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利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因
1
作者
任广彩
张英
+2 位作者
丛佩清
陈瑶生
何祖勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期837-842,共6页
锌指核酸酶（zinc finger nuclease,ZFN）是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂（double-strand break,DSB）.通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~...
锌指核酸酶（zinc finger nuclease,ZFN）是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂（double-strand break,DSB）.通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~104倍.目前,利用ZFN对动物内源基因进行敲除的研究较多,但对转基因动物中外源多拷贝基因进行敲除的报道较少.本研究首先利用荧光定量PCR法对本实验室培育的两头转基因猪中增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的拷贝数进行鉴定,发现其拷贝数分别为11.95和17.36拷贝;然后将靶向EGFP的一对ZFN转染进拷贝数为17.36的EGFP转基因猪的成纤维细胞中,并通过流式和CEL-1酶切方法检测敲除效率.结果表明,转染400 ng、800 ng和1 200 ng ZFN的切割效率分别为0.97%、1.39%和1.76%,可见随着转染ZFN剂量的增加,ZFN的切割效率逐渐提高.但是,不发绿色荧光的细胞比例却没有明显提高,因此认为,ZFN敲除转基因动物中多拷贝基因的效率还是比较低.
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关键词
锌指核酸酶
外源基因
增强型绿色荧光蛋白
转基因猪
敲除效率
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职称材料
题名
利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因
1
作者
任广彩
张英
丛佩清
陈瑶生
何祖勇
机构
中山大学生命科学学院、有害生物控制与资源利用国家重点实验室
广东大华农动物保健品股份有限公司
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期837-842,共6页
基金
国家转基因重大专项(No.2011ZX08006-005)资助~~
文摘
锌指核酸酶（zinc finger nuclease,ZFN）是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂（double-strand break,DSB）.通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~104倍.目前,利用ZFN对动物内源基因进行敲除的研究较多,但对转基因动物中外源多拷贝基因进行敲除的报道较少.本研究首先利用荧光定量PCR法对本实验室培育的两头转基因猪中增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的拷贝数进行鉴定,发现其拷贝数分别为11.95和17.36拷贝;然后将靶向EGFP的一对ZFN转染进拷贝数为17.36的EGFP转基因猪的成纤维细胞中,并通过流式和CEL-1酶切方法检测敲除效率.结果表明,转染400 ng、800 ng和1 200 ng ZFN的切割效率分别为0.97%、1.39%和1.76%,可见随着转染ZFN剂量的增加,ZFN的切割效率逐渐提高.但是,不发绿色荧光的细胞比例却没有明显提高,因此认为,ZFN敲除转基因动物中多拷贝基因的效率还是比较低.
关键词
锌指核酸酶
外源基因
增强型绿色荧光蛋白
转基因猪
敲除效率
Keywords
zinc finger nuclease
exogenous gene
EGFP
transgenic pig
knockout efficiency
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因
任广彩
张英
丛佩清
陈瑶生
何祖勇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
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