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大黄素对高糖培养的GMC增殖、FN表达及p38MAPK的影响 被引量:35
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作者 李学娟 陈泽彬 +3 位作者 魏红 王国兵 刘敏 黄河清 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期233-238,共6页
目的本研究旨在观察大黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的增殖与细胞外基质的主要成分——纤维连接蛋白(FN)表达的影响,观察大黄素对高糖培养的p38MAPK信号转导通路的影响,以探讨大黄素调节p38MAPK信号通路抗糖尿病肾脏纤维化... 目的本研究旨在观察大黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)的增殖与细胞外基质的主要成分——纤维连接蛋白(FN)表达的影响,观察大黄素对高糖培养的p38MAPK信号转导通路的影响,以探讨大黄素调节p38MAPK信号通路抗糖尿病肾脏纤维化的分子作用机制。方法 MTT比色法检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞周期分布;Western blot方法检测FN、p-p38MAPK蛋白表达情况。结果高糖能够诱导大鼠GMC增殖、上调FN的表达以及促进p38MAPK活化,与正常培养组相比差异有统计学意义(P<0.05);大黄素可以抑制高糖诱导的大鼠GMC增殖、FN表达与p38MAPK活化,与高糖组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论大黄素抗糖尿病肾脏纤维化的作用可能与大黄素抑制p38MAPK信号通路密切相关。 展开更多
关键词 大黄素 糖尿病肾病 肾小球系膜细胞 细胞增殖 纤维粘连蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶
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黄连素通过S1P2-MAPK信号通路抗糖尿病肾纤维化作用机制研究 被引量:30
2
作者 刘慰华 刘世明 +1 位作者 林双峰 黄河清 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期723-728,共6页
目的观察黄连素干预后四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠肾组织、高糖培养的系膜细胞中S1P2受体表达变化情况,以及对高糖条件下S1P2受体介导的纤维连接蛋白(FN)生成和MAPK信号通路的影响。方法腹腔注射四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠肾损伤模型。随机... 目的观察黄连素干预后四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠肾组织、高糖培养的系膜细胞中S1P2受体表达变化情况,以及对高糖条件下S1P2受体介导的纤维连接蛋白(FN)生成和MAPK信号通路的影响。方法腹腔注射四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠肾损伤模型。随机分成正常、糖尿病、黄连素低剂量和高剂量组。12周实验结束时比较各组小鼠血糖、肾脏肥大指数(肾重/体重)、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白等肾功能相关指标的变化。应用Real-time PCR和Western blot方法分别检测肾组织中S1P2受体mRNA和蛋白水平的表达变化。Western blot检测黄连素干预后高糖培养的系膜细胞中S1P2受体、FN表达及MAPK磷酸化改变。结果黄连素有效抑制糖尿病小鼠血糖升高,明显降低血尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白等肾功能相关指标,下调肾脏S1P2受体mR-NA和蛋白表达。体外研究中黄连素降低高糖培养的系膜细胞S1P2受体蛋白和FN蛋白表达,还不同程度抑制MAPK(ERK1/2、p38MAPK和JNK)磷酸化水平。结论减少S1P2受体表达,抑制S1P2-MAPK(主要是ERK1/2和p38MAPK)通路介导的FN表达增加是黄连素抗糖尿病肾纤维化可能的作用机制之一。 展开更多
关键词 黄连素 糖尿病肾病 纤维化 1-磷酸鞘氨醇受体 MAPK信号通路 纤维连接蛋白
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PGC-1α通过上调SIRT3表达发挥心肌保护作用 被引量:15
3
