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Aβ_(1-15)多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果 被引量：5
1
作者 张革 汪华侨 +4 位作者 邹俊涛 李国营 袁群芳 林贤 姚志彬 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期371-376,共6页
【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.... 【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合。【结果】测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8ku的分泌型4×Aβ15蛋白。pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1︰6400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和。【结论】所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件。 展开更多
关键词 多价DNA疫苗 体液免疫 COS-7细胞 pcDNA3.1 ELISA法检测 Western BALB/C鼠 linker 真核表达质粒 BLOT检测 免疫组织化学 抗体平均滴度 基因片段 加强免疫 转基因鼠 AΒ42 PCR技术 信号肽序列 转基因动物 老年性痴呆 基因合成
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AD转基因模型Tg2576鼠阳性子鼠的病理和认知行为变化 被引量：7
2
作者 李国营 汪华侨 +2 位作者 胡金家 徐杰 姚志彬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期384-388,共5页
为探讨老年性痴呆(AD)转基因模型Tg2576(hAPPSWE)鼠阳性子一代鼠的病理和行为学变化,确定其是否具有亲代的性状,为AD研究提供理想的动物模型。本研究随机选取我室繁育并鉴定的子一代hAPPSWE基因阳性鼠(hAPPSWE+)和hAPPSWE基因阴性鼠(hAP... 为探讨老年性痴呆(AD)转基因模型Tg2576(hAPPSWE)鼠阳性子一代鼠的病理和行为学变化,确定其是否具有亲代的性状,为AD研究提供理想的动物模型。本研究随机选取我室繁育并鉴定的子一代hAPPSWE基因阳性鼠(hAPPSWE+)和hAPPSWE基因阴性鼠(hAPPSWE-),分别在4、7、9月龄时经Y迷宫及15月龄时经水迷宫检测其行为学变化和脑内病理变化,并对皮质和海马的淀粉样斑块进行定量研究。结果显示:(1)4月龄和7月龄的子一代hAPPSWE+鼠的空间辨别学习记忆能力与hAPPSWE-鼠相比,差异无显著性(P>0.05),但9月龄时两者之间的差异有高度显著性(P<0.01);(2)在4月龄和7月龄的子一代hAPPSWE+鼠的脑组织切片上免疫组化染色未观察到淀粉样斑块,9月龄时均观察到明显的淀粉样斑块沉积,但hAP-PSWE-鼠无论在任何1个月龄均未观察到淀粉样斑块沉积;(3)定量结果显示9月龄的子一代hAPPSWE+鼠的皮层淀粉样斑块占整个皮层面积的0.21%,海马的淀粉样斑块占海马面积的0.14%,而15月龄时其淀粉样斑块的数量和面积增加明显,占整个皮层面积的4.26%,海马的淀粉样斑块占海马面积的2.51%。上述结果表明子一代hAPPSWE+鼠的行为学变化及脑内淀粉样斑块出现的时间、部位、类型与亲代一致。因此,子一代hAPPSWE+鼠和其亲代一样可用于AD研究,本实验的定量结果也为评价AD的干预治疗效果提供了参考数据。 展开更多
关键词 ALZHEIMER病 动物模型 病理 认知行为 Tg2576鼠/hAPPSWE鼠
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^(188)Re-7E11C5.3抑制前列腺癌细胞增殖 被引量：3
3
作者 陈维真 张勇 +3 位作者 卢汉平 梁昌盛 谢瑶 刘长征 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期2051-2053,共3页
目的:探讨铼-188(188Re)标记前列腺特异膜抗原单克隆抗体7E11C5.3(188Re-7E11C5.3)对前列腺癌细胞系LNCaP的体外抑制作用。方法:采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物,纸层析法测定标记率和放化纯度,直线回归外推法测定免... 目的:探讨铼-188(188Re)标记前列腺特异膜抗原单克隆抗体7E11C5.3(188Re-7E11C5.3)对前列腺癌细胞系LNCaP的体外抑制作用。方法:采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物,纸层析法测定标记率和放化纯度,直线回归外推法测定免疫活性分数。四唑盐(MTT)法测定其体外细胞毒作用。结果:188Re-7E11C5.3的标记率为(93.16±2.18)%,放化纯度为(95.62±0.48)%,免疫活性分数为(74.86±1.86)%。188Re-7E11C5.3对LNCaP细胞的生长抑制作用明显强于188Re标记的正常鼠IgG(mIgG)和游离188ReO4-,其半数有效抑制浓度(IC50)分别为(23.38±3.73)×107Bq/L,(59.21±8.02)×107Bq/L和(68.89±10.91)×107Bq/L。结论:188Re-7E11C5.3能有效抑制体外培养LNCaP细胞的增殖,可用于前列腺癌的放射免疫治疗。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 放射免疫疗法 抗体 单克隆 前列腺特异膜抗原 铼-188
