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人Aβ_(42)重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测
被引量:
2
1
作者
张革
王烈峰
+1 位作者
汪华侨
姚志彬
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2005年第2期160-164,共5页
目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异...
目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异性。以GST-Aβ42和Aβ42肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42免疫的大鼠血清中Aβ抗体。结果原核表达的可溶性GST-Aβ42融合蛋白相对分子质量为31000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800mg/L菌液,纯度大于95%;Westernblotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ42为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2ng/ml;以GST-Aβ42和化学合成的Aβ42分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论原核表达的GST-Aβ42融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ42肽抗原,用于检测Aβ抗体。
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关键词
淀粉样Β蛋白
融合表达
基因表达
克隆
分子
酶联免疫吸附测定
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职称材料
题名
人Aβ_(42)重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测
被引量:
2
1
作者
张革
王烈峰
汪华侨
姚志彬
机构
中山大学药学院分子生物实验室
中山大学
医
学院
人体解剖教研室脑研究室
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2005年第2期160-164,共5页
基金
国家自然科学基金(30400512)
广东省自然科学基金重点项目(20013137)
+2 种基金
广东省自然科学基金(043002180)
广州市科技计划项目(2004Z3-E0151)
中山市科技局重点攻关项目(4209606)~~
文摘
目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异性。以GST-Aβ42和Aβ42肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42免疫的大鼠血清中Aβ抗体。结果原核表达的可溶性GST-Aβ42融合蛋白相对分子质量为31000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800mg/L菌液,纯度大于95%;Westernblotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ42为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2ng/ml;以GST-Aβ42和化学合成的Aβ42分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论原核表达的GST-Aβ42融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ42肽抗原,用于检测Aβ抗体。
关键词
淀粉样Β蛋白
融合表达
基因表达
克隆
分子
酶联免疫吸附测定
Keywords
amyloid beta-protein
gene expression
fusion expression
cloning, molecular
enzyme-linked immunosorbent assay
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人Aβ_(42)重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测
张革
王烈峰
汪华侨
姚志彬
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2005
2
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