作者 游嘉 岳中宝 +2 位作者 陈少锐 李卓明 刘培庆 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期343-350,共8页
【目的】探讨第III类组蛋白去乙酰化酶成员3(SIRT3)在过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的调控下发挥改善心肌肥大和心肌能量代谢的作用。【方法】建立血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌肥大模型;利用质粒转染诱导PGC-1α... 【目的】探讨第III类组蛋白去乙酰化酶成员3(SIRT3)在过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的调控下发挥改善心肌肥大和心肌能量代谢的作用。【方法】建立血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌肥大模型;利用质粒转染诱导PGC-1α基因过表达、si RNA干扰敲低SIRT3表达;Western blot检测PGC-1α、SIRT3及心肌肥大标志蛋白肌球蛋白重链β(β-MHC)的水平。TMRE染色法测定线粒体膜电位;测定ATP含量;DHE染色法测定活性氧水平;q RT-PCR法检测线粒体编码基因、能量代谢相关基因的表达水平。【结果】过表达PGC-1α能够显著提高SIRT3的蛋白表达水平和酶活性(P<0.05)。过表达PGC-1α抑制Ang II诱导的β-MHC上调(P<0.05),增加ATP水平(P<0.05),促进线粒体编码基因的转录水平(P<0.05),降低细胞内活性氧(P<0.05),上调脂肪酸氧化磷酸化代谢相关基因的表达(P<0.05)。SIRT3干扰可逆转PGC-1α的心肌保护作用(P<0.05)。【结论】PGC-1α通过上调SIRT3发挥调控心肌肥大、线粒体功能、活性氧清除、能量代谢等方面的作用。 展开更多
关键词 PGC-1Α SIRT3 心肌肥大 能量代谢 活性氧 线粒体功能
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抑制PPAR-α表达对ET-1诱导的心肌肥大和PI3K/Akt/GSK3β-NFATc4通路的影响 被引量:10
4
作者 李瑞芳 乐康 +3 位作者 高洁 杨国庆 鲍颖霞 刘培庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2289-2294,共6页
目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)在病理性心肌肥大中的作用及其信号机制。方法:应用Invitrogen's Stealth RNAi抑制心肌细胞PPAR-α的表达;采用[3H]-亮氨酸掺入法和RT-PCR检查心肌细胞蛋白质合成和心房利钠因子(AN... 目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)在病理性心肌肥大中的作用及其信号机制。方法:应用Invitrogen's Stealth RNAi抑制心肌细胞PPAR-α的表达;采用[3H]-亮氨酸掺入法和RT-PCR检查心肌细胞蛋白质合成和心房利钠因子(ANF)mRNA的表达;采用Western blotting法检测Akt/GSK3β的磷酸化表达;应用免疫荧光技术检测NFATc4的胞核移位。结果:(1)RSS304168是最有效的PPAR-αRNAi,特异性地抑制了PPAR-α的表达。(2)非诺贝特预处理抑制了内皮素-1(ET-1)诱导的心肌细胞肥大(蛋白质合成和ANF mRNA的表达);RSS304168加强了ET-1的诱导效应,而且逆转了非诺贝特对心肌肥大的抑制效应。(3)非诺贝特降低了ET-1诱导的Akt/GSK3β的磷酸化表达,RSS304168增强了ET-1的诱导效应,ET-1和RSS304168的上述作用可被PI3K阻断剂LY294002所阻断;RSS304168逆转了非诺贝特对Akt/GSK3β的磷酸化表达的负性调控作用。(4)非诺贝特抑制了ET-1诱导的NFATc4的胞核移位;而RSS304168加强了ET-1的诱导作用,逆转了非诺贝特对NFATc4胞核移位的抑制作用。结论:PPAR-α激活可以通过PI3K/Akt/GSK3β-NFATc4通路抑制ET-1诱导的心肌肥大反应。 展开更多
关键词 RNA干扰 心肌肥大 过氧化物酶体增殖物活化受体α 糖原合成酶激酶3Β 活化T细胞核因子
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咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制 被引量:6
5
作者 赵灵芝 苏兴文 +4 位作者 银巍 江伟健 黄亦俊 邱鹏新 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1370-1374,共5页