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阿尔茨海默病患者血清中抗淀粉样蛋白抗体的免疫耐受 被引量：2
4
作者 杨志勇 汪华侨 +3 位作者 徐杰 谢瑶 袁群芳 姚志彬 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期929-931,共3页
目的:研究阿尔茨海默病(AD)血清中抗Aβ抗体与淀粉样蛋白结合的特性。方法:以AD患者和健康老人的血清作一抗,①用组织淀粉样斑块免疫反应(TAPIR)观察与Tg2576鼠脑内老年斑结合能力;②Western blot检测与Aβ42-GST融合蛋白的结合能力;③... 目的:研究阿尔茨海默病(AD)血清中抗Aβ抗体与淀粉样蛋白结合的特性。方法:以AD患者和健康老人的血清作一抗,①用组织淀粉样斑块免疫反应(TAPIR)观察与Tg2576鼠脑内老年斑结合能力;②Western blot检测与Aβ42-GST融合蛋白的结合能力;③将Aβ42与PC12细胞培养,加入健康老人和AD患者的血清后,MTT法观察PC12细胞存活率。结果:AD患者的血清中抗Aβ抗体与成熟老年斑和Aβ42-GST融合蛋白的结合能力较弱;加入AD血清后,PC12细胞的A值较健康老人血清相比下降明显(P<0.01)。结论:AD血清中抗Aβ抗体对淀粉样蛋白可能存在着免疫耐受。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 抗淀粉样蛋白抗体 免疫耐受性
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EGb761促进臂丛根性撕脱伤运动神经元功能修复的多靶点机制 被引量：1
5
作者 刘佛林 汪丽清 +3 位作者 周丽华 袁群芳 吴国珍 吴武田 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期634-639,共6页
【目的】研究银杏叶标准提取物(EGb761)保护创伤脊髓运动神经元的细胞机制。【方法】成年Sprague-Dawley雄性大鼠行臂丛神经根撕脱术后,随机分为:撕脱组(生理盐水治疗)和EGb761组[EGb761100mg/(kg·d)治疗]。各组动物分别存活5d,2、... 【目的】研究银杏叶标准提取物(EGb761)保护创伤脊髓运动神经元的细胞机制。【方法】成年Sprague-Dawley雄性大鼠行臂丛神经根撕脱术后,随机分为:撕脱组(生理盐水治疗)和EGb761组[EGb761100mg/(kg·d)治疗]。各组动物分别存活5d,2、4、6周后处死。硝酸还原酶法检测大鼠脊髓组织NO含量和cNOS酶活力,取C7节段切片行胆碱乙酰转化酶(ChAT)、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)免疫组化、NADPH-d酶组化和中性红活细胞染色。【结果】EGb761组与撕脱组相比:不仅降低脊髓组织NO含量(μmol/g)(2周组0.24vs0.36、4周组0.22vs0.30、6周组0.19vs0.23;P均<0.05),也降低脊髓组织cNOS酶活力(U/mg)(5d组0.047vs0.057、2周组0.13vs0.20、4周组0.065vs0.14、6周组0.061vs0.083;P均<0.05)。EGb761恢复部分损伤运动神经元的ChAT活性、EGb761降低nNOS蛋白的异位表达,NADPH表达率(%)(2周组26.0vs40.7、4周组21.7vs36.9、6周组18.2vs26.7、8周组12.6vs20.9;P均<0.05);EGb761提高损伤运动神经元的生存率(%)(5d组92.2vs87.1、2周组77.1vs71.3、4周组56.8vs49.8、6周组48.0vs43.4、8周组31.3vs22.0;P均<0.05)。【结论】EGb761可能通过多靶点干扰损伤运动神经元的基因表达、蛋白酶活性以及代谢进程,减少臂丛撕脱伤诱导的运动神经元死亡。 展开更多
关键词 银杏叶标准化提取物(EGb761) 神经损伤和修复 运动神经元 脊髓
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正常成鼠海马不同部位CA3区巢蛋白、神经肽Y表达观察 被引量：1
6
作者 孙国刚 范光碧 +3 位作者 陈波 徐杰 高小青 聂业 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1714-1715,共2页
