瑞巴派特对阿司匹林诱导的小鼠小肠上皮屏障损伤的修复 被引量：14

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作者 石柳 夏忠胜 +5 位作者 赖宇 王思仪 毕文婷 刘雨 于涛 陈其奎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1669-1675,共7页

目的:探讨瑞巴派特能否通过促进肠道上皮屏障结构和功能的修复改善阿司匹林导致的小肠黏膜损伤。方法:本研究利用BALB/c小鼠,使用阿司匹林(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续5 d灌胃的方法制作小肠损伤模型,并根据是否诱导小肠损伤... 目的:探讨瑞巴派特能否通过促进肠道上皮屏障结构和功能的修复改善阿司匹林导致的小肠黏膜损伤。方法:本研究利用BALB/c小鼠,使用阿司匹林(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续5 d灌胃的方法制作小肠损伤模型,并根据是否诱导小肠损伤及接受瑞巴派特(320 mg·kg^(-1)·d^(-1))的处理将小鼠分为正常对照组、模型组、瑞巴派特对照组及瑞巴派特治疗组。通过透射电镜、免疫组化、qPCR和Western blot等方法,在不同时点系统地观察瑞巴派特对阿司匹林所致的小鼠小肠黏膜损伤模型中小肠黏膜结构及屏障功能蛋白表达的影响。结果:阿司匹林所致的小肠黏膜损伤小鼠,经瑞巴派特(320 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续5 d处理后,小肠上皮细胞间紧密连接结构的损害明显减轻,小肠组织中紧密连接蛋白ZO-1及occludin在mRNA及蛋白质水平的表达均明显增加(P<0.05),环氧化酶2(COX-2)和增殖相关信号分子β-catenin、c-Myc的表达也高于对照组(P<0.05),组织匀浆中前列腺素E_2浓度显著增加(P<0.05),而COX-1的表达在治疗组中无明显改变。同时,治疗组血清中的D-乳酸水平明显降低(P<0.05)。结论:瑞巴派特能够通过上调COX-2的表达,促进阿司匹林所致的小鼠小肠黏膜损伤的修复,改善肠屏障的结构与功能。 展开更多

关键词 瑞巴派特 阿司匹林 小肠黏膜损伤 Β-CATENIN 环氧化酶2

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lncRNA-MALAT1通过靶向下调miR-570-3p促进胃癌细胞增殖 被引量：15

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作者 侯婧瑛 凌辉 +3 位作者 金小岩 罗信 李楚强 王凌云 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2145-2152,共8页

目的:探讨长链非编码RNA MALAT1(lncRNA-MALAT1)是否可通过靶向下调微小RNA-570-3p(miR-570-3p)促进胃癌细胞增殖。方法:将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901分为3组:空白对照组、si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组,其中空白对照组为单纯的SGC7... 目的:探讨长链非编码RNA MALAT1(lncRNA-MALAT1)是否可通过靶向下调微小RNA-570-3p(miR-570-3p)促进胃癌细胞增殖。方法:将体外培养的人胃癌细胞株SGC7901分为3组:空白对照组、si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组,其中空白对照组为单纯的SGC7901细胞株,si-MALAT1组和si-MALAT1 NC组分别转染lncRNA-MALAT1 siRNA及其阴性对照。MTS法检测各组细胞的增殖情况。RT-qPCR检测单纯的SGC7901细胞株培养不同时点的miR-570-3p及不同组别lncRNA-MALAT1和miR-570-3p的表达情况。通过生物信息学软件RegRNA预测获取lncRNA-MALAT1与miR-570-3p潜在的互补结合位点。将MALAT1及其突变体克隆到萤光素酶载体psiCHECK-2中,构建MALAT1野生型和突变型质粒,并采用酶切和测序方法鉴定psi CHECK-2-MALAT1载体是否构建成功。将MALAT1野生型和突变型质粒分别与miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照、miR-570-3p抑制剂阴性对照在293T细胞中共转染,收集细胞后通过双萤光素酶报告系统检测不同组别的萤光素酶活性,从而对lncRNA-MALAT1与miR-570-3p的靶向调节关系进行验证。结果:与空白对照组和si-MALAT1NC组相比较,si-MALAT1组在不同时点(24、48和72 h)的A490值显著降低(P <0. 01)。在单纯的SGC7901细胞株中,随着时间的推移,miR-570-3p的表达量逐渐下降(P <0. 05)。si-MALAT1组lncRNA-MALAT1的表达水平显著降低,而miR-570-3p表达显著升高(P <0. 01)。双萤光素酶报告基因检测显示,与miR-570-3p模拟物阴性对照组相比,miR-570-3p模拟物组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性显著降低(P <0. 01),而miR-570-3p抑制剂组MALAT1野生型报告基因的萤光素酶活性较miR-570-3p模拟物组明显增高(P <0. 01); miR-570-3p模拟物、miR-570-3p抑制剂、miR-570-3p模拟物阴性对照及miR-570-3p抑制剂阴性对照对MALAT1突变型的表达均无明显影响。结论:lncRNA MALAT1能够通过靶向结合并下调miR-570-3p促进胃癌细胞增殖。 展开更多