目的 观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法 体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·... 目的 观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法 体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5~ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果 ① 1 2 5~ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论 一定浓度的咖啡因可保护苯? 展开更多
关键词 咖啡因 苯妥因 小脑颗粒神经元 凋亡 胞外信号反应激酶(ERK) C-JUN
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PPAR-α激活对ET-1诱导的心肌肥大和转录因子NFATc4的影响 被引量:6
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作者 李瑞芳 段冷昕 +4 位作者 乐康 王平 高洁 杨国庆 刘培庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1046-1050,共5页
目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激活对内皮素-1(ET-1)诱导的心肌肥大和活化T细胞核因子c4(NFATc4)的影响,探讨在心肌肥大发病过程中PPAR-α和NFATc4的相互作用。方法:培养新生SD大鼠心肌细胞,采用[3H]亮氨酸法和RT-PC... 目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)激活对内皮素-1(ET-1)诱导的心肌肥大和活化T细胞核因子c4(NFATc4)的影响,探讨在心肌肥大发病过程中PPAR-α和NFATc4的相互作用。方法:培养新生SD大鼠心肌细胞,采用[3H]亮氨酸法和RT-PCR法观察PPAR-α激动剂非诺贝特对ET-1诱导的心肌细胞肥大的影响;应用免疫荧光和免疫共沉淀技术分别检测非诺贝特对ET-1诱导的NFATc4核转位以及PPAR-α和NFATc4相互作用的影响;用Western blotting法检测NFATc4的胞浆和胞核表达。结果:(1)PPAR-α激动剂非诺贝特显著抑制ET-1诱导的肥厚反应。(2)非诺贝特阻止ET-1诱导NFATc4由胞浆到胞核的转位。(3)在心肌细胞中,PPAR-α和NFATc4之间存在相互作用,非诺贝特加强了这种相互作用。结论:PPAR-α激活后可以通过调控转录因子NFATc4来抑制ET-1诱导的心肌肥大反应。 展开更多
关键词 内皮缩血管肽1 心肌肥大 过氧化物酶体增殖物激活受体Α 活化T细胞的核因子
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C-反应蛋白与动脉粥样硬化炎症的关系 被引量:30
7
作者 徐索文 刘培庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期2487-2490,共4页
Inflammation plays a pivotal role in atherogenesis. In addition to being a potent predictive and prognostic marker for major cardiovascular events,recent evidence indicates that C-reactive protein (CRP) might directly... Inflammation plays a pivotal role in atherogenesis. In addition to being a potent predictive and prognostic marker for major cardiovascular events,recent evidence indicates that C-reactive protein (CRP) might directly promote atherogenesis by exerting direct effects on vascular cells. Thus,CRP will become important novel pharmaceutical targets for the treatment of atherosclerosis. This review presents an overview of the current knowledge about the pathological role of CRP in atherosclerosis initiation and progression. 展开更多
