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胚胎干细胞源性表皮干细胞在腹腔微环境中分化潜能的初步研究 被引量：19
1
作者 程树军 黄锦桃 李海标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期204-207,共4页
【目的】 探讨胚胎干细胞源性的表皮干细胞在腹腔微环境中的分化情况,为研究其在不同微环境中的分化稳定性和全能性及寻找新的皮肤工程种子细胞奠定基础?【方法】 小鼠ES E14细胞与人羊膜共培养4～5 d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆... 【目的】 探讨胚胎干细胞源性的表皮干细胞在腹腔微环境中的分化情况,为研究其在不同微环境中的分化稳定性和全能性及寻找新的皮肤工程种子细胞奠定基础?【方法】 小鼠ES E14细胞与人羊膜共培养4～5 d,定向诱导其分化为表皮样干细胞克隆,它们呈β1整合素?CK15和CK19阳性,移植入裸鼠腹腔?对移植后细胞的分化情况进行形态学和CEA?CK10?CK18?CK19免疫组织化学观察?【结果】 小鼠胚胎干细胞源性表皮样干细胞在裸鼠腹腔内1～4周,细胞分化为由单层或复层上皮样细胞构成的管状和泡状结构?种植5周后,除上述结构外,可见角化复层扁平上皮?毛囊样?汗腺样及皮脂腺样等结构?免疫组化表明汗腺样结构分别呈CEA和CK18阳性,而角化复层扁平上皮的基底层细胞分别呈CK19和CK10阳性?【结论】 初步结果表明小鼠胚胎干细胞源性表皮样干细胞在腹腔微环境下同样具有分化为角化复层上皮?毛囊样?汗腺样和皮脂腺样结构的潜能? 展开更多
关键词 胚胎干细胞 表皮干细胞 腹腔微环境 细胞分化 组织工程 细胞形态学
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ES细胞源性表皮干细胞与胶原海绵构建组织工程皮肤 被引量：7
2
作者 刘爱军 黄锦桃 李海标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期625-629,共5页
【目的】以胚胎干细胞(ES细胞)源性表皮干细胞为种子细胞与胶原海绵构建组织工程皮肤,探讨其对皮肤缺损修复的作用。【方法】胎鼠皮肤成纤维细胞与胶原海绵构建类真皮,植入小鼠全层皮肤缺损创面,以生物膜为载体,把羊膜诱导后带有核标记... 【目的】以胚胎干细胞(ES细胞)源性表皮干细胞为种子细胞与胶原海绵构建组织工程皮肤,探讨其对皮肤缺损修复的作用。【方法】胎鼠皮肤成纤维细胞与胶原海绵构建类真皮,植入小鼠全层皮肤缺损创面,以生物膜为载体,把羊膜诱导后带有核标记的ES细胞源性表皮干细胞覆盖在类真皮上,术后1～8周连续取材,HE染色,β1整合素、CK15、CK19、CK10和CEA免疫荧光双标和免疫组化观察。【结果】植入后3周,创面完全长合,较厚新生皮完全覆盖创面,基底层细胞增生,形成许多大小不一的细胞柱伸向真皮层,新生表皮中可见核标记的细胞呈β1整合素、CK15、CK19阳性,真皮中的管腔样结构呈核荧光和β1整合素、CEA免疫组化双标阳性,4～8周新生表皮基底层细胞呈CK19、CK10阳性,新生表皮下可见毛囊样、皮脂腺样结构。【结论】ES细胞源性表皮干细胞为种子细胞与胶原海绵构建的组织工程皮肤可以修复缺损皮肤,在其下真皮层有分化为毛囊样、皮脂腺样和汗腺样的结构,但是是否来源于ES细胞源性表皮干细胞仍需进一步证实。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 表皮干细胞 定向分化 皮肤附属结构 组织工程
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几种真皮支架的体内组织相容性比较 被引量：4
3
作者 程树军 黄锦桃 +1 位作者 李卉 李海标 《中国比较医学杂志》 CAS 2006年第6期327-329,I0004,共4页
目的研究几种真皮支架的组织相容性,为构建组织工程皮肤提供资料。方法将复合胶原凝胶、胶原海绵、明胶海绵、PLGA和PHBV共5种真皮支架分别埋入大鼠皮下,观察其在体内的组织反应和降解情况。结果复合胶原凝胶和胶原海绵引起轻微的炎性反... 目的研究几种真皮支架的组织相容性,为构建组织工程皮肤提供资料。方法将复合胶原凝胶、胶原海绵、明胶海绵、PLGA和PHBV共5种真皮支架分别埋入大鼠皮下,观察其在体内的组织反应和降解情况。结果复合胶原凝胶和胶原海绵引起轻微的炎性反应,以创伤修复性结缔组织增生为主。PHBV和PLGA以淋巴细胞浸润和多核巨细胞增生为特征。明胶海绵与PLGA相似但程度稍轻。结论这几种真皮支架是支持成纤维细胞生长、易于血管化和可降解的组织相容性材料,可用于组织工程皮肤的构建。 展开更多
关键词 真皮 支架 组织相容性 大鼠
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组织工程皮肤用真皮支架细胞相容性的比较研究 被引量：3
4