关键词 长链非编码RNAMALAT1 微小RNA-570-3p 胃癌 细胞增殖

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骨髓间充质干细胞、肿瘤坏死因子受体Ⅱ-抗体融合蛋白和美沙拉嗪对TNBS诱导的结肠炎大鼠疾病活动指数与组织损伤指数的影响 被引量：7

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作者 吴新环 黄花荣 +2 位作者 钟英强 叶小研 王琳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期784-789,共6页

目的:研究骨髓间充质干细胞(MSCs)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ-抗体融合蛋白(TNFRⅡ-IgG)和美沙拉嗪对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎大鼠疾病活动指数(DAI)与组织损伤指数(TDL)的影响。方法:MSCs应用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养。TN... 目的:研究骨髓间充质干细胞(MSCs)、肿瘤坏死因子受体Ⅱ-抗体融合蛋白(TNFRⅡ-IgG)和美沙拉嗪对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎大鼠疾病活动指数(DAI)与组织损伤指数(TDL)的影响。方法:MSCs应用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养。TNBS/乙醇灌肠诱导SD大鼠结肠炎模型。81只SD大鼠随机分成正常对照组(n=15,A组)、结肠炎组(n=15,B组)、MSCs治疗1组(3×106MSCs,n=15,C组)、MSCs治疗2组(5×106MSCs,n=15,D组)、TNFRⅡ-IgG治疗组(n=6,E组)和美沙拉嗪治疗组(n=15,F组)。采用DAI描述大鼠的表现,大体CMDI描述肠道的肉眼下表现,TDI评价肠道组织学改变。结果:MSCs经过3次传代后可纯化。B组大鼠各时点DAI、CMDI和TDI评分均显著高于A组(P<0.05);第6天除A组外各组大鼠评分之间无明显差异(P>0.05);第9天C组、D组和F组各评分均低于B组(P<0.05),C组评分与D组无显著差异(P>0.05);第14天C、D、E和F组评分均低于B组(P<0.05),其中F组评分最高(P<0.05),E组次之(P<0.05),D组评分最低(P<0.05)。结论:MSCs、TNFRⅡ-IgG和美沙拉嗪灌肠液可显著改善TNBS诱导的结肠炎大鼠第14天的DAI、CMDI和TDI指标,其中效果最好的是MSCs,其次是TNFRⅡ-IgG,美沙拉嗪灌肠液效果较差。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 肿瘤坏死因子受体Ⅱ-抗体融合蛋白 美沙拉嗪 炎症性肠病 大鼠

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氟尿嘧啶类联合奥沙利铂方案治疗晚期转移性小肠癌的回顾性多中心研究 被引量：8

4

作者 王凌云 张乐 +9 位作者 邓燕明 王风华 冯芬 陈永昌 陈翠 王德深 李聪 安欣 徐瑞华 李宇红 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期399-403,共5页

目的:小肠癌是一种少见的消化道肿瘤,多数患者初诊时已无法手术切除或出现远处转移,因此化疗在小肠癌治疗中占有重要地位。本研究旨在评价FOLFOX和XELOX方案治疗晚期中国小肠癌患者的疗效及安全性。方法:对2004年1月～2010年1月期间,在... 目的:小肠癌是一种少见的消化道肿瘤,多数患者初诊时已无法手术切除或出现远处转移,因此化疗在小肠癌治疗中占有重要地位。本研究旨在评价FOLFOX和XELOX方案治疗晚期中国小肠癌患者的疗效及安全性。方法:对2004年1月～2010年1月期间,在中山大学肿瘤医院等3个中心所有接受过FOLFOX或XELOX方案化疗的34例晚期小肠癌患者进行了回顾性分析。利用SPSS13.0统计软件对方案的有效率(RR),无进展生存时间(PFS),总生存时间(OS)以及化疗相关的不良反应进行分析。结果:共纳入病例34例,其中28例接受了FOLFOX治疗,6例接受了XELOX方案治疗。客观有效率及疾病控制率分别为32.3%和61.7%。中位PFS和OS分别为6.3和14.2个月。化疗相关不良反应可耐受,3～4级不良反应发生率较少,其中1～2级纳差(58.8%)、恶心(47.1%)、外周神经毒性(41.2%)是最常见的反应。结论:本研究在国内首次报道了奥沙利铂联合氟尿嘧啶类方案治疗晚期小肠癌疗效,结果显示FOLFOX或XELOX方案治疗晚期小肠癌安全有效,该方案仍值得进一步研究。 展开更多

关键词 FOLFOX XELOX奥沙利铂 氟尿嘧啶晚期小肠癌化疗

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应用噬菌体展示肽库技术淘选大鼠CCR5膜外第一、二胞外环特异性结合的活性拮抗肽与初步鉴定 被引量：10

5

作者 刘思雪 胡梅 +2 位作者 叶小研 黄花荣 钟英强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1225-1230,共6页