关键词 C-反应蛋白 动脉粥样硬化 炎症 急性冠脉综合征
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基于他克林的多靶点乙酰胆碱酯酶抑制剂的研究进展 被引量:5
8
作者 叶敏忠 成志毅 皮荣标 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1549-1554,共6页
乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)是目前治疗阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)的一个重要靶点。其中基于他克林的二联体(dimeric)和杂合体(hybrid)的研究得到广泛重视。设计思路正由同时结合AChE双位点提高抑制活性和选择... 乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)是目前治疗阿尔采末病(Alzheimer’s disease,AD)的一个重要靶点。其中基于他克林的二联体(dimeric)和杂合体(hybrid)的研究得到广泛重视。设计思路正由同时结合AChE双位点提高抑制活性和选择性转变为针对AD多靶点定向作用的开发。该文综述了基于他克林的二联体或杂合体的抗AD研究进展及对其展望。 展开更多
关键词 他克林 乙酰胆碱酯酶 多靶点 阿尔采末病
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烟酸受体GPR109A介导的烟酸作用机制研究进展 被引量:11
9
作者 黄燕 刘培庆 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期105-107,共3页
烟酸作为调脂药物应用于临床已经50多年,相对高剂量的烟酸具有广泛的调脂作用。越来越多的证据表明,烟酸单用或联合降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)药物使用能够延缓动脉粥样硬化(AS)的进程和降低发生心血管事件的风险;但它的作用机制一... 烟酸作为调脂药物应用于临床已经50多年,相对高剂量的烟酸具有广泛的调脂作用。越来越多的证据表明,烟酸单用或联合降低低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)药物使用能够延缓动脉粥样硬化(AS)的进程和降低发生心血管事件的风险;但它的作用机制一直不是很明确。2003年,三个研究小组同时发现了烟酸受体,使人们对烟酸的作用机制有了进一步认识。烟酸受体GPR109A是一种Gi蛋白偶联受体,主要表达于白色、棕色脂肪组织、脾和免疫细胞。研究表明,烟酸受体主要介导以下作用:①烟酸作用于脂肪细胞的烟酸受体,抑制脂肪组织甘油三酯(TG)的水解,降低血浆游离脂肪酸(FFA);②烟酸作用于皮肤角质细胞和朗格汉细胞的烟酸受体诱导前列腺素分泌,引起皮肤血管舒张,引发潮红;③激活烟酸受体还可增加脂联素分泌,诱导中性粒细胞凋亡,上调过氧化物酶体增殖激活受体γ表达。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 烟酸受体 潮红 G蛋白偶联受体
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转录辅抑制因子RIP140在代谢组织中的作用及机制 被引量:2
10
作者 陈艳芳 刘培庆 汪煜华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期701-704,共4页
核受体超家族在调节能量平衡过程中扮演重要角色。转录辅助调节因子通过募集一系列DNA或组蛋白结构修饰酶,调节核受体介导的靶基因转录。受体相互作用蛋白140(receptor-interacting protein140,RIP140)是一种转录辅抑制因子,其与核受体... 核受体超家族在调节能量平衡过程中扮演重要角色。转录辅助调节因子通过募集一系列DNA或组蛋白结构修饰酶,调节核受体介导的靶基因转录。受体相互作用蛋白140(receptor-interacting protein140,RIP140)是一种转录辅抑制因子,其与核受体结合后能够负向调节多种代谢组织中靶基因的转录,包括脂肪组织、肌肉组织以及肝脏等。基因沉默RIP140后,多种代谢途径相关基因表达上调,主要涉及糖酵解、甘油三酯合成、三羧酸循环、脂肪酸β氧化、线粒体电子传递以及氧化磷酸化等能量代谢过程。RIP140有望成为治疗代谢综合征的候选靶点。 展开更多
关键词 RIP140 PGC-1Α 能量代谢 核受体 转录辅抑制 组蛋白去乙酰化酶 基因敲除
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M受体对H_2O_2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制 被引量:1
