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大鼠脑皮质微血管内皮细胞的分离和培养 被引量:15
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作者 梁朝峰 郭英 +5 位作者 石德金 王辉 胡黎平 李文胜 叶卓鹏 李燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期1038-1040,共3页
目的:本研究旨在探索1种有效分离、培养和获取较高纯度大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的方法。方法:自12dSD大鼠脑分离出皮质,采用二次酶消化、BSA和Percoll非连续梯度离心获得较纯的脑微血管段后,接种于涂布有明胶的培养皿进行原代培养;... 目的:本研究旨在探索1种有效分离、培养和获取较高纯度大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)的方法。方法:自12dSD大鼠脑分离出皮质,采用二次酶消化、BSA和Percoll非连续梯度离心获得较纯的脑微血管段后,接种于涂布有明胶的培养皿进行原代培养;相差显微镜观察细胞的形态学特性,进行血管内皮细胞特异性标志物Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测。结果:培养24h即可见细胞从贴壁的脑微血管段周围爬出,细胞呈短梭形,集落呈典型的"鹅卵石样",区域性单层生长,6-7d内皮细胞开始融合,血管内皮细胞特异性标志物Ⅷ因子相关抗原表达阳性,纯度达92.6%。结论:成功地自大鼠脑皮质分离并培养出纯度较高的BMECs,为进一步开展脑微血管内皮细胞的生物学特性的相关研究提供有用的方法。 展开更多
关键词 大鼠 微血管内皮细胞 细胞培养
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腺病毒介导神经营养素-3基因转染施万细胞 被引量:5
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作者 郭家松 曾园山 +4 位作者 黄文林 刘然义 吴立志 胡金家 李海标 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期304-307,F004,共5页
【目的】构建神经营养素-3(NT-3)基因转染的施万细胞。【方法】NT-3基因重组腺病毒(AdvNT-3)扩增、纯化和测定后,转染体外培养的施万细胞(SCs)。用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测NT-3基因转染SCs的NT-3表达及培养液中NT-3的含量。【... 【目的】构建神经营养素-3(NT-3)基因转染的施万细胞。【方法】NT-3基因重组腺病毒(AdvNT-3)扩增、纯化和测定后,转染体外培养的施万细胞(SCs)。用免疫细胞化学和ELISA方法分别检测NT-3基因转染SCs的NT-3表达及培养液中NT-3的含量。【结果】实验中获得的AdvNT-3中外源基因序列与大鼠NT-3的DNA序列完全一致,与未基因转染SCs相比,NT-3基因转染SCs的NT-3阳性增强,培养液中NT-3含量增高。【结论】通过腺病毒介导可以获得NT-3过量表达的基因转染SCs。 展开更多
关键词 腺病毒 介导 神经营养素-3 基因转染 施万细胞 NT-3 SCS
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VEGF对大鼠海马回神经干细胞体外增殖和分化的影响 被引量:7
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作者 郭英 石德金 +5 位作者 梁朝峰 王辉 李文胜 叶卓鹏 胡黎平 李燕 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1914-1918,共5页
目的:观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对大鼠海马回神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法:自生后第3 d的SD大鼠脑海马区分离NSCs,进行体外培养并传代,分为2组:(1)VEGF组加入150μg/LVEGF的培养液培养;(2)对照组未加VEGF。培养7 d后,... 目的:观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对大鼠海马回神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法:自生后第3 d的SD大鼠脑海马区分离NSCs,进行体外培养并传代,分为2组:(1)VEGF组加入150μg/LVEGF的培养液培养;(2)对照组未加VEGF。培养7 d后,撤除VEGF,分别在第7 d及第11 d通过相差显微镜观察细胞形态,并用免疫荧光方法检测nestin和NF的表达,计算各组免疫染色阳性细胞率。结果:在VEGF作用下第7d,VEGF组nestin阳性细胞率为52.19%±7.95%,多于对照组的29.26%±4.12%(P<0.01),NF阳性细胞率为22.33%±4.13%,对照组仅有38.62%±5.31%(P<0.01);在实验第11 d,VEGF组NF阳性细胞率为43.10%±3.70%,对照组仅30.56%±4.16%,P<0.01。结论:本实验提示VEGF能促进NSCs的增殖,并抑制其分化。 展开更多
关键词 神经干细胞 血管内皮细胞生长因子 海马
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金雀异黄酮对去势大鼠骨质疏松的影响 被引量:4