目的：利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5（CCR5）膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽,并鉴定其与CCR5的结合能力。方法：在蛋白质数据库中查得大鼠CCR5第一、二胞外环的氨基酸序列,合成相应的线性短肽作为淘选的靶分子... 目的：利用噬菌体展示肽库技术淘选与大鼠CC趋化因子受体5（CCR5）膜外第一、二胞外环特异性结合的短肽,并鉴定其与CCR5的结合能力。方法：在蛋白质数据库中查得大鼠CCR5第一、二胞外环的氨基酸序列,合成相应的线性短肽作为淘选的靶分子,利用噬菌体展示7肽文库进行3~4轮淘选,用ELISA法鉴定所选肽与靶分子的结合,并测定其与浓度的关系。结果：与CCR5第一、二胞外环特异性结合的噬菌体展示的短肽序列分别为GHWKVWL和HYIDFRW,ELISA鉴定呈阳性反应,且短肽与靶分子的结合具有浓度依赖性和可饱和性。结论：利用噬菌体展示技术成功获得了2条CCR5特异性结合的短肽,并在体外证明其可与CCR5第一、二胞外环具有结合能力。 展开更多

关键词 CC趋化因子受体5 拮抗肽 噬菌体展示

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IL-15与肿瘤治疗的研究进展 被引量：5

6

作者 罗信 吴淑云 王凌云 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期911-915,919,共6页

早在1994年,IL-15就被作为刺激T细胞复制的细胞因子被发现（[1]）,IL-15属于4-螺旋束细胞因子家族,作为一种可溶性细胞因子,在NK细胞、T细胞和B细胞的复制和分化都起着重要作用（[2]）。而肿瘤的发生发展和转移的过程离不开淋巴细胞介... 早在1994年,IL-15就被作为刺激T细胞复制的细胞因子被发现（[1]）,IL-15属于4-螺旋束细胞因子家族,作为一种可溶性细胞因子,在NK细胞、T细胞和B细胞的复制和分化都起着重要作用（[2]）。而肿瘤的发生发展和转移的过程离不开淋巴细胞介导的免疫应答,IL-15增强T细胞分化增值和B细胞分泌抗体等特性,对于增强对肿瘤细胞的免疫应答起着关键作用。 展开更多

关键词 IL-15 细胞分化 细胞因子家族 免疫应答 分泌抗体 可溶性细胞 肿瘤病 细胞介导 腺病毒载体 荷瘤动物

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IFN-γ上调人胃癌细胞株PD-L1表达 被引量：6

7

作者 陈淑芬 侯婧瑛 +1 位作者 吴淑云 王凌云 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1952-1956,共5页

目的:研究不同人胃癌细胞株表面程序性死亡配体1(PD-L1)表达及干扰素γ(IFN-γ)对其表达的诱导情况。方法:分别培养不同人胃癌细胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901,经不同浓度IFN-γ、作用不同时间后,利用流式细胞术及real-time PCR检... 目的:研究不同人胃癌细胞株表面程序性死亡配体1(PD-L1)表达及干扰素γ(IFN-γ)对其表达的诱导情况。方法:分别培养不同人胃癌细胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901,经不同浓度IFN-γ、作用不同时间后,利用流式细胞术及real-time PCR检测胃癌细胞株PD-L1在蛋白和mRNA水平的表达情况。结果:流式细胞术显示AGS、BGC823、MGC803和SGC7901细胞PD-L1蛋白表达率分别为(1.567±0.109)%、(2.640±0.577)%、(1.760±0.236)%和(16.030±1.289)%;不同胃癌细胞株对IFN-γ反应不同,经不同浓度IFN-γ刺激后均可不同程度上调PD-L1的表达(P<0.05);real-time PCR显示10μg/L IFN-γ刺激各胃癌细胞株12 h后PD-L1 mRNA水平上调(P<0.05)。结论:胃癌细胞株组成性表达PD-L1;IFN-γ可上调胃癌细胞株PD-L1的表达,呈现浓度、时间依赖性;其中以SGC7901细胞(来源于转移淋巴结)表达最高,推测胃癌细胞中PD-L1的表达与肿瘤分化程度无关,与组织来源和淋巴结转移有关;IFN-γ上调胃癌细胞PD-L1,表明IFN-γ并非都是抑制肿瘤增殖、生长,可能参与介导肿瘤免疫逃逸,故临床运用IFN-γ辅助治疗胃癌时应慎用。 展开更多

关键词 胃癌细胞 程序性死亡配体1 干扰素Γ 预后

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人结肠癌细胞系 SP 细胞 microRNA 表达谱的初步分析 被引量：3

8

作者 夏忠胜 钟娃 +3 位作者 于涛 练国达 周慧敏 陈广成 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1184-1191,共8页

