目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs酶谱变化,W estern b lotting及RT-PCR...目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs酶谱变化,W estern b lotting及RT-PCR检测转染肝细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的变化。以PRL-2磷酸酯酶特异性抑制剂处理转染细胞,观察抑制PRL-2活性对上述指标的影响。结果:经过8周G418筛选及RT-PCR和W estern b lotting鉴定,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1。转染后的CL1细胞分泌MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2,均显著高于转染前CL1细胞的MMPs分泌(P<0.01);使用特异性抑制剂后,MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2活性显著降低(P<0.01)。W estern b lotting及RT-PCR检测显示PRL-2-CL1细胞MMP2、MMP9蛋白及mRNA含量均较转染前显著升高(P<0.05),TIMP-2则显著降低(P<0.05);使用抑制剂后,可以逆转上述变化。结论:PRL-2在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达,PRL-2基因增强肝细胞侵袭及转移能力与其提高细胞MMP2、MMP9表达,降低TIMP-2有关。展开更多
文摘目的:研究PRL-2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。方法:采用脂质体转染的方法将PRL-2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中,G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分泌MMPs酶谱变化,W estern b lotting及RT-PCR检测转染肝细胞MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的变化。以PRL-2磷酸酯酶特异性抑制剂处理转染细胞,观察抑制PRL-2活性对上述指标的影响。结果:经过8周G418筛选及RT-PCR和W estern b lotting鉴定,获得稳定表达PRL-2的细胞亚系PRL-2-CL1。转染后的CL1细胞分泌MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2,均显著高于转染前CL1细胞的MMPs分泌(P<0.01);使用特异性抑制剂后,MMP-9、活性型MMP-9和MMP-2活性显著降低(P<0.01)。W estern b lotting及RT-PCR检测显示PRL-2-CL1细胞MMP2、MMP9蛋白及mRNA含量均较转染前显著升高(P<0.05),TIMP-2则显著降低(P<0.05);使用抑制剂后,可以逆转上述变化。结论:PRL-2在永生化肝细胞中获得稳定、高效表达,PRL-2基因增强肝细胞侵袭及转移能力与其提高细胞MMP2、MMP9表达,降低TIMP-2有关。