11
作者 江伟健 赵灵芝 +2 位作者 黄亦俊 邱鹏新 颜光美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期930-934,共5页
目的研究毒蕈碱型胆碱受体在抗氧化应激所诱导的凋亡中不同亚型之间是否存在差异。方法用含有M1M4毒蕈碱型胆碱受体亚型的质粒pCDNA3.0转染PC12细胞,加入过氧化氢诱导凋亡,观察氨甲酰胆碱激动毒蕈碱型胆碱受体后各亚型之间抗凋亡能力是... 目的研究毒蕈碱型胆碱受体在抗氧化应激所诱导的凋亡中不同亚型之间是否存在差异。方法用含有M1M4毒蕈碱型胆碱受体亚型的质粒pCDNA3.0转染PC12细胞,加入过氧化氢诱导凋亡,观察氨甲酰胆碱激动毒蕈碱型胆碱受体后各亚型之间抗凋亡能力是否存在差异,同时应用毒蕈碱型胆碱受体抑制剂阿托品,ERK和PI3K信号通路抑制剂PD98059与LY294002观察参与保护作用的相关的信号通路。结果氨甲酰胆碱激动毒蕈碱型胆碱受体后产生抗凋亡效应,各亚型之间没有差异,PI3K信号通路参与了保护作用。结论M1M4亚型毒蕈碱型胆碱受体在对抗过氧化氢诱导的凋亡没有亚型之间的差异,PI3K信号通路参与了保护作用。 展开更多
关键词 凋亡 毒蕈碱型胆碱受体 活性氧 PC12细胞 PI3K
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铜对低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用 被引量:1
12
作者 蓝秀健 叶敏忠 +3 位作者 李莹莹 刘培庆 余剑平 皮荣标 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期154-158,共5页
【目的】探讨铜体外抗低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡作用及其机制。【方法】体外培养乳鼠的CGNs并用去极化诱导凋亡模型;噻唑兰(MTT)法检测细胞存活率;相差显微镜及Hoechst 33258染色分别观察细胞及其核形态学变化;流式细胞仪(F... 【目的】探讨铜体外抗低钾诱导大鼠小脑颗粒神经元(CGNs)凋亡作用及其机制。【方法】体外培养乳鼠的CGNs并用去极化诱导凋亡模型;噻唑兰(MTT)法检测细胞存活率;相差显微镜及Hoechst 33258染色分别观察细胞及其核形态学变化;流式细胞仪(FCM)检测亚二倍体峰。【结果】1~40μmol/L的铜可抗低钾所致的大鼠CGNs凋亡,明显提高CGNs的存活率。铜(20 μmol/L)显著减少低钾所致的大鼠CGNs胞体皱缩、细胞核固缩和亚二倍体峰等凋亡特征。铜的神经保护作用可以持续72h以上。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)抑制剂LY294002可阻断铜的保护作用。【结论】一定浓度范围的铜对低钾所致的大鼠CGNs凋亡有保护作用,PI3-K/Akt信号传导通路可能参与其保护作用。 展开更多
关键词 小脑颗粒神经元 凋亡 磷脂酰肌醇3-激酶
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MAPK信号通路在心肌肥大中的作用 被引量:3
13
作者 方健 刘培庆 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B03期238-240,共3页
心肌肥大是心肌细胞对外界刺激,如压力超负荷、神经体液因子等的应答反应。多种信号通路参与心肌肥大的过程,它的分子机制尚未完全清楚。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路在细胞生长、分化、增... 心肌肥大是心肌细胞对外界刺激,如压力超负荷、神经体液因子等的应答反应。多种信号通路参与心肌肥大的过程,它的分子机制尚未完全清楚。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号转导通路在细胞生长、分化、增殖和凋亡等过程中起着重要作用,本文就MAPK主要信号通路在心肌肥大中的作用作一简要综述。 展开更多
关键词 丝裂原活化蛋白激酶 信号转导 心肌肥大
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白藜芦醇调节SphK1/AP-1信号通路抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖 被引量:7
14
作者 邓艳辉 公文艳 +3 位作者 李强 伍飞臻 段萍萍 黄河清 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期959-963,共5页