作者 程树军 黄锦桃 李海标 《中国比较医学杂志》 CAS 2006年第5期270-273,F0002,共5页
目的研究几种真皮支架的细胞相容性,为构建组织工程皮肤提供资料。方法取胶原海绵、明胶海绵、PLGA和PHBV共4种真皮支架,与小鼠成纤维细胞和ES源表皮样干细胞体外培养,观察前者对后者粘附率的影响,及对成纤维细胞增殖的影响,评价真皮支... 目的研究几种真皮支架的细胞相容性,为构建组织工程皮肤提供资料。方法取胶原海绵、明胶海绵、PLGA和PHBV共4种真皮支架,与小鼠成纤维细胞和ES源表皮样干细胞体外培养,观察前者对后者粘附率的影响,及对成纤维细胞增殖的影响,评价真皮支架的细胞相容性。结果成纤维细胞和ES源表皮样干细胞在4种支架材料上均能粘附存活,成纤维细胞能增殖,但在胶原海绵、PHBV和PLGA支架上的增殖率明显高于明胶海绵。结论几种真皮支架的细胞相容性较好,可用于新型组织工程皮肤的构建。 展开更多
关键词 真皮支架 ES源表皮干细胞 细胞相容性 皮肤 组织工程
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ES细胞源表皮样干细胞与胶原海绵体外构建组织工程化皮肤
5
作者 程树军 黄锦桃 李海标 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期4-6,共3页
目的探讨以ES细胞源表皮样干细胞构建组织工程皮肤的方法,为构建新的组织工程皮肤奠定基础。方法先把成纤维细胞放置于胶原海绵真皮支架内,体外培养2d,再放置ES细胞源表皮样干细胞,体外培养3d,观察其形态和进行免疫组化检测。结果成纤... 目的探讨以ES细胞源表皮样干细胞构建组织工程皮肤的方法,为构建新的组织工程皮肤奠定基础。方法先把成纤维细胞放置于胶原海绵真皮支架内,体外培养2d,再放置ES细胞源表皮样干细胞,体外培养3d,观察其形态和进行免疫组化检测。结果成纤维细胞与ES细胞源表皮样干细胞均在真皮支架内黏附,免疫组化表明ES细胞源表皮样干细胞仍呈β1整合素强阳性和CK15、CK19阳性。结论结果提示ES细胞源表皮样干细胞在体外构建的组织工程化皮肤内仍维持未分化状态。 展开更多
关键词 表皮样干细胞 组织工程 胶原
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人垂体腺瘤细胞原代培养的纯化及其激素的表达与分泌 被引量：7
6
作者 徐伟光 王海军 +3 位作者 黄锦桃 刘爱军 李海标 朱永红 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期7-10,37,共5页
目的探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。方法采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valineDMEMD-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复... 目的探讨原代培养垂体腺瘤的细胞纯化方法及其激素表达与分泌的特点。方法采用三种原代培养方法对垂体腺瘤细胞进行培养,方法Ⅰ为目前常用的垂体瘤细胞培养方法,方法Ⅱ结合使用右旋颉氨酸(D-valineDMEMD-valine)培养液,方法Ⅲ采用反复贴壁法结合DMEMD-valine培养液培养。观察其细胞形态变化和生长特征,放射免疫法测定不同培养时间培养液中相应激素的水平。免疫组织化学染色法检测培养细胞生长激素(growthhormone,GH)、泌乳素(prolactin,PRL)的表达。结果3种方法均能成功培养出垂体腺瘤细胞,呈圆形或椭圆形,其纯度随培养时间的延长逐渐下降,培养第20天其平均纯度分别为40%,46%,96%。方法Ⅲ明显高于方法Ⅰ和方法Ⅱ,差异具有显著性意义(P<0.01);培养液中均含有相应激素,且3种方法的激素分泌量没有统计学差异(P>0.05);腺瘤细胞分别呈GH,PRL阳性表达,成纤维细胞表达I型胶原。结论方法Ⅲ可得到纯度达95%以上的人垂体腺瘤细胞,纯化后的细胞可分别呈GH和PRL阳性表达并具有良好的激素分泌功能,为进一步研究人垂体腺瘤的发病机理、药物治疗和颅外移植等方面奠定了实验基础。 展开更多
关键词 垂体腺瘤 细胞培养 生长激素 泌乳素
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骨髓基质干细胞诱导成神经元样细胞分化相关基因的表达 被引量：1
7
作者 冯英 谢富康 +2 位作者 胡黎平 张志 周晓秋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期2268-2271,共4页