目的:探讨结肠癌侧群(SP)细胞在结肠癌多药耐药性中的作用及其microRNA生物标志。方法:结肠癌SP细胞的分选采用流式细胞术,细胞活力的测定采用MTT法,microRNA表达谱的检测采用microRNA芯片,microRNA表达的验证采用实时荧光定量PCR。结果... 目的:探讨结肠癌侧群(SP)细胞在结肠癌多药耐药性中的作用及其microRNA生物标志。方法:结肠癌SP细胞的分选采用流式细胞术,细胞活力的测定采用MTT法,microRNA表达谱的检测采用microRNA芯片,microRNA表达的验证采用实时荧光定量PCR。结果:(1)HCT-15、HT-29及LoVo结肠癌细胞系中SP细胞的比例分别为16.75%、13.02%及9.52%。(2)化疗药(5-氟尿嘧啶、草酸铂及阿霉素)对3种结肠癌细胞系SP细胞的IC_(50)均明显高于对非SP细胞的IC_(50)(P<0.05)。(3)microRNA芯片检测表明miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在3种结肠癌细胞系的SP细胞中表达均上调,实时荧光定量PCR亦证实此结果。结论:miR-5000-3p、miR-5009-3p及miR-552在结肠癌细胞系的SP细胞中表达上调,有可能成为结肠癌SP细胞的潜在microRNA生物标志。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 侧群细胞 微小RNA miR-5000-3p miR-5009-3p miR-552

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硫唑嘌呤对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响 被引量：4

9

作者 昝慧 黄花荣 +2 位作者 钟英强 吴新环 叶小研 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期785-790,共6页

目的:研究硫唑嘌呤(AZA)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、凋亡和细胞周期的影响,为炎症性肠病的临床治疗提供实验依据。方法:含10%FBS的低糖DMEM培养基培养大鼠MSCs,50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L的AZA分别作用于大鼠MSCs... 目的:研究硫唑嘌呤(AZA)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、凋亡和细胞周期的影响,为炎症性肠病的临床治疗提供实验依据。方法:含10%FBS的低糖DMEM培养基培养大鼠MSCs,50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、300 mg/L的AZA分别作用于大鼠MSCs 24 h、48 h和72 h,用显微镜下直接计数法检测MSCs的增殖情况并绘制生长曲线,用流式细胞术检测MSCs凋亡和细胞周期。结果:MSCs经过3次传代后可纯化。在小于100 mg/L浓度下,AZA对MSCs的增殖、细胞周期与凋亡无显著影响(P>0.05),而AZA在大于200 mg/L浓度下作用72 h后,MSCs生长受到明显抑制,抑制率大于66%,凋亡率明显升高(P<0.05);在300 mg/L浓度下作用72 h时,MSCs的凋亡率则明显降低,而MSCs坏死率明显升高(P<0.05)。在大于200 mg/L的AZA作用下,随着作用时间延长,MSCs进入G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。结论:一定浓度的AZA对大鼠MSCs的增殖、细胞凋亡和细胞周期均有明显的影响。大剂量的AZA会直接造成MSCs死亡。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 细胞凋亡 细胞周期 硫唑嘌呤 大鼠

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CCR5在炎症性肠病患者肠黏膜的表达及其与β-arrestin2表达的关系 被引量：5

10

作者 叶小研 刘思雪 +3 位作者 胡梅 沈溪明 黄花荣 钟英强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期713-718,共6页

目的:通过分析CCR5在炎症性肠病(IBD)患者活检肠黏膜的表达及其与β-arrestin 2表达的相关性,探讨CCR5与β-arrestin 2在IBD发病中的作用。方法:IBD活动期组53例、IBD缓解期组26例和正常对照组30例纳入研究,用En Vision二步免疫组化方... 目的:通过分析CCR5在炎症性肠病(IBD)患者活检肠黏膜的表达及其与β-arrestin 2表达的相关性,探讨CCR5与β-arrestin 2在IBD发病中的作用。方法:IBD活动期组53例、IBD缓解期组26例和正常对照组30例纳入研究,用En Vision二步免疫组化方法检测活检肠黏膜CCR5和β-arrestin 2的表达。结果:IBD活动期组CCR5阳性表达率及免疫组化评分均高于正常对照组和IBD缓解期组(P<0.05),CCR5表达与IBD活动期组的临床严重程度、病变范围及内镜下分级无明显关联性;β-arrestin 2在IBD活动期组的阳性表达率均明显低于IBD缓解期组和正常对照组(P<0.05),并且在IBD活动期β-arrestin 2表达与CCR5表达呈负相关性(P<0.05)。结论:在IBD活动期组肠黏膜CCR5呈高表达,β-arrestin 2呈明显低表达,CCR5与β-arrestin 2表达呈负相关性。 展开更多

关键词 炎症性肠病 CCR5 Β-ARRESTIN 2

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siRNA沉默COX-2基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响 被引量：3

11

作者 钟英强 黄花荣 +3 位作者 刘娟 林莹 夏忠胜 昝慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1290-1296,共7页

