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人Aβ_(42)重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测 被引量:2
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作者 张革 王烈峰 +1 位作者 汪华侨 姚志彬 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期160-164,共5页
目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异... 目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异性。以GST-Aβ42和Aβ42肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42免疫的大鼠血清中Aβ抗体。结果原核表达的可溶性GST-Aβ42融合蛋白相对分子质量为31000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800mg/L菌液,纯度大于95%;Westernblotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ42为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2ng/ml;以GST-Aβ42和化学合成的Aβ42分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论原核表达的GST-Aβ42融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ42肽抗原,用于检测Aβ抗体。 展开更多
关键词 淀粉样Β蛋白 融合表达 基因表达 克隆 分子 酶联免疫吸附测定
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