目的观察白藜芦醇干预对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖成分纤维连接蛋白(FN)、TGF-β1表达的影响,并进一步探讨其对SphK1/AP-1信号通路的调节作用。方法采用高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞株,MTT测定白藜芦醇对肾小球系膜细胞的生存活力... 目的观察白藜芦醇干预对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖成分纤维连接蛋白(FN)、TGF-β1表达的影响,并进一步探讨其对SphK1/AP-1信号通路的调节作用。方法采用高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞株,MTT测定白藜芦醇对肾小球系膜细胞的生存活力及增殖的影响;Western blot测定FN、TGF-β1、SphK1蛋白的表达;EMSA测定AP-1的活性。结果白藜芦醇可呈浓度依赖性地抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,降低肾小球系膜细胞中SphK1表达,抑制AP-1活性,从而抑制FN、TGF-β1表达。结论白藜芦醇抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,该作用可能与其抑制SphK1/AP-1信号通路密切相关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 糖尿病肾病 细胞增殖 SphK1/AP-1信号通路 纤维连接蛋白 转化生长因子Β1
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LRP6调控经典Wnt信号通路作用于阿霉素诱导的心肌细胞损伤 被引量:3
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作者 梁莉莹 路静 刘培庆 《中山大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期503-509,共7页
【目的】探究LRP6和经典Wnt/β-catenin信号通路在阿霉素心肌病中的作用及其机制。【方法】采用阿霉素(Dox)刺激H9C2细胞12h,在细胞水平上建立阿霉素心肌病模型;12只SD大鼠分为两组(各6只),腹腔分别注射生理盐水和Dox,在动物水平上建立... 【目的】探究LRP6和经典Wnt/β-catenin信号通路在阿霉素心肌病中的作用及其机制。【方法】采用阿霉素(Dox)刺激H9C2细胞12h,在细胞水平上建立阿霉素心肌病模型;12只SD大鼠分为两组(各6只),腹腔分别注射生理盐水和Dox,在动物水平上建立阿霉素心肌病;Westernblot和qPCR检测相应蛋白和mRNA表达水平变化;通过转染siRNA靶向沉默LRP6表达;采用罗丹明123、Hoechst和Mitotracker染色分别检测线粒体膜电位、细胞核固缩以及线粒体肿胀;通过流式细胞技术检测凋亡比率变化。【结果】在细胞及动物水平上,成功建立阿霉素心肌病模型;Dox引起LRP6的mRNA和蛋白水平下降;敲低LRP6加重阿霉素引起的心肌细胞凋亡和线粒体损伤;Dox和沉默LRP6均下调β-catenin,激活β-catenin可以逆转阿霉素造成的心肌损伤。【结论】Dox通过诱导LRP6表达下调,抑制了经典Wnt/β-catenin信号通路,从而引起心肌细胞凋亡和线粒体损伤。 展开更多
关键词 LRP6 阿霉素 心肌病 WNT/Β-CATENIN 凋亡 线粒体
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RIP140通过抑制SIRT5表达介导心肌细胞能量代谢紊乱(英文) 被引量:1
16
作者 黄仪 陈艳芳 刘培庆 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期808-819,共12页
【目的】探讨去琥珀酰化酶Sirtuin5(SIRT5)对受体相互作用蛋白140(RIP140)诱导的心肌线粒体能量代谢紊乱的影响。【方法】利用腺病毒感染心肌细胞诱导RIP140过表达,利用质粒转染诱导SIRT5基因过表达,si RNA干扰敲低RIP140、SIRT5表达;q ... 【目的】探讨去琥珀酰化酶Sirtuin5(SIRT5)对受体相互作用蛋白140(RIP140)诱导的心肌线粒体能量代谢紊乱的影响。【方法】利用腺病毒感染心肌细胞诱导RIP140过表达,利用质粒转染诱导SIRT5基因过表达,si RNA干扰敲低RIP140、SIRT5表达;q RT-PCR和Western blot检测SIRT5、RIP140的表达变化;q RT-PCR检测线粒体编码基因的表达情况,TMRE染色法评估线粒体膜电位,试剂盒检测细胞耗氧和ATP生成情况。所有数据均来自至少3次的独立实验。【结果】过表达RIP140明显抑制SIRT5的表达(P<0.05);敲低内源性RIP140能增加SIRT5的表达(P<0.05)。过表达RIP140亦能诱导线粒体蛋白高度琥珀酰化,抑制SIRT5的去琥珀酰化酶活性。除此,RIP140能诱导线粒体功能紊乱和能量代谢损伤作用,表现为线粒体编码基因的表达抑制(P<0.05),线粒体膜电位降低(P<0.05),细胞耗氧和ATP合成减少(P<0.05),而过表达SIRT5能抑制RIP140介导的上述能量代谢损伤(P<0.05)。此外,SIRT5受RIP140的负性调控作用依赖于过氧化物增殖体激活受体α(PPARα)。【结论】RIP140通过抑制SIRT5诱导心肌细胞线粒体功能紊乱和能量代谢损伤。 展开更多