目的:研究siRNA沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响。方法:以Lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染siRNA-COX-2至Capan-2细胞。应用RT-PCR、realtime PCR检测COX-2-mRNA表达,Western b... 目的:研究siRNA沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响。方法:以Lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染siRNA-COX-2至Capan-2细胞。应用RT-PCR、realtime PCR检测COX-2-mRNA表达,Western blotting检测COX-2蛋白的表达。应用细胞直接计数法检测细胞的增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡与周期。应用裸鼠模型评估COX-2-siRNA转染的Capan-2细胞成瘤能力的影响。结果:在siRNA-COX-2浓度为50 nmol/L、Lipo为5μL∶2 mL转染容积条件下,在Capan-2细胞的转染效率可达96.47%。siRNA-COX-2沉默Capan-2细胞中COX-2基因表达的最佳序列为siR-NA006,转染24 h以后沉默效率达73%,COX-2蛋白表达水平在转染后48 h和72 h分别被下调了67%和61%。转染48 h后,Capan-2细胞生长明显减慢(P<0.05),48 h和72 h抑制细胞增殖率分别为35.48%和56.32%。细胞凋亡率较对照组高(P<0.05),48 h和72 h细胞凋亡率为2.03%和3.27%。转染24 h、48 h和72 h G0/G1期的比例分别是58.03%、63.31%和65.66%,S期的比例分别是30.27%、24.87%和22.2%。siRNA-COX-2转染Capan-2细胞在裸鼠的皮下形成的肿瘤体积和重量明显减少(P<0.05)。结论:siRNA006-COX-2可有效沉默COX-2基因的表达,可明显抑制Capan-2细胞的生长并降低其成瘤能力。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 Capan-2细胞 环氧合酶-2 RNA干扰 细胞增殖 细胞凋亡 细胞周期

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反义miR-196a对人胰腺癌PANC-1细胞侵袭和迁移的抑制作用 被引量：4

12

作者 张世能 庄晓虹 +4 位作者 唐健 庄燕妍 黄凤婷 陈文博 程文捷 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1367-1372,共6页

目的:探讨微小RNA-196a(miR-196a)在胰腺癌细胞系中表达状况及反义miR-196a对人胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响。方法:miR-196a采用实时荧光定量PCR检测。人工化学合成反义miR-196a并转染PANC-1细胞。CCK-8法检测细胞增殖。流式细胞... 目的:探讨微小RNA-196a(miR-196a)在胰腺癌细胞系中表达状况及反义miR-196a对人胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响。方法:miR-196a采用实时荧光定量PCR检测。人工化学合成反义miR-196a并转染PANC-1细胞。CCK-8法检测细胞增殖。流式细胞术检测细胞凋亡情况。通过划痕损伤实验和Transwell小室细胞侵袭、迁移实验检测PANC-1细胞侵袭和迁移能力。构建野生型及突变型核因子κB抑制蛋白α(NFKBIA)3'UTR的萤光素酶报告载体,检测海肾萤光素酶的相对活性以验证miR-196a对NFKBIA mRNA的作用靶点。结果:人胰腺癌细胞系中miR-196a呈高表达;转染反义miR-196a后,PANC-1细胞miR-196a表达下降,其细胞增殖和凋亡无显著改变(P>0.05);而转染反义miR-196a组中通过Transwell小室的细胞数明显低于各对照组(P<0.01)。与各对照组相比,共转染野生型NFKBIA的3'UTR和反义miR-196a可使海肾萤光素酶相对活性显著提高。结论:miR-196a可能是癌微RNA(oncomiR)之一,有望成为人胰腺癌基因治疗的候选靶点。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 微小RNA 肿瘤侵袭

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Bmi-1基因过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响 被引量：3

13

作者 练国达 邓辉 +4 位作者 陈茵婷 曾林涓 张秋波 钱辰琛 黄开红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期807-810,共4页

目的:探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(Bmi-1)过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法:采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因Bmi-1的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blott... 目的:探讨原癌基因B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1(Bmi-1)过表达对人正常胃黏膜上皮细胞株GES-1增殖的影响。方法:采用逆转录病毒介导转染方法将携带原癌基因Bmi-1的质粒或空质粒稳定转染GES-1细胞,通过real-time PCR及Western blotting在mRNA及蛋白水平鉴定转染效果。流式细胞术检测过表达Bmi-1对GES-1细胞周期的影响。应用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂盒检测稳定转染Bmi-1对GES-1细胞增殖的影响。结果:Real-time PCR及Western blotting结果均表明成功建立稳定转染Bmi-1基因的GES-1细胞株。流式细胞术结果表明,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞G0/G1期减少,G2/M期和S期细胞增多。生长曲线显示,过表达Bmi-1基因使GES-1细胞增殖速度明显提高。结论:过表达Bmi-1基因能调控GES-1细胞的细胞周期,促进GES-1细胞的增殖。 展开更多

关键词 GES-1细胞 胃肿瘤 B淋巴瘤莫洛尼鼠白血病病毒插入区1 细胞周期

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叶酸修饰的聚乙烯亚胺聚合物载PD-L1 siRNA体外靶向胃癌细胞的研究 被引量：3

14

作者 罗信 彭霞 +3 位作者 陈广成 侯婧瑛 吴淑云 王凌云 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2179-2187,共9页

