龙接骨丸含药血清体外促成骨细胞增殖作用的影响
被引量：
3
2
作者
孙奋勇
潘秋辉
洪岸
机构
暨南
大学
生物工程
研究
所
中山大学附属孙逸仙纪念医院医学研究中心
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第12期2316-2319,共4页
文摘
目的进一步明确cAMP依赖的磷酸激酶Ⅰ型调节亚基β(PKARⅠβ)在双龙接骨丸含药血清促进体外培养成骨细胞增殖过程中的作用。方法构建表达PKARⅠβ基因反义序列的重组子pcDNA-antiPKARⅠβ,脂质体法转导成骨细胞HFOB119,MTT法检测其增殖状况。结果高剂量含药血清处理的反义基因封闭组中,HFOB1.19的增殖能力与空白血清对照组无显著差异(P>005)。结论双龙接骨丸含药血清的体外促成骨细胞增殖作用与PKARⅠβ基因的表达密切相关。
关键词
双龙接骨丸
成骨细胞
基因表达
核酸
反义
Keywords
Shuanglong-Jiegu pill
Osteoblasts
Gene expression
Nucleotide, antisense
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
翻译起始区二级结构对荧光素酶基因在COS-7细胞中表达效率的影响
3
作者
孙奋勇
潘秋辉
洪岸
机构
暨南
大学
生物工程
研究
所
中山大学附属孙逸仙纪念医院医学研究中心
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第3期299-303,共5页
基金
国家"863"资助项目(No.2002AA2Z344E)~~
文摘
在荧光素酶基因起始密码子ATG下游插入4种串连重复的密码子(6×ATT ,3×ATT ,6×GCC与3×GCC) ,得到具有不同二级结构的翻译起始区(translationinitiationregion ,TIR) ,以研究TIR二级结构对该基因在COS 7细胞中表达的影响.Northern印迹结果显示,4种重组子mRNA的转录水平没有显著差异,而Western印迹与酶活性检测表明,与野生型结构相比,6×ATT与3×ATT能显著提高荧光素酶的表达量与活性,而6×GCC结构的表达量明显下降.使用计算机辅助分析软件,扫描上述TIR结构发现,TIR稳定性或二级结构复杂度是导致上述表达差异的主要原因.
关键词
翻译起始区
荧光素酶
二级结构
表达
Keywords
translation initiation region, luciferase, secondary structure, expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
Q754 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人PC-3细胞系中前列腺癌干细胞的富集与鉴定
张波
范新兰
林天歆
许可慰
黄健
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
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职称材料
2
反义封闭PKARⅠβ基因表达对双龙接骨丸含药血清体外促成骨细胞增殖作用的影响
孙奋勇
潘秋辉
洪岸
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
翻译起始区二级结构对荧光素酶基因在COS-7细胞中表达效率的影响
孙奋勇
潘秋辉
洪岸
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
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