目的分析骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化前后相关基因的表达。方法用β-巯基乙醇诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化,诱导后8h,提取诱导前后的骨髓基质干细胞mRNA,进行微管相关蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白43(GAP-43)、神经元特... 目的分析骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化前后相关基因的表达。方法用β-巯基乙醇诱导骨髓基质干细胞向神经元样细胞分化,诱导后8h,提取诱导前后的骨髓基质干细胞mRNA,进行微管相关蛋白-2(MAP-2)、生长相关蛋白43(GAP-43)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、中间丝nestin和神经丝(NF)基因的RT-PCR,观察其诱导前后的表达。结果NSE在诱导前后均有表达,MAP-2、GAP-43、nestin和NF诱导前无表达,诱导后有表达。结论骨髓基质干细胞向神经元样细胞的分化与MAP-2、GAP-43、nestin和NF可能有关。 展开更多
关键词 干细胞 分化 基因表达 神经元 巯基乙醇
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腺病毒介导SARS病毒SN基因表达及其诱导的体液免疫 被引量：1
8
作者 刘然义 黄嘉凌 +5 位作者 吴立志 黄必军 柯妙拉 张艳玲 王俊梅 黄文林 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第8期670-673,共4页
目的检测重组腺病毒Ad-SN在体内外的表达,初步探讨其在大鼠内诱导的体液免疫反应。方法Ad-SN感染Vero-E6细胞后用RT-PCR和WesternBlot法检测SN基因的表达;用WesternBlot法检测Ad-SN在大鼠皮下组织中的表达。Ad-SN皮下免疫大鼠,用ELISA... 目的检测重组腺病毒Ad-SN在体内外的表达,初步探讨其在大鼠内诱导的体液免疫反应。方法Ad-SN感染Vero-E6细胞后用RT-PCR和WesternBlot法检测SN基因的表达;用WesternBlot法检测Ad-SN在大鼠皮下组织中的表达。Ad-SN皮下免疫大鼠,用ELISA法测定血清中抗SARS-CoVIgG水平。结果在Ad-SN感染的Vero-E6细胞中存在SN基因的转录,其mRNA量呈剂量依赖性;在Ad-SN感染的细胞、其培养上清及Ad-SN注射部位组织中均能检测到SN的表达。在Ad-SN免疫大鼠血清中可检测到高滴度SARS冠状病毒抗体(IgG)。结论Ad-SN能表达分泌型SN蛋白,并在大鼠体内诱导SARS-CoV特异的体液免疫反应。 展开更多
关键词 疫苗 SARS冠状病毒 腺病毒载体 刺突蛋白 体液免疫
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骨髓间充质干细胞向肌管状结构分化的动态 被引量：2
9
作者 张志 冯英 谢富康 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期33-37,共5页
目的探讨5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的最佳条件和体外分化的过程。方法体外培养Sprague-Dawley(SD)大鼠的MSCs,传代至P3、P6或P12;用5-氮胞苷诱导,比较不同诱导浓度组、不同诱导时间组和不同体重动物组MSCs... 目的探讨5-氮胞苷体外诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的最佳条件和体外分化的过程。方法体外培养Sprague-Dawley(SD)大鼠的MSCs,传代至P3、P6或P12;用5-氮胞苷诱导,比较不同诱导浓度组、不同诱导时间组和不同体重动物组MSCs的分化率,观察诱导后细胞分化过程中形态学的变化,并且用cardiactroponinI、desmin和α-sarcomericactin抗体鉴定分化的心肌样细胞。结果P12代较P3或P6代骨髓MSCs易向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构。经10"mol/L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为(27±2.5)%,20"mol/L的5-氮胞苷诱导24h后细胞分化率为(17±2.2)%,其它诱导浓度和诱导时间均不能诱导细胞分化;50g(幼年鼠)体重组细胞分化率为(27±2.8)%,150g(成年鼠)体重组细胞分化率为(15±2.9)%,各组的差异有统计学意义。结论5-氮胞苷诱导MSCs向心肌样细胞分化并融合成肌管样结构,年幼的SD大鼠MSCs易向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 间充质干细胞 5-氮胞苷 细胞分化
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