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MMS21通过维持MCM2-7复合物稳定性促进肝细胞癌增殖活性
被引量：
1
1
作者
李文佳
朱元昕
胡开顺
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期203-211,共9页
【目的】探讨SUMO E3泛素连接酶MMS21在肝细胞癌的表达及发挥作用机制。【方法】利用GEPIA2和CPATC数据库分析MMS21在肝细胞癌中的mRNA和蛋白表达变化及与患者预后的关系;设计两条siRNA分别敲低肝癌细胞内源性MMS21的表达,并采用流式细...
【目的】探讨SUMO E3泛素连接酶MMS21在肝细胞癌的表达及发挥作用机制。【方法】利用GEPIA2和CPATC数据库分析MMS21在肝细胞癌中的mRNA和蛋白表达变化及与患者预后的关系;设计两条siRNA分别敲低肝癌细胞内源性MMS21的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期分布比例;进行BrdU染色和DNA fiber实验检测细胞增殖能力与DNA合成速度;构建带有MYC标签的MMS21蛋白过表达载体,并在细胞系SK-hep1中建立其稳定表达的细胞株;利用Co-IP联合质谱分析的方法鉴定MMS21的互作蛋白组并进行信号通路富集分析;采用West⁃ern Blot,检测MMS21对细胞周期相关蛋白的影响。【结果】在肝细胞癌中,与癌旁组织(160例)相比,MMS21在癌组织(369例)中显著高表达(P<0.05),其高表达与患者不良预后相关(P<0.01)。在肝癌细胞系中,使用两条siRNA分别敲低内源MMS21的表达后,SK-hep1细胞中G1期的细胞比例显著上升(P<0.001;P<0.01),S期比例显著下降(P<0.01;P<0.05),G2/M期比例下降(P<0.05;P<0.05);HepG2细胞中G1期的细胞比例显著上升(P<0.001;P<0.001),S期比例显著下降(P<0.01;P<0.01),G2/M期比例下降(P<0.05;P<0.05);SK-hep1细胞的DNA合成速度明显减慢(P<0.0001;P<0.0001);SK-hep1和HepG2细胞增殖能力显著下降(P<0.01;P<0.001;P<0.001;P<0.001)。质谱鉴定MMS21的互作蛋白组,共鉴定到641个高可信度蛋白;通路富集分析表明,这些结合蛋白显著富集于细胞周期相关的生理过程;进一步的Western Blot结果表明:MMS21的缺失能抑制S期和G2/M期的周期蛋白表达量,降低微小染色体维持蛋白家族(MCMs)的蛋白水平。【结论】SUMO E3连接酶MMS21在肝细胞癌中高表达,并与患者不良预后相关;MMS21与肝癌细胞的增殖密切相关,能够维持细胞周期蛋白和复制复合物MCM蛋白稳定性,促进肝癌细胞的增殖能力。
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关键词
肝癌
MMS21
增殖
CoIP-MS
微小染色体维持蛋白家族
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职称材料
题名
MMS21通过维持MCM2-7复合物稳定性促进肝细胞癌增殖活性
被引量：
1
1
作者
李文佳
朱元昕
胡开顺
机构
中山大学孙逸仙纪念医院基础与转化医学研究中心//广东省恶性肿瘤表观遗传与基因调控重点实验室
出处
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第2期203-211,共9页
基金
国家自然科学基金(82172636)
广东省恶性肿瘤表观遗传与基因调控重点实验室项目(2020B1212060018)。
文摘
【目的】探讨SUMO E3泛素连接酶MMS21在肝细胞癌的表达及发挥作用机制。【方法】利用GEPIA2和CPATC数据库分析MMS21在肝细胞癌中的mRNA和蛋白表达变化及与患者预后的关系;设计两条siRNA分别敲低肝癌细胞内源性MMS21的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期分布比例;进行BrdU染色和DNA fiber实验检测细胞增殖能力与DNA合成速度;构建带有MYC标签的MMS21蛋白过表达载体,并在细胞系SK-hep1中建立其稳定表达的细胞株;利用Co-IP联合质谱分析的方法鉴定MMS21的互作蛋白组并进行信号通路富集分析;采用West⁃ern Blot,检测MMS21对细胞周期相关蛋白的影响。【结果】在肝细胞癌中,与癌旁组织(160例)相比,MMS21在癌组织(369例)中显著高表达(P<0.05),其高表达与患者不良预后相关(P<0.01)。在肝癌细胞系中,使用两条siRNA分别敲低内源MMS21的表达后,SK-hep1细胞中G1期的细胞比例显著上升(P<0.001;P<0.01),S期比例显著下降(P<0.01;P<0.05),G2/M期比例下降(P<0.05;P<0.05);HepG2细胞中G1期的细胞比例显著上升(P<0.001;P<0.001),S期比例显著下降(P<0.01;P<0.01),G2/M期比例下降(P<0.05;P<0.05);SK-hep1细胞的DNA合成速度明显减慢(P<0.0001;P<0.0001);SK-hep1和HepG2细胞增殖能力显著下降(P<0.01;P<0.001;P<0.001;P<0.001)。质谱鉴定MMS21的互作蛋白组,共鉴定到641个高可信度蛋白;通路富集分析表明,这些结合蛋白显著富集于细胞周期相关的生理过程;进一步的Western Blot结果表明:MMS21的缺失能抑制S期和G2/M期的周期蛋白表达量,降低微小染色体维持蛋白家族(MCMs)的蛋白水平。【结论】SUMO E3连接酶MMS21在肝细胞癌中高表达,并与患者不良预后相关;MMS21与肝癌细胞的增殖密切相关,能够维持细胞周期蛋白和复制复合物MCM蛋白稳定性,促进肝癌细胞的增殖能力。
关键词
肝癌
MMS21
增殖
CoIP-MS
微小染色体维持蛋白家族
Keywords
hepatocellular carcinoma
MMS21
proliferation
CoIP-MS
MCMs
分类号
R735.7 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MMS21通过维持MCM2-7复合物稳定性促进肝细胞癌增殖活性
李文佳
朱元昕
胡开顺
《中山大学学报（医学科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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