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海洋病原细菌的氯霉素耐药菌株筛选鉴定及质粒消除 被引量:2
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作者 孟繁梅 汪凯 +2 位作者 潘子强 尹德胜 艾云灿 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期437-441,共5页
目的从污染海域筛选非临床氯霉素耐药株,研究耐药基因定位及耐药机制多样性。方法TCBS和EMB选择平板筛选,结合16SrDNA序列分析鉴定耐药株。MIC测定、基因组DNA-RAPD分型和质粒消除评估多样性。结果评估187株氯霉素耐药株的MIC值分布、... 目的从污染海域筛选非临床氯霉素耐药株,研究耐药基因定位及耐药机制多样性。方法TCBS和EMB选择平板筛选,结合16SrDNA序列分析鉴定耐药株。MIC测定、基因组DNA-RAPD分型和质粒消除评估多样性。结果评估187株氯霉素耐药株的MIC值分布、属种分布、耐药基因定位及耐药机制。发现80株耐药MIC25~128μg/ml是CLSI/NCCLS(1995年)定义临床标准(MIC12.5μg/ml)的2~10倍,分布在弧菌科和肠杆菌科主要属种;58株MIC>25μg/ml基因组DNA-RAPD分型与菌落表型分组结果吻合,显示多样性丰富。采用多轮高温(~43℃)和高浓度(~1%)SDS双重处理和交替培养,77株MIC>25μg/ml分离株的质粒消除效率为28.6%;55株不能消除耐药表型,暗示染色体编码耐药基因;22株可消除氯霉素耐药表型,其中16株完全消除,暗示质粒独立编码耐药基因,6株部分消除,暗示质粒和染色体分别编码耐药基因。结论来自污染海域环境的非临床氯霉素耐药株可作为新模型,提供耐药基因定位及耐药机制多样性的新视野。 展开更多
关键词 海洋环境 病原细菌 氯霉素 耐药性 基因定位 质粒 消除
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海洋噬菌体EJ(3)9P1 ORF172基因的克隆与表达 被引量:1
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作者 董浩 艾云灿 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1253-1256,共4页
通过PCR的方法对海洋噬菌体EJ(3)9P1中ORF172基因进行克隆,并构建了表达载体pET28-ORF172,转入大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达,并通过SDS-PAGE对表达结果进行分析。结果成功构建了ORF172的表达体系,为进一步开展噬菌体EJ(3)9P1的尾... 通过PCR的方法对海洋噬菌体EJ(3)9P1中ORF172基因进行克隆,并构建了表达载体pET28-ORF172,转入大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达,并通过SDS-PAGE对表达结果进行分析。结果成功构建了ORF172的表达体系,为进一步开展噬菌体EJ(3)9P1的尾丝基因结构与功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 海洋噬菌体 ORF172 克隆 表达
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转基因植物中Bt Cry2Ab蛋白的抗原表位特征预测
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作者 高洁荣 何颖 +2 位作者 邹泽红 陶爱林 艾云灿 《安徽农业科学》 CAS 2012年第25期12400-12402,12586,共4页
[目的]通过生物信息学方法了解转基因作物中Bt Cry2Ab蛋白的二级结构、三级结构、B细胞抗原表位及T细胞抗原表位等结构特征,为今后的抗体设计奠定基础。[方法]以在NCBI数据库中获得Cry2Ab蛋白序列为材料,应用DNAStar中的多种方法预测其... [目的]通过生物信息学方法了解转基因作物中Bt Cry2Ab蛋白的二级结构、三级结构、B细胞抗原表位及T细胞抗原表位等结构特征,为今后的抗体设计奠定基础。[方法]以在NCBI数据库中获得Cry2Ab蛋白序列为材料,应用DNAStar中的多种方法预测其B细胞表位,并通过在线预测软件NetMHCII 2.2分析Cry2Ab蛋白与MHC-II类分子的结合能力,从而预测其T细胞抗原表位。[结果]对Cry2Ab蛋白B细胞抗原表位的预测表明,Cry2Ab蛋白的第208~215区域是潜在的B细胞抗原表位;对Cry2Ab蛋白与MHC-II类分子结合能力的分析表明,Cry2Ab蛋白的第177~185区域、299~307区域和255~263区域是潜在的T细胞抗原表位,暗示含有HLA-DRB10101和HLA-DRB10701等位基因的人群对Cry2Ab蛋白更敏感。[结论]该研究有助于深入了解Cry2Ab蛋白的生物学特征,为完善转基因食品过敏原性的评估方法提供新线索。 展开更多
关键词 转基因植物 过敏原性 Cry2Ab蛋白 B细胞表位 T细胞表位
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苏云金芽孢杆菌Cry2Aa蛋白的体外表达及纯化
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作者 高洁荣 何颖 +1 位作者 邹泽红 艾云灿 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第3期702-705,共4页
根据大肠杆菌密码子偏好性对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cry2Aa基因进行优化,并合成全长基因,将cry2Aa基因克隆到表达载体pET-44a上,转化到大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达,优化表达条件,采用亲和层析和SDS-PAGE胶回收纯化,W... 根据大肠杆菌密码子偏好性对苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)cry2Aa基因进行优化,并合成全长基因,将cry2Aa基因克隆到表达载体pET-44a上,转化到大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达,优化表达条件,采用亲和层析和SDS-PAGE胶回收纯化,Western blot鉴定回收产物。结果表明,IPTG浓度为0.50 mmol/L、27℃诱导4 h时Cry2Aa蛋白表达量最高,SDS-PAGE胶回收Cry2Aa纯化蛋白所得的产量高于亲和层析法。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis) Cry2Aa蛋白 表达 纯化
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