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SARS冠状病毒N蛋白的表达及其诱导的免疫应答 被引量:3
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作者 袁仕善 吴少庭 +4 位作者 秦莉 张仁利 高世同 黄达娜 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第10期855-859,共5页
目的表达和纯化SARS冠状病毒的N蛋白,分析其诱导的免疫应答。方法从重组克隆pMD18-N中切取N基因的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-P... 目的表达和纯化SARS冠状病毒的N蛋白,分析其诱导的免疫应答。方法从重组克隆pMD18-N中切取N基因的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达N蛋白,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答。结果N基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌表达了SARS冠状病毒的N蛋白;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被重组N蛋白的GST融合蛋白的免疫血清识别,并诱导小鼠产生了高滴度的抗体和Th1/Th2型的免疫应答。结论成功构建了N蛋白的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 SARS 冠状病毒 N蛋白 纯化 免疫应答
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重组弓形虫GRA8的表达及其诱导的免疫应答 被引量:2
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作者 袁仕善 吴少庭 +3 位作者 张仁利 高世同 黄达娜 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期991-994,共4页
目的表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答。方法从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG... 目的表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答。方法从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达GRA8,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答。结果GRA8基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌中未见GRA8的明显表达;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被弓形虫感染兔血清识别。结论成功构建了GRA8的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白 GRA8 纯化 免疫应答
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弓形虫GRA8真核表达质粒的构建与体外表达
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作者 袁仕善 吴少庭 +3 位作者 黄达娜 张仁利 高世同 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第7期566-569,共4页
目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒。方法设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-... 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒。方法设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVAC而构建真核重组表达质粒pVAC-GRA8,转化大肠杆菌DH5α;将构建的真核重组表达质粒pVAC-GRA8转染vero细胞,分析转染vero细胞中GRA8的表达状况。结果PCR扩增出GRA8基因的特异片段,所获克隆的序列正确,并被亚克隆到真核表达载体pVAC,构建了真核重组表达质粒pVAC-GRA8;在vero细胞中获得表达。结论成功构建了GRA8的真核重组表达质粒pVAC-GRA8。 展开更多
关键词 弓形虫 致密颗粒蛋白 GRA8 表达 RT-PCR
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弓形虫GRA8真核表达质粒的构建与体外表达
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作者 袁仕善 吴少庭 +3 位作者 黄达娜 张仁利 高世同 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期86-87,共2页
  构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒.设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVA C而构建真核重组表达质粒pVAC-GRA8...   构建弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的真核重组表达质粒.设计GRA8的特异引物,采用多聚酶链反应(PCR)技术从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码GRA8的基因片段,经克隆至pMD18-T载体后,亚克隆至真核表达载体pVA C而构建真核重组表达质粒pVAC-GRA8,转化大肠杆菌DH5α;将构建的真核重组表达质粒pVAC-GRA8转染vero细胞,分析转染vero细胞中GRA8的表达状况.PCR扩增出GRA8基因的特异片段,所获克隆的序列正确,并被亚克隆到真核表达载体pVAC,构建了真核重组表达质粒pVAC-GRA8;在vero细胞中获得表达.成功构建了GRA8的真核重组表达质粒pVAC-GRA8.…… 展开更多
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重组弓形虫GRA8的表达及其诱导的免疫应答
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作者 袁仕善 吴少庭 +3 位作者 张仁利 高世同 黄达娜 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期87-,共1页
  表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答.从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,S...   表达和纯化弓形虫RH株GRA8的截短型片段,分析其诱导的免疫应答.从重组克隆pMD18-GRA8中切取GRA8的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达GRA8,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答.GRA8基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌中未见GRA8的明显表达;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被弓形虫感染兔血清识别.成功构建了GRA8的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性.…… 展开更多
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弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的原核表达分析
6
作者 袁仕善 吴少庭 +3 位作者 张仁利 高世同 黄达娜 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期87-,共1页
  构建弓形虫GRA8的原核重组表达质粒,分析其表达状况.采用PCR技术扩增GRA8及其截短型片段的基因序列,经克隆后,亚克隆至原核表达载体中,构建GRA8及其截短型片段的重组表达质粒,分析GRA8的表达;将各重组菌进行诱导,从其裂解上清中纯...   构建弓形虫GRA8的原核重组表达质粒,分析其表达状况.采用PCR技术扩增GRA8及其截短型片段的基因序列,经克隆后,亚克隆至原核表达载体中,构建GRA8及其截短型片段的重组表达质粒,分析GRA8的表达;将各重组菌进行诱导,从其裂解上清中纯化目的蛋白.GRA8基因被正确插入原核表达质粒中;原核重组表达质粒在大肠杆菌中表达GRA8的水平低,几乎无完整GRA8的表达;纯化的截短型GRA8能被弓形虫感染兔血清识别.GRA8的原核重组表达质粒表达GRA8的水平低,纯化的截短型GRA8具有良好的免疫活性.…… 展开更多
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SARS冠状病毒S蛋白部分序列1的纯化及免疫活性分析
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作者 袁仕善 吴少庭 +4 位作者 秦莉 黄达娜 张仁利 高世同 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期49-50,共2页
  表达和纯化SARS冠状病毒S蛋白部分序列1(S1),分析其诱导的免疫应答.大量诱导表达SARS冠状病毒S1蛋白,亲和层析予以纯化;用纯化蛋白免疫小鼠,分析S1蛋白诱导的免疫应答.亲和层析纯化获得能被SARS病人混合血清识别的S1蛋白,融合蛋白...   表达和纯化SARS冠状病毒S蛋白部分序列1(S1),分析其诱导的免疫应答.大量诱导表达SARS冠状病毒S1蛋白,亲和层析予以纯化;用纯化蛋白免疫小鼠,分析S1蛋白诱导的免疫应答.亲和层析纯化获得能被SARS病人混合血清识别的S1蛋白,融合蛋白免疫小鼠三次后诱导产生了高滴度的抗体和Th1/Th2型的免疫应答.纯化的S1蛋白有良好的免疫学活性.…… 展开更多
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SARS冠状病毒N蛋白的表达及其诱导的免疫应答
8
作者 袁仕善 吴少庭 +4 位作者 秦莉 张仁利 高世同 黄达娜 余新炳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第z1期50-,共1页
  表达和纯化SARS冠状病毒的N蛋白,分析其诱导的免疫应答.方法从重组克隆pMD18-N中切取N基因的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-P...   表达和纯化SARS冠状病毒的N蛋白,分析其诱导的免疫应答.方法从重组克隆pMD18-N中切取N基因的插入片段,亚克隆至原核表达质粒pET-23a(+)中,转化大肠杆菌BL21,PCR和酶切鉴定转化菌落的插入序列;将构建的原核表达菌株经IPTG诱导,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达;大量诱导表达N蛋白,金属螯合层析予以纯化,将纯化蛋白免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答.N基因的特异片段被亚克隆到原核表达质粒pET-23a(+),在大肠杆菌表达了SARS冠状病毒的N蛋白;表达的蛋白经金属螯合层析获得纯化;纯化蛋白能被重组N蛋白的GST融合蛋白的免疫血清识别,并诱导小鼠产生了高滴度的抗体和Th1/Th2型的免疫应答.成功构建了N蛋白的原核重组表达质粒,纯化的蛋白具有良好的抗原性.…… 展开更多
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