目的:构建高效的siRNA纳米载体靶向SGC-7901胃癌细胞,并下调胃癌表达的程序性死亡配体1(PD-L1)。方法:检测叶酸(FA)-PEG-SS-PEI-SPION纳米载体与siRNA复合后的粒径、电位等表征;体外实验检验siRNA的结合能力、复合物细胞毒性、细胞摄入... 目的:构建高效的siRNA纳米载体靶向SGC-7901胃癌细胞,并下调胃癌表达的程序性死亡配体1(PD-L1)。方法:检测叶酸(FA)-PEG-SS-PEI-SPION纳米载体与siRNA复合后的粒径、电位等表征;体外实验检验siRNA的结合能力、复合物细胞毒性、细胞摄入能力及转染效率;磁共振(MR)成像检测示踪能力;检验胃癌细胞PD-L1下调效应及共培养T细胞的细胞因子水平。结果:N/P比值为10时,FA-PEG-SS-PEI-SPION完全复合siRNA,形成电位为(9.14±0.80)m V、粒径为(116.7±2.5)nm的多聚复合物。靶向组的转染率为(95.06±0.44)%,与非靶向组的(93.87±1.05)%相当;平均荧光强度为1 892.67±81.51,高于非靶向组的1 324.33±186.58(P<0.05)。普鲁士蓝染色和激光共聚焦显微镜成像证实了复合物的细胞摄入。体外MR成像验证了聚合物的MR造影成像能力。靶向组PD-L1的mRNA最低相对表达量为9.07%±0.79%,Western blot显示PD-L1的表达显著降低。共培养实验显示IFN-γ和TNF-α的分泌水平增加,IL-10的分泌水平降低(P<0.05)。结论:本研究构建了FA-PEG-SS-PEI-SPION纳米载体,并证明了其体外靶向细胞及载siRNA下调PD-L1表达的能力和MR示踪的能力,是一种高效和安全的靶向治疗纳米载体。 展开更多

关键词 程序性死亡配体1 胃癌 叶酸 磁共振成像 SIRNA

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CCR5第一、二胞外环特异性结合的拮抗短肽对TNBS诱导SD大鼠结肠炎的治疗作用 被引量：3

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作者 胡梅 宋杨达 +4 位作者 刘思雪 宋铱航 沈溪明 黄花荣 钟英强 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期902-907,共6页

目的:研究C-C趋化因子受体5(CCR5)膜外第一、二胞外环(ECL1和ECL2)特异性结合的拮抗短肽对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎模型大鼠的治疗作用与机制。方法:采用100 mg/kg TNBS诱导结肠炎SD大鼠模型;用不同剂量的2条拮抗短肽(ECL1:25、3... 目的:研究C-C趋化因子受体5(CCR5)膜外第一、二胞外环(ECL1和ECL2)特异性结合的拮抗短肽对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的结肠炎模型大鼠的治疗作用与机制。方法:采用100 mg/kg TNBS诱导结肠炎SD大鼠模型;用不同剂量的2条拮抗短肽(ECL1:25、35和45 mg/kg;ECL2:15、25和35 mg/kg)分别作用于模型大鼠,观察其对大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠大体损伤指数(CMDI)和组织病理学改变的影响,采用real-time PCR和Western blot法分别检测结肠组织TNF-α和COX-2的mRNA与蛋白表达水平。结果:与模型组相比,有效剂量的ECL2拮抗短肽HY治疗组大鼠疾病活动程度、肠道溃疡及病理组织学损伤均有明显减轻,各评分指数差异具有统计学意义(P<0.05);TNF-α和COX-2的蛋白和mRNA表达水平均明显下降(P<0.05)。ECL1拮抗短肽GH作用的大鼠结肠炎症状评分及TNF-α和COX-2炎症因子表达无明显改变。结论:ECL2拮抗短肽可能通过下调结肠黏膜TNF-α和COX-2的表达来缓解TNBS诱导的SD大鼠结肠炎,而ECL1拮抗短肽的作用不明显。 展开更多

关键词 C-C趋化因子受体5 拮抗肽 炎症性肠病

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LncRNA-PVT 1/miR-15 a/Bmi-1通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖 被引量：2

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作者 侯婧瑛 吴雅娴 +3 位作者 金小岩 凌辉 于霆峰 王凌云 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期703-713,共11页

