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人resistin基因原核表达载体构建和表达 被引量:2
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作者 何祥梁 何东华 +3 位作者 黎锋 杨川 程桦 傅祖植 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期413-416,共4页
【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆... 【目的】构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达,为开展对resistin的研究打下实验基础。【方法】酚氯仿一步法从一位2型糖尿病合并胆管癌患者腹壁皮下脂肪组织抽取总RNA,RT-PCR法扩增出re-sistin基因cDNA,经测序后,PCR产物亚克隆入T载体,用EcoRI和KpnI分别酶切重组T质粒和原核表达载体pGENKS,然后resistin基因片段和表达载体通过T4DNA连接酶进行定向连接,用核酸内切酶EcoRI、KpnI酶切和测序方法鉴定出重组表达质粒。重组表达质粒转化大肠杆菌JM109,经1mmol/LIPTG在32℃诱导表达2h,裂解细菌,进行PAGE凝胶电泳鉴定融合蛋白的表达。【结果】RT-PCR扩增产物分子大小为327bp,序列分析表明为人resistin基因完整编码区。PCR产物与T载体连接、转化大肠杆菌后,从细菌质粒中酶切回收了目的片段。重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5kD的融合蛋白。【结论】成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打下了实验基础。 展开更多
关键词 原核表达载体 重组表达质粒 融合蛋白 细菌 编码区 腹壁 核酸内切酶 酶切 T载体 PCR产物
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Ephrin-A5在脑梗死大鼠脑组织中的分布和动态表达 被引量:3
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作者 王雪晶 方燕南 +2 位作者 马明明 张爱武 徐伟杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期259-263,共5页
目的:研究发育期的轴突导向分子ephrin-A5在成年大鼠缺血性脑梗死皮层内的分布以及梗死灶周围不同时点的表达变化,探讨ephrin-A5基因在缺血性脑梗死后对神经再生的作用。方法:建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用免疫组化技术检测ephrin... 目的:研究发育期的轴突导向分子ephrin-A5在成年大鼠缺血性脑梗死皮层内的分布以及梗死灶周围不同时点的表达变化,探讨ephrin-A5基因在缺血性脑梗死后对神经再生的作用。方法:建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用免疫组化技术检测ephrin-A5的分布、细胞定位,并于脑梗死后1、2、4周用荧光定量PCR法检测梗死灶周ephrin-A5表达量的变化。结果:免疫组化结果显示:大脑中动脉皮层支梗塞后ephrin-A5主要表达于梗死灶侧皮层的V2MM(第二视皮质内侧内区)、V2ML(第二视皮质内侧外区)、V2L(第二视皮质外侧区)、Au1(第一听皮质)、AuV(第二听皮质,腹侧区),分布在神经元胞体、树突中,轴突亦有少量分布。荧光定量PCR结果显示:ephrin-A5mRNA在脑梗死后表达量上升,1周达到高峰,第2、4周保持第1周水平。结论:脑梗死后eph-rin-A5在梗死灶周神经元胞体、树突中持续高水平表达,它可能是造成成年哺乳动物中枢神经系统损伤后神经轴突再投射障碍的重要原因之一。 展开更多
关键词 Ephrin—A5 大脑梗死 神经元
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抵抗素(resistin)与2型糖尿病及肥胖症相关研究进展 被引量:3
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作者 何祥梁 何东华 付祖植 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期2353-2356,共4页
A Review Resistin, a new hormone found in the year 2001 and secreted by adipocytes, is related to type 2 diabetes and obesity. It brings some hope to solve the medical hamper of insulin resistance. The resistin discov... A Review Resistin, a new hormone found in the year 2001 and secreted by adipocytes, is related to type 2 diabetes and obesity. It brings some hope to solve the medical hamper of insulin resistance. The resistin discovery, molecule structure, function and expression, secretion regulation as well as gene polymorphism are reviewed in the article. [ 展开更多
关键词 抵抗素 糖尿病 肥胖症
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野生型stathmin 1及其C末端突变体的功能研究 被引量:1
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作者 张彦 熊建军 +2 位作者 王嘉励 杨光 朱振宇 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期2022-2026,共5页
目的:研究stathmin1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用;探讨C末端7个氨基酸残基的突变对stathmin1生物功能的影响。方法:构建stathmin1克隆载体及其C末端定点突变载体。转染载体到黑色素细胞中,MTT、流式细胞仪、分光光度法等研究... 目的:研究stathmin1过表达对黑色素细胞的生长和功能的作用;探讨C末端7个氨基酸残基的突变对stathmin1生物功能的影响。方法:构建stathmin1克隆载体及其C末端定点突变载体。转染载体到黑色素细胞中,MTT、流式细胞仪、分光光度法等研究野生型以及突变型stathmin1对于黑色素细胞生长以及细胞特异性功能的影响。结果:成功构建含有野生型stathmin1的克隆载体pAdTrack-stathmin1及其定点突变载体pAdTrack-stathmin 1-mut;MTT法和流式细胞仪检测到突变型和野生型stathmin 1都能有效抑制黑色素细胞生长、诱导细胞凋亡;分光光度法检测黑色素细胞特异性功能黑色素产量以及酪氨酸酶活性因stathmin 1的转染而受到明显影响。结论:Stathmin 1稳定表达对于黑色素细胞的生长有重要意义,高表达可以抑制细胞生长以及细胞特异性功能,C末端模序结构的破坏并不能影响stathmin 1的生物学功能。 展开更多
关键词 STATHMIN 1 定点突变 黑素细胞
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