目的和方法通过免疫组织化学和苏木精复染的方法,观察正常成年SD大鼠海马CA3区锥体细胞层内巢蛋白(nestin)、神经肽Y(NPY)的表达特点。结果整个海马内各部CA3区的巢蛋白、NPY免疫阳性反应都是高度一致的。在背侧海马中部和腹侧海马CA3... 目的和方法通过免疫组织化学和苏木精复染的方法,观察正常成年SD大鼠海马CA3区锥体细胞层内巢蛋白(nestin)、神经肽Y(NPY)的表达特点。结果整个海马内各部CA3区的巢蛋白、NPY免疫阳性反应都是高度一致的。在背侧海马中部和腹侧海马CA3区的巢蛋白、NPY和NF200强阳性细胞密集地排列,而背侧海马嘴部和尾部CA3区的三类强阳性细胞则呈稀疏排列,后者散在地分布在大胞体的弱阳性和阴性反应的细胞之间。结论成鼠海马各部CA3区锥体层能一致地表达巢蛋白和NPY,其中免疫强阳性细胞细胞属于成熟的神经元,而弱阳性或阴性细胞则属于神经前体细胞。 展开更多
关键词 海马 巢蛋白 神经肽Y 免疫组织化学
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前列腺癌单克隆抗体与平阳霉素偶联物导向化疗的体外作用 被引量：1
7
作者 陈维真 张勇 +3 位作者 梁昌盛 谢瑶 温新桥 高新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期406-408,共3页
目的探讨导向化疗对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用。方法以葡聚糖为中介体制备抗前列腺癌单克隆抗体7E11C5.3与平阳霉素(PYM)的偶联物,用间接ELISA法测定其免疫活性,2,3,5-氯化三苯基四氮唑法测定其抑菌活性,四唑盐法测定其体外细胞毒... 目的探讨导向化疗对前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用。方法以葡聚糖为中介体制备抗前列腺癌单克隆抗体7E11C5.3与平阳霉素(PYM)的偶联物,用间接ELISA法测定其免疫活性,2,3,5-氯化三苯基四氮唑法测定其抑菌活性,四唑盐法测定其体外细胞毒作用。结果偶联物中7E11C5.3和PYM的摩尔比为1:54,偶联后单抗的免疫活性降低了10%￣20%,偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的25%,偶联物和游离PYM对体外培养的LNCaP细胞50%抑制浓度分别为(9.41±1.98)μg/ml和(29.92±7.88)μg/ml。结论7E11C5.3-PYM偶联物的体外抗前列腺癌作用强于游离PYM。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 单克隆抗体 平阳霉素 抗体导向化疗
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Aβ不同片段肽疫苗免疫鼠后血清对Aβ_(42)诱导细胞毒性作用的影响
8
作者 李国营 胡金家 +3 位作者 林贤 徐杰 汪华侨 姚志彬 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期102-104,109,共4页
【目的】探讨Aβ42及其亚单位疫苗免疫鼠后其血清对Aβ42诱导的细胞毒性作用的影响,为其体内应用提供依据。【方法】①用间接ELISA法测定Aβ42和K7Aβ36-42疫苗接种鼠后的血清中抗体滴度;②将不同浓度的Aβ42和K7Aβ36-42加入培养有PC1... 【目的】探讨Aβ42及其亚单位疫苗免疫鼠后其血清对Aβ42诱导的细胞毒性作用的影响,为其体内应用提供依据。【方法】①用间接ELISA法测定Aβ42和K7Aβ36-42疫苗接种鼠后的血清中抗体滴度;②将不同浓度的Aβ42和K7Aβ36-42加入培养有PC12细胞的96孔培养板中,检测其对PC12细胞的毒性作用;③用不同浓度的Aβ42及K7Aβ36-42疫苗免疫鼠血清加入含Aβ42的培养基中,与PC12一起孵育培养,7d后用MTT法和酶标仪测定存活细胞的A值。【结果】①Aβ42和K7Aβ36-42疫苗接种后血清的平均抗体滴度分别为1∶6800和1∶4600;②10mg/L和20mg/LAβ42组细胞的存活率与空白组相比差异有显著性(P<0.01);③各浓度K7Aβ36-42组与空白组相比差异均无显著性(P>0.05)。在浓度为20mg/LAβ42的培养基中加入Aβ42疫苗或K7Aβ36-42疫苗免疫鼠血清,各浓度的免疫鼠血清组和阳性对照组相比差异均有显著性(P<0.05或P<0.01)。【结论】Aβ42疫苗和Aβ亚单位疫苗免疫鼠后,其血清均能在体外抑制Aβ42对细胞产生的毒性作用。 展开更多
关键词 β淀粉样蛋白 疫苗 免疫血清 细胞毒性 老年性痴呆 细胞毒性 间接ELISA法 老年斑
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Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性 被引量：4
9
作者 杨学森 汪华侨 +5 位作者 袁群芳 谢瑶 姚志彬 叶小舟 吴继明 邹爱国 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期121-125,共5页
【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清... 【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。 展开更多
关键词 Fmoc固相多肽直接合成 多重抗原肽 Aβ1-15疫苗 阿尔茨海默病
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