【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siR... 【目的】探讨lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。【方法】分别研究PVT1,miR-15a及Bmi-1在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-PVT1(转染PVT1 siRNA)和si-PVT1 NC(转染PVT1 siRNAscramble阴性对照);②空白对照组、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染miR-15a模拟物的阴性对照)。③空白对照组、si-Bmi-1(转染Bmi-1的siRNA)和si-Bmi-1 NC(转染Bmi-1的siRNAscramble阴性对照)。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制PVT1后检测不同组别PVT1、miR-15a和Bmi-1的表达情况。为验证miR-15a与Bmi-1之间的调节关系,将HGC-27胃癌细胞株分为3组:空白对照、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染模拟物阴性对照),检测各组miR-15a和Bmi-1的表达情况。通过生物信息学网站预测PVT1与miR-15a以及miR-15a与Bmi-1的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证PVT1与miR-15a以及miR-15a和Bmi-1之间的靶向调节关系。在前述基础上,逆向验证PVT1、miR-15a和Bmi-1三者之间的调控关系。【结果】抑制PVT1、Bmi-1或者过表达miR-15a后,HGC-27胃癌细胞的OD490值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低(P<0.01);抑制PVT1后,Bmi-1的表达出现降低,而miR-15a表达增高(P<0.01);转染miR-15a后,miR-15a表达升高,而Bmi-1表达出现降低(P<0.01)。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比,PVT1以及Bmi-1野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低,两者分别下降约56%和32%左右(P<0.01)。与空白对照组和si-PVT1 NC组相比,si-PVT1组PVT1和Bmi-1表达明显下降,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a inhibitor之后,miR-15a表达下降,PVT1和Bmi-1的表达降低均出现了逆转;而si-PVT1组加入miR-15a后,miR-15a表达升高,在si-PVT1组加入miR-15a之后,miR-15a表达升高,PVT1和Bmi-1的表达出现进一步下降。【结论】LncRNA-PVT1能够通过靶向抑制miR-15a上调Bmi-1(lncRNA-PVT1/miR-15a/Bmi-1通路),进而促进胃癌细胞的体外增殖。 展开更多

关键词 长链非编码RNA-PVT1 微小RNA-15a B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1 胃癌细胞 增殖

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激活Nodal信号通路促进小鼠胚胎干细胞向定型内胚层分化 被引量：1

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作者 钟娃 夏忠胜 +4 位作者 欧阳慧 袁宇红 于涛 单体栋 陈其奎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期2070-2075,共6页

目的：探讨激活Nodal信号通路在小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESC）向定型内胚层（definitive endoderm,DE）分化中的作用,寻找小鼠ESC向DE分化的最佳培养体系。方法：根据培养基的不同,实验分为3组：胚胎干细胞组（基础培养＋... 目的：探讨激活Nodal信号通路在小鼠胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESC）向定型内胚层（definitive endoderm,DE）分化中的作用,寻找小鼠ESC向DE分化的最佳培养体系。方法：根据培养基的不同,实验分为3组：胚胎干细胞组（基础培养＋LIF）、自然分化组（基础培养基）和activin A组（基础培养基＋50μg/L activin A）。细胞培养1~7 d,收集不同作用时点（1、3、5、7 d）的细胞及细胞爬片。用流式细胞术检测CXCR4阳性细胞的比例;免疫细胞化学法检测CXCR4蛋白的表达;Western blot检测OCT4及CXCR4蛋白的表达。结果：流式细胞术检测结果提示,随着培养时间的延长,CXCR4阳性细胞的比例,胚胎干细胞组在1~7 d无明显变化,自然分化组和activin A组逐渐增高,第5天达高峰（P〈0.05）,其中activin A组最高（P〈0.05）。细胞免疫组化结果显示CXCR4阳性细胞呈棕褐色或棕黄色。Western blot的结果提示,随着培养时间的延长,胚胎干细胞组OCT4和CXCR4蛋白表达无明显变化;自然分化组和activin A组的CXCR4蛋白的表达逐步增高,OCT4蛋白的表达逐步下降,第5天达高峰（P〈0.05）,其中activin A组的表达最明显（P〈0.05）。结论：在小鼠ESC分化过程中,在诱导培养的第5天,DE的比例最高。激活Nodal信号通路可以促进小鼠ESC向具有CXCR4分子标志的DE分化,有利于获取更多的DE细胞。 展开更多

关键词 Nodal信号通路 小鼠胚胎干细胞 定型内胚层 细胞分化

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利用Tet-On系统构建稳定表达Pdx1的小鼠ESC细胞株 被引量：1

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作者 钟娃 夏忠胜 +3 位作者 于涛 倪楚燕 黎洁瑶 陈其奎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期187-192,共6页

目的:利用Tet-On系统构建稳定表达胰十二指肠同源异形框1(Pdx1)的小鼠胚胎干细胞(ESC)株,为进一步研究Pdx1+定型内胚层细胞向胰腺细胞分化奠定了基础。方法:采用Tet-On系统构建具有绿色荧光蛋白标记及嘌呤霉素抗性的Pdx1过表达慢病毒载... 目的:利用Tet-On系统构建稳定表达胰十二指肠同源异形框1(Pdx1)的小鼠胚胎干细胞(ESC)株,为进一步研究Pdx1+定型内胚层细胞向胰腺细胞分化奠定了基础。方法:采用Tet-On系统构建具有绿色荧光蛋白标记及嘌呤霉素抗性的Pdx1过表达慢病毒载体并感染胚胎干细胞。实验分为空白对照组(ESC组)、空载慢病毒对照组(PDX1−ESC组)和Pdx1慢病毒转染组(PDX1+ESC组)。流式细胞术检测多西环素(DOX)筛选后转染细胞的阳性率;检测Tet-On系统功能及Pdx1的mRNA和蛋白表达。流式细胞分选仪分选转染细胞,构建稳定表达Pdx1基因的ESC株及阴性对照ESC株。结果:(1)DOX筛选后PDX1−ESC组的转染细胞阳性率为90.72%,PDX1+ESC组的转染细胞阳性率为94.01%。用流式细胞分选仪分选后PDX1−ESC组的转染细胞阳性率为97.84%,PDX1+ESC组为98.13%。(2)加入DOX后,PDX1−ESC组和PDX1+ESC组可见绿色荧光。PDX1+ESC组Pdx1的mRNA和蛋白表达明显增高(P<0.05)。不加DOX,则3组细胞均未见绿色荧光,且Pdx1 mRNA和蛋白表达的差异无统计学显著性(P>0.05)。(3)细胞株冻存3个月后复苏培养仍然存活,并受DOX调控。结论:利用Tet-On系统成功构建可诱导表达Pdx1的小鼠ESC株,为研究Pdx1+定型内胚层细胞向胰腺细胞分化提供了有效的细胞模型。 展开更多