关键词 SIRT5 RIP140 线粒体代谢 心肌代谢紊乱
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ARF鸟苷酸交换因子BIGs对高尔基体相关的囊泡转运的调控作用
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作者 林思思 林巍 +3 位作者 王莹 周春 李翠限 沈晓燕 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期311-315,共5页
【目的】探讨ARF鸟苷酸交换因子BIG1和BIG2在高尔基体相关囊泡转运方面的功能。【方法】利用脂质体将siRNA干扰序列转入细胞中,western blotting方法检测转染效率;利用细胞免疫荧光染色方法检测Hela细胞中BIGs蛋白水平的表达分布;采用Al... 【目的】探讨ARF鸟苷酸交换因子BIG1和BIG2在高尔基体相关囊泡转运方面的功能。【方法】利用脂质体将siRNA干扰序列转入细胞中,western blotting方法检测转染效率;利用细胞免疫荧光染色方法检测Hela细胞中BIGs蛋白水平的表达分布;采用Alexa568标记的转铁蛋白孵育Hela细胞,检测转铁蛋白相关的内吞体循环;利用脂质体转染VSVG-YFP病毒质粒,检测新生蛋白经从内质网经高尔基体转运至胞膜的途径。【结果】BIG1和BIG2的siRNA干扰效率均高于70%,且特异性良好;干扰掉BIGs后,细胞内TGN230结构变松散,呈现短片状或点状;干扰BIG2可导致细胞内转铁蛋白的积聚,而同时干扰BIG1则可进-步加剧转铁蛋白的积聚;BIG1或/和BIG2干扰均抑制了新生蛋白的从内质网向高尔基及细胞表面的转运过程。【结论】BIGs蛋白主要位于反面高尔基体网络,对维持其结构完整性非常重要;它们均参与调控高尔基体相关的囊泡转运,两者具有协同作用。 展开更多
关键词 RNAI BIGs 反面高尔基体网络 囊泡转运 VSVG—YFP
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PARP-2在大鼠心肌肥大中的作用
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作者 周广友 耿彪 +3 位作者 耿涛 安儒峰 田芳 刘培庆 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1153-1159,共7页
目的:在细胞和整体水平研究多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶2(PARP-2)在心肌肥大过程中表达的变化规律以及PARP-2对心肌肥大的调控作用。方法:健康雄性SD大鼠采用腹主动脉缩窄法(AAC)建立心肌肥大动物模型,采用real-time PCR和Western blo... 目的:在细胞和整体水平研究多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶2(PARP-2)在心肌肥大过程中表达的变化规律以及PARP-2对心肌肥大的调控作用。方法:健康雄性SD大鼠采用腹主动脉缩窄法(AAC)建立心肌肥大动物模型,采用real-time PCR和Western blot检测PARP-2的mRNA和蛋白表达变化;使用PARP-2特异性的siRNA干扰序列来处理细胞后,通过检测心肌细胞表面积及ANF、BNP和β-MHC的mRNA表达变化来作为评判心肌细胞肥大状况。结果:AAC大鼠心脏组织中PARP-2的蛋白和mRNA表达均显著上调;在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大模型中,AngⅡ能时间和剂量依赖性地上调PARP-2的mRNA和蛋白表达;用siRNA干扰序列沉默PARP-2能够逆转AngⅡ所诱导心肌细胞的肥大。结论:在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的体外模型和腹主动脉缩窄诱导的心肌肥大动物的体内模型中,PARP-2的mRNA和蛋白水平均显著上调;特异性沉默PARP-2能够抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。 展开更多
关键词 多聚腺苷酸二磷酸核糖基聚合酶2 血管紧张素Ⅱ 腹主动脉缩窄 心肌肥大
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