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作者 冯英 涂平生 +1 位作者 湛海伦 邵雄杰 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2007年第2期105-107,共3页
目的观察金雀异黄酮对实验性骨质疏松大鼠骨密度(bonemineral density,BMD)和血清骨代谢生化指标的影响。方法切除SD雌性大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型,给予金雀异黄酮皮下注射,治疗8w后监测大鼠腰椎及股骨的骨密度,检测血清骨碱性... 目的观察金雀异黄酮对实验性骨质疏松大鼠骨密度(bonemineral density,BMD)和血清骨代谢生化指标的影响。方法切除SD雌性大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型,给予金雀异黄酮皮下注射,治疗8w后监测大鼠腰椎及股骨的骨密度,检测血清骨碱性磷酸酶(ALP)、血清钙(Ca)、血清磷(P)等骨代谢生化指标。结果去势后的大鼠腰椎及股骨的骨密度降低;采用金雀异黄酮治疗后骨密度明显升高,与阴性对照组的比较差异具有统计学意义(P<0.05),与假手术组比较无显著性差异。假手术组和金雀异黄酮组血清ALP活性低于阴性对照组。结论金雀异黄酮可调节骨代谢,显著提高骨质疏松大鼠的骨密度。 展开更多
关键词 雌激素 金雀异黄酮 骨质疏松
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H-89和wortmannin对霍乱毒素促进受损视网膜节细胞再生作用的影响 被引量:1
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作者 李雯 梁玉香 李海标 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期34-37,共4页
【目的】研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)特异抑制剂wortmannin对霍乱毒素(CTx)促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的影响,探讨CTx促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的作用机制。【方法】成年金黄地鼠近侧切断视神经(O... 【目的】研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)特异抑制剂wortmannin对霍乱毒素(CTx)促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的影响,探讨CTx促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的作用机制。【方法】成年金黄地鼠近侧切断视神经(ON),移植一段自体坐骨神经(SN)与ON近侧残端缝接,玻璃体内注射给药。20只动物分4组,每组5只。注射CTx为CTx组,注射CTx和H-89为CTx+H组、注射CTx和wortmannin为CTx+W组、不给药组为对照组。用粒蓝(GB)逆行标记再生的RGCs,取视网膜于荧光镜下记数。【结果】动物存活4周后,对照组、CTx组和CTx+H组再生节细胞平均数(个/视网膜)分别为:(1431±352),(2567±883)和(1606±293)个/视网膜(n=5)。CTx+H组与对照组比较差异无显著性(P<0.05),而与CTx组比较有显著性差异(P<0.05),表明H-89可抑制CTx的促再生作用;CTx+W组再生节细胞数为:(1872±262)个/视网膜(n =5),与对照组和CTx组比较差异均有显著性(P <0.05),提示wortmannin对CTx有部分的抑制作用。【结论】CTx可能是通过PKA-CREB通路实现对受损RGCs的促再生作用,PI3-K-Akt通路可能是PKA-CREB通路的下游分支。 展开更多
关键词 CT RGC 对照组 视网膜节细胞 霍乱毒素 注射 PI3-K PKA 动物 磷酸肌醇
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bFGF对小鼠ES细胞生长增殖的影响 被引量:1
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作者 黄锦桃 程树军 +3 位作者 刘爱军 李卉 朱永红 李海标 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期1-2,共2页
【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对ES细胞增殖的影响,为建立稳定的小鼠ES细胞培养和扩增打下基础。【方法】将E14小鼠胚胎干细胞分别培养于含LIF10^6U/L并含5μg/L、10μg/L、20μg/L 3种浓度的bFGF的ES细胞基础培养... 【目的】研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对ES细胞增殖的影响,为建立稳定的小鼠ES细胞培养和扩增打下基础。【方法】将E14小鼠胚胎干细胞分别培养于含LIF10^6U/L并含5μg/L、10μg/L、20μg/L 3种浓度的bFGF的ES细胞基础培养液中,观察细胞形态和计数ES细胞克隆数。【结果】10μg/L和20μg/L bFGF与含LIF 10^6U/L的ES细胞形态相似,3d后ES细胞克隆数分别为:88±8、128±12和114±17,三者克隆数无显著差异(P〉0.05)。ES细胞组化染色呈AKP和SSEA-1阳性。【结论】bFGF可促进小鼠ES细胞增殖,其最佳浓度为10μg/L。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 小鼠
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