关键词 Tet-On系统 胰十二指肠同源异形框1 胚胎干细胞 胰腺细胞

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3-methyladenine抑制自噬诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡 被引量：1

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作者 庄燕妍 庄晓虹 +4 位作者 陈文博 黄凤婷 唐健 程文捷 张世能 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期193-199,共7页

【目的】探讨3-methyladenine(3-MA)对人胰腺癌SW1990细胞增殖、迁移及失巢凋亡的影响作用及其机制。【方法】以胰腺癌细胞SW1990及永生化胰腺导管上皮细胞H6C7为研究对象,设3-MA处理组及PBS对照组,采用软琼脂克隆培养法及Poly-HEMA悬... 【目的】探讨3-methyladenine(3-MA)对人胰腺癌SW1990细胞增殖、迁移及失巢凋亡的影响作用及其机制。【方法】以胰腺癌细胞SW1990及永生化胰腺导管上皮细胞H6C7为研究对象,设3-MA处理组及PBS对照组,采用软琼脂克隆培养法及Poly-HEMA悬浮培养法筛选抵抗失巢凋亡的细胞。Annexin V-FITC/PI双染和TUNEL试剂盒法检测细胞凋亡;免疫荧光法及透射电镜检测细胞自噬;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞迁移能力。【结果】永生化胰腺导管上皮细胞H6C7处理组及对照组均无集落形成,胰腺癌细胞SW1990处理组形成(2.3±2.63)个集落,对照组形成(9±3)个,与H6C7相比,SW1990具有较强的抵抗失巢凋亡的能力(P<0.05)。3-MA可抑制胰腺癌SW1990细胞自噬(P<0.05)并抑制其增殖及迁移能力(P<0.01)且诱导失巢凋亡(P<0.01)。【结论】3-MA可诱导胰腺癌细胞SW1990失巢凋亡,其机制可能与细胞自噬受抑有关。 展开更多

关键词 胰腺癌 自噬 失巢凋亡 3-甲基腺嘌呤

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免疫纳米微粒靶向胰腺癌细胞输送siRNA的方法研究 被引量：1

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作者 李佳佳 陈茵婷 +4 位作者 曾林涓 练国达 陈少杰 李雅晴 黄开红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1567-1573,共7页

目的:构建一种向胰腺癌细胞安全、高效输送siRNA的免疫纳米载体。方法:检测纳米载体IONP-PEI(非靶向组)及其与siRNA复合物的表征;通过琼脂糖凝胶电泳检测siRNA结合力、MTS法检测细胞活力和流式细胞术检测转染率以确定其复合siRNA的最佳... 目的:构建一种向胰腺癌细胞安全、高效输送siRNA的免疫纳米载体。方法:检测纳米载体IONP-PEI(非靶向组)及其与siRNA复合物的表征;通过琼脂糖凝胶电泳检测siRNA结合力、MTS法检测细胞活力和流式细胞术检测转染率以确定其复合siRNA的最佳N/P比值;细胞免疫荧光和普鲁士蓝染色观察scFvCD44v6偶联IONP-PEI的靶向纳米载体(靶向组)在细胞内分布;流式细胞术、荧光显微镜观察、real-time PCR和Western blotting检测靶向组和非靶向组的转染率和转染siKRAS后的干扰效果。结果:IONP和PEI的最适质量比为0.75;纳米载体复合siRNA的最佳N/P比值为20;IONP-PEI/siRNA复合物的电位为(21.73±8.07)mV,粒径为(51.3±2.2)nm。荧光显微镜显示,非靶向组和靶向组转染后均在细胞内,靶向组的转染率为(89.75±1.81)%,高于非靶向组的(59.87±4.52)%,且靶向组的荧光强度高于非靶向组。靶向组的KRAS mRNA的相对表达量为(34.02±6.15)%,低于非靶向组的(51.09±6.70)%;Western blotting显示靶向组的KRAS蛋白表达量低于非靶向组。结论:非靶向组和靶向组均能够将siRNA转染进细胞内,且靶向组具有更高的转染效率和更好的干扰基因表达效果。本课题构建的scFvCD44v6-IONP-PEI是一种高效、安全和靶向识别胰腺癌细胞的免疫纳米载体。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 纳米微粒 基因治疗 靶向

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