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人血管抑制素基因克隆、表达和生物活性分析
被引量：
3
1
作者
张爱联
罗进贤
+1 位作者
张添元
罗学斌
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期56-59,共4页
应用PCR技术从人胎肝cDNA文库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GS115 ,经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GS115 (pPIC9KA3)...
应用PCR技术从人胎肝cDNA文库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GS115 ,经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GS115 (pPIC9KA3)。再用G418筛选法 ,在含不同浓度的G418平板上筛选高拷贝整合的转化子。对高拷贝整合的转化子进行发酵培养和诱导表达。SDS_PAGE及Western印迹分析显示 :表达产物约占胞外蛋白的 43% ,相当于 94mg L ,并具有免疫活性。并能抑制bFGF诱导的鸡胚尿囊膜新生血管的生成。还对用G418筛选高拷贝整合转化子的方法做了探索。
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关键词
人血管抑制素
基因表达
毕节酵母
G418
血管生成
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职称材料
内皮细胞抑制素在毕节酵母中的表达与活性分析
被引量：
2
2
作者
吴江雪
符武钊
+2 位作者
张添元
罗进贤
吴群悦
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期83-86,共4页
采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K＿EDN转化毕节酵母GS115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(pPIC9K＿EDN)。SDS＿P...
采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K＿EDN转化毕节酵母GS115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(pPIC9K＿EDN)。SDS＿PAGE分析结果显示:人内皮细胞抑制素在重组酵母GS115(pPIC9K＿EDN)中获得高效表达。用30L发酵罐构对建的工程菌进行高密度发酵,经甲醇诱导48h,生物量达到250OD,分泌量为150mg L,发酵液经SPStreamline,SPSepharoseFF阳离子交换柱和SepharoseHeparinHiTrap柱纯化,产物纯度达到98%。纯化产物具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。
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关键词
人内皮细胞抑制素
基因表达
毕节酵母
高密度发酵
纯化
生物活性分析
肿瘤
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职称材料
高密度发酵P.pastoris组成型表达纤维素二糖水解酶
3
作者
崔艳艳
易国辉
+3 位作者
屠发志
张添元
罗进贤
张爱联
《热带作物学报》
CSCD
2010年第8期1293-1297,共5页
用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发...
用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L。其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。
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关键词
纤维素二糖水解酶
毕赤酵母
基因表达
纤维素酶活力
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职称材料
题名
人血管抑制素基因克隆、表达和生物活性分析
被引量：
3
1
作者
张爱联
罗进贤
张添元
罗学斌
机构
中山大学基因工程教育部重点实验室生物化学系
出处
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期56-59,共4页
基金
广州市"2 2 5"科技工程资助项目 ( 99-Z - 0 0 4- 0 1)
文摘
应用PCR技术从人胎肝cDNA文库中扩增了人血管抑制素基因。将克隆的基因重组进酵母质粒pPIC9K获得含该基因的重组质粒pPIC9KA3。用电激法将质粒pPIC9K转化毕节酵母GS115 ,经PCR检测获得含人血管抑制素基因的酵母工程菌GS115 (pPIC9KA3)。再用G418筛选法 ,在含不同浓度的G418平板上筛选高拷贝整合的转化子。对高拷贝整合的转化子进行发酵培养和诱导表达。SDS_PAGE及Western印迹分析显示 :表达产物约占胞外蛋白的 43% ,相当于 94mg L ,并具有免疫活性。并能抑制bFGF诱导的鸡胚尿囊膜新生血管的生成。还对用G418筛选高拷贝整合转化子的方法做了探索。
关键词
人血管抑制素
基因表达
毕节酵母
G418
血管生成
Keywords
angiostatin
gene expression
P^pastoris
G418
angiogenesis
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
内皮细胞抑制素在毕节酵母中的表达与活性分析
被引量：
2
2
作者
吴江雪
符武钊
张添元
罗进贤
吴群悦
机构
中山大学基因工程教育部重点实验室生物化学系
出处
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期83-86,共4页
基金
广东省重点科技攻关资助项目(2KMO2502G)
文摘
采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因。经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K＿EDN转化毕节酵母GS115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(pPIC9K＿EDN)。SDS＿PAGE分析结果显示:人内皮细胞抑制素在重组酵母GS115(pPIC9K＿EDN)中获得高效表达。用30L发酵罐构对建的工程菌进行高密度发酵,经甲醇诱导48h,生物量达到250OD,分泌量为150mg L,发酵液经SPStreamline,SPSepharoseFF阳离子交换柱和SepharoseHeparinHiTrap柱纯化,产物纯度达到98%。纯化产物具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成。
关键词
人内皮细胞抑制素
基因表达
毕节酵母
高密度发酵
纯化
生物活性分析
肿瘤
Keywords
human endostatin
gene expression
P. pastoris
high cell density culture
purification and bioactivity
分类号
R730.1 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
高密度发酵P.pastoris组成型表达纤维素二糖水解酶
3
作者
崔艳艳
易国辉
屠发志
张添元
罗进贤
张爱联
机构
中国热带农业科学院热带
生物
技术研究所农业部热带作物
生物
技术
重点
开放
实验室
海南
大学
农学院．海南儋州
中山大学
基因
工程
教育部
重点
实验室
／
生物化学系
出处
《热带作物学报》
CSCD
2010年第8期1293-1297,共5页
基金
国家“863”项目(No.2007AA021307)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目(No.ITBBZX2008-4-2)资助
文摘
用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L。其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。
关键词
纤维素二糖水解酶
毕赤酵母
基因表达
纤维素酶活力
Keywords
Cellobiohydrolase
Pichiapastoris
Gene expression
Enzyme activity
分类号
Q556 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人血管抑制素基因克隆、表达和生物活性分析
张爱联
罗进贤
张添元
罗学斌
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
内皮细胞抑制素在毕节酵母中的表达与活性分析
吴江雪
符武钊
张添元
罗进贤
吴群悦
《中山大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
高密度发酵P.pastoris组成型表达纤维素二糖水解酶
崔艳艳
易国辉
屠发志
张添元
罗进贤
张爱联
《热带作物学报》
CSCD
2010
0
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职称材料
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