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题名穴蚁蛉幼虫全长均一化cDNA文库的构建
被引量：4
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作者
杨展
李广宏
邱壮伟
王欢歌
苏志坚
黄亚东
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机构
暨南大学生命科学学院医药生物技术研究开发中心
中山大学生命科学学院生物防治国家重点实验室昆虫学研究所
暨南大学广东省生物制药重点实验室
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出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第5期102-107,共6页
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基金
广东省教育厅重大项目(cgzhzd0710)
广东省教育部产学研结合项目(2009B090300285)
+1 种基金
教育部新世纪优秀人才支持计划项目(NCET-08-0611)
广东省科技计划项目(2007B030700004)
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文摘
通过构建穴蚁蛉幼虫(俗称蚁狮)全长均一化cDNA文库,以期了解蚁狮的抗菌肽、毒素蛋白以及其它药用蛋白种类,为日后筛选、克隆表达和分离纯化这些药用蛋白奠定基础。用针刺诱导蚁狮产生抗菌物质后,分离纯化总RNA,结合SMART全长文库与DSN(duplex-specific nuclease)均一化技术,构建全长均一化cDNA文库,并通过平板计数和菌落PCR方法鉴定文库。随机挑选192个单克隆进行5′端测序,并与NCBI数据库进行比对分析。结果显示,构建出的文库平均插入片段长度为1 200 bp,原始文库的滴度达到7.5×105CFU/mL,而扩增文库则为1.95×1011CFU/mL。在所挑选的单克隆中,共获得190条有效序列,平均读长1 340 bp,文库重组率达到98.96%。与NCBI数据库比对后发现,这些序列可能是一些编码蚁狮免疫、消化及毒性蛋白的基因。
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关键词
穴蚁蛉
蚁狮
全长CDNA文库
均一化
EST分析
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Keywords
Myrmeleon sagax Ant-lion Full-length cDNA library Normalization EST analysis
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分类号
S899.9
[农业科学—特种经济